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《微波消融术对大鼠肝泡型包虫病治疗效果的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
分类号：R383密级：公开UDC：610编号：2018151051090042015级攻读硕士学位研究生毕业论文微波消融术对大鼠肝泡型包虫病治疗效果的实验研究Thetherapyeffectofmicrowaveablationtohepaticalveolarechinococcosisinratmodel指导教师：任利教授学生姓名：周启锋学科专业名称：外科学（普通外科）研究方向：临床技能训练与研究学院(系、部)：青海大学医学院二零一八年三月 QinghaiUniversityMasterDissertationThetherapyeffectofmicrowaveablationtohepaticalveolarechinococcosisinratmodelSupervisor:RenLiprofessorCandidate:ZhouQifengAcademicMajorApplidedfor:SurgerySpecificMajor:GeneralSurgeryDepartmentCollege(Department):MedicalCollegeMay,2018 独创性Ｗ明水人Ａ叫所Ｖ义我个人作＃师指ｗ卜ｉｉＨ，ｊ的研宂Ｕ１及取以的研允成！４！Ｇ认叫Ｘ【ｉ．呔义屮ｄ打你明⑴川的内衿外，小唸人戍Ｉ怵Ａ洫挤‘Ｓｒｉ的０丨允成Ｌ（丨本；￡的研宂做出奶献的个人和休，坊ＬｉｆＶｉ屮以叫确＂八丨小叫扣人判本屮明的认？彳卜姑火山本人水扣，ｉ穿位论ｃ怍荇签名：＼％ｍＭＪｔｆｌ：ＺｆｌＳＳ）ｉ＾／Ｍ＃位论文版权使爪授权书＊＊：：、ｔ．斛７柃打关保怊使川７Ｒ论文的！ｉｌｉ．ＹＵｆ心ＴＰｉＵ保Ｗ汴Ａｉｆｃ之丨１片究令／（，？ｗ讲制个人ｗｕｉ允ｎ论义敁ｍｔｕ、ｉｍ太＂知如门成机抅这交论文ｆｍ卬件和也子版ｖ？？－？？？丨１１】人＂．丨以、７／ｍ彳论文的令部成邡分内奸编入（丨关数据七迸丨ｉ检索采川蟛ｎ细印、＿＿．、，：ｊ：ｉ．：；丨位沦文》木论文丨Ｈ保密□ｉｆ〗％ｕｉｆｒ；ｕｐｊｒｍ以／和编木７？Ｖ：适川本授权Ｂ？Ｗｗｒ年解密．隱１７！：丨｜＾彳繼］，ｆ＇：＾＾｛ｉ＜ｊＴａＶｉｎＪｈ＾３ｉｌ１１ｉｎｙｊｔｒｕｉｊｆＳ！ｉ１ 青海大学硕士学位论文摘要摘要目的：在大鼠模型上探讨微波消融术对肝泡型包虫病的治疗效果。方法：对70只大鼠开腹后肝内注射多房棘球蚴混悬液，建立大鼠肝泡型包虫病原位模型。模型接种6个月后，开腹测量病灶直径大小；对建模成功的24只大鼠随机分为实验组（n=15只）和对照组（n=9只），实验组大鼠开腹行病灶微波消融术治疗，对照组大鼠开腹后关腹。实验干预2个月后，测量并比较病灶直径大小；ELISA法检测大鼠血清IL-2和IL-10的含量；处死大鼠后取病灶及其边缘带组织行苏木精-伊红染色观察组织病理学变化，免疫组化法检测IL-2和IL-10在病灶边缘带组织的表达。结果：1.接种6个月后开腹观察，建模成功率为34.3%（24/70）；实验干预2月后，实验组大鼠存活9只（9/15），对照组大鼠存活5只（5/9）。2.微波消融组大鼠干预前病灶直径为0.84±0.19cm，实验干预2月后，病灶直径为0.65±0.13cm(t=3.12,P<0.05)；对照组大鼠干预前及干预2月后病灶直径分别为0.81±0.13cm和1.03±0.18cm（t=-4.75,P<0.05）。3.实验组与对照组大鼠病灶边缘带组织IL-2的表达水平分别为129.88±28.25与83.56±15.28(t=5.87，P<0.05)；实验组与对照组大鼠病灶边缘带组织IL-10的表达水平分别为125.39±9.60与162.83±16.31(t=-9.38，P<0.05)。4.微波消融组与对照组大鼠血清IL-2的表达水平分别为7914.0±2567.8ng/L和5882.7±1781.9ng/L（t=3.40，P<0.05）；微波消融组与对照组大鼠血清IL-10的表达水平分别为95.4±17.4ng/L和113.8±26.9ng/L（t’=-3.05，P<0.05）。结论：1.体内实验研究提示微波消融术通过热效应可抑制肝泡型包虫病的进一步发展。2.通过大鼠血清和组织学IL-2和IL-10的检测结果提示，微波消融术可能通过调节大鼠机体免疫抑制肝泡型包虫病的生长。关键词：肝脏泡型包虫病微波消融术大鼠IL-2IL-10I 青海大学硕士学位论文AbstractAbstractObjective：Toinvestigatethetherapeuticeffectofmicrowaveablation(MWA)tohepaticalveolarechinococcosis(HAE)inratmodel.Methods：Toestablishhepaticalveolarechinococcosismodelsin70ratsbylaparotomyandinjectedAEsuspension.Atotalof24ratsweresuccessfullyestablishedaftermodelestablished6months,andrandomlydividedintocontrolgroup(n=9)andtestgroup(n=15).ThetestgroupswereintervenedbyMWA,whilethecontrolgroupswereperformedlaparotomyandsuture.Thelesiondiameterswerecomparedbetweenpre-operationand2monthsafteroperation.Alltheratsweresacrificedat2monthsafterexperimentalintervention.SerumIL-2andIL-10weredetectedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).Pathologicalchangeswereobservedbyhematoxylin-eosinstaining(HE).ThelesionmarginalzonelevelsofIL-2andIL-10weredetectedbyimmunohistochemistrystaining.Results：1.ThesuccessfulrateofHAEmodelwas34.3%(24/70)at6months.Thestudygroupsurvived9rats(9/15)andthecontrolswere5rats(5/9)afterMWAtherapy2months.2.Thelesiondiametersinthetestgrouppre-operationwere0.84±0.19cmand0.65±0.13cmafterpost-operation2months(t=3.12，P<0.05),andinthecontrolgroupwere0.81±0.13cmat6monthsand1.03±0.18cmat8months(t=-4.75，P<0.05).3.ThelesionmarginalzonelevelsofIL-2inthemodeltestgroupweresignificantlyhigherthaninthecontrolgroup,whichlevelswererespectively129.88±28.25and83.56±15.28(t=5.87，P<0.05).ThelesionmarginalzonelevelsofIL-10inthemicrowaveablationgroupdecreasedincomparisontothoseinthecontrols,whichlevelswererespectively125.39±9.60ng/Land162.83±16.31(t=-9.38，P<0.05).4.ThelevelofserumIL-2inthetestgroupandcontrolgroupwererespectively7914.0±2567.8ng/Land5882.7±1781.9ng/L,differencebetweenthetwogroupshadII 青海大学硕士学位论文Abstractstatisticalsignificance(t=3.40，P<0.05).SerumlevelsofIL-10inthetestgroupwere95.4±17.4ng/Land113.8±26.9ng/Linthecontrolgroup(t’=-3.05，P<0.05).Conclusion：1.InvivoexperimentssuggestthattheelectromagneticmicrowaveproduceheatcouldinhibitthefurthergrowthoftheHAElesion.2.TheIL-2levelsandIL-10ofthelesionmarginalzoneandserumafterMWAtherapysuggestthatMWAmayinhibitfocalgrowththroughimmunomodulation.Keywords：liveralveolarechinococcosismicrowaveablationratIL-2IL-10III 青海大学硕士学位论文目录目录摘要...............................................................IAbstract..........................................................II目录..............................................................IV主要符号对照表....................................................VI第1章引言.......................................................1第2章对象与方法.................................................22.1实验动物................................................22.2实验材料................................................22.2.1实验主要试剂..........................................22.2.2实验主要器材..........................................22.3实验技术路线图..........................................32.4AE混悬液的配置与HAE模型的建立..........................32.4.1AE混悬液的配置........................................32.4.2建立大鼠HAE模型......................................42.5实验动物分组与实验干预..................................42.5.1实验动物分组..........................................42.5.2实验干预..............................................42.6病理石蜡切片............................................52.7病理切片HE染色.........................................52.8免疫组化法测定HAE边缘带组织IL-2和IL-10的表达.........52.9ELISA测定HAE大鼠血清IL-2和IL-10水平..................6IV 青海大学硕士学位论文目录2.10统计学方法.............................................6第3章结果.......................................................73.1大鼠及病灶一般情况......................................73.1.1大鼠一般情况..........................................73.1.2病灶一般情况..........................................73.1.3病灶MWA治疗..........................................83.1.4病理标本..............................................83.2病灶大小................................................93.3组织切片HE染色........................................113.4免疫组化...............................................113.5ELISA..................................................13第4章讨论......................................................154.1MWA在肝癌中的应用......................................154.1.1MWA在肝癌中的应用....................................154.1.2MWA治疗肝癌的优势....................................154.2HAE与肝癌的相似性......................................154.3IL-2和IL-10在HAE中的应用.............................164.4大鼠HAE微波消融术后病灶与组织学变化....................164.5不足之处与展望.........................................17第5章结论......................................................18参考文献..........................................................19致谢..............................................................22附录A综述.......................................................23作者简介..........................................................29V 青海大学硕士学位论文主要符号对照表主要符号对照表英文缩写英文全称中文全称HAEhepaticalveolarechinococcosis肝泡型包虫病/肝泡状棘球蚴病MWAmicrowaveablation微波消融术ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验HEhematoxylin-eosinstaining苏木素-伊红染色IL-2interleukin-2白介素2IL-10interleukin-10白介素10PBSphosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液DBA3,3’-diaminobenzidine二氨基联苯胺H2O2Hydrogenperoxide过氧化氢TBStriethanolaminebufferedsaline三乙醇胺缓冲盐酸水溶液AODmeanopticaldensity平均光密度ODabsorbance吸光度VI 青海大学硕士学位论文第1章引言第1章引言肝泡型包虫病（Hepaticalveolarechinococcosis,HAE）是人感染多房棘球蚴绦虫幼虫虫卵所引起的一种人畜共患寄生虫病。人类感染该病的主要途径为：误食被多房棘球蚴虫卵污染的食物或水源后，虫卵在小肠内孵育繁殖成六钩蚴,随着血液回流至肝脏形成泡球蚴而致病。泡球蚴在肝内以外殖性芽生增生为主，无限制繁殖出子囊和孙囊，随着病灶体积不断的增大可破坏血管、胆道以及邻近脏器，产生肝功能损害、感染、黄疸、恶病质和压迫邻近脏器等症状[1]，也可经淋巴管道、血行或种植转移至其它脏器[2]，最终导致肝衰竭或多器官功能衰竭甚至死亡，素有“虫癌”之称[3]。HAE流行于北半球高纬度的寒冷地区[4]，我国包虫病主要高发于新疆、青海、甘肃、宁夏和四川等省份[5]。经统计，不经正规治疗或治疗不及时，10~15年间的病死率高达90%以上[6]，人感染HAE率约3.1%~31.5%，并呈上升趋势，患病率大约为0.5%~5.0%[7]。全球AE患者的疾病负担高达666,000伤残调整寿命年，而中国每年新发人数占全球的91%[8]。严重影响了农牧业经济及人类健康水平，已成为世界公共卫生问题，给人类健康带来极大的威胁[9]。目前，HAE尚无早期诊断方法及特效药物，在治疗上主要以根治性手术为主，药物等其他治疗手段为辅[10]。但是HAE早期无明显症状，易忽视且不易诊断，多数患者待出现临床症状而就诊时已至中晚期丧失手术机会[11-12]。对于早期HAE行手术治疗，术中易损伤正常组织器官，术后并发症多，患者承受的痛苦较大，住院周期长，医疗费用高昂，急需寻求一种简单、微创的治疗手段。随着微创理念不断提升以及热消融技术的快速发展，微波消融术（microwaveablation，MWA）已广泛用于早期肝脏恶性肿瘤的治疗中[13]，并且已取得良好的治疗效果。但是MWA在HAE的治疗应用仅有极少量文献报道[14]，仍需大量的实验研究为临床治疗提供证据。基于HAE与肝癌的相似性，本实验建立大鼠HAE原位模型，对大鼠HAE病灶行MWA治疗，ELISA法和免疫组化法检测IL-2和IL-10在HAE大鼠血清及病灶边缘带组织的表达水平，探讨MWA对早期HAE的治疗效果，为MWA治疗HAE奠定实验依据。1 青海大学硕士学位论文第2章对象与方法第2章对象与方法2.1实验动物70只雄性大鼠（购买于北京维通利华实验动物有限公司），体质量220g左右，8-10周龄，在清洁环境中饲养；种鼠为感染多房棘球蚴病的长爪沙鼠1只（由青海省地方病预防控制所提供）。2.2实验材料2.2.1实验主要试剂试剂生产厂家IL-2抗体（26156-1-AP）/IL-10抗体（60269-1-Ig）厦门慧嘉生物科技有限公司ELISA试剂盒（IL-2/IL-10）厦门慧嘉生物科技有限公司苏木素染色液/乙醇溶液/二甲苯溶液上海碧云天生物科技有限公司TBS溶液/BSA溶液/DAB溶液上海碧云天生物科技有限公司3%H2O2国药集团化学试剂有限公司2.2.2实验主要器材器材生产厂家便携式冷循环微波消融治疗仪[（KY-2000）,输出频率为2450MHZ、输出功率为0-120W]/微波天线南京康友微波应用研究所[（KY-2450B），针头直径为1.2mm]石蜡切片机（RMZ135）/组织摊片烤片机（BT-330）LeicaMicrosystems（德国）微波炉/冰箱中国美的集团恒温培养箱/孵育箱上海精宏实验设备有限公司多功能酶标仪（Infinite200PRO）山东爱博科技有限公司生物正置显微镜（CX31）OLYMPUS（日本）2 青海大学硕士学位论文第2章对象与方法2.3实验技术路线图建测量病灶直径大小立6肝月AE后模剖型腹分组统计实验组（MWA）分析得对照组（开关腹）出结论测量病灶直径大小2月后HE染色处病理标本病理切片死免疫组化大鼠下腔静脉采血ELISA2.4AE混悬液的配置与HAE模型的建立2.4.1AE混悬液的配置安乐死法处死长爪沙鼠，腹部备皮、常规消毒后腹正中部常规切开入腹，暴露分离泡球蚴病灶，无菌条件下取出泡球蚴组织后PBS溶液反复冲洗，仔细清除病灶周围混杂组织，无菌剪刀剪碎泡球蚴组织后于培养皿内缓慢研磨（研磨时加入适量生理盐水避免泡球蚴组织坏死），无菌盐水纱布过滤3次，分别静置5min后弃去破碎的囊壁和上层坏死的原头节，留取最下层瓷白色泡球蚴囊沙（即泡球蚴原头节），用0.9%NaCl溶液配置成20%泡球蚴原头节混悬溶液。3 青海大学硕士学位论文第2章对象与方法2.4.2建立大鼠HAE模型用0.9%NaCl溶液配置10%水合氯醛溶液，以0.3ml/100g体质量实验大鼠右下腹腹腔注射麻醉，麻醉满意后将大鼠仰卧位固定实验大鼠板上，腹部备皮，碘伏消毒后于剑突下1cm作4-5cm纵行切口并逐层切开入腹，暴露大鼠肝脏，生理盐水纱布保护周围组织，1ml注射器针头斜形30º刺入肝右叶实质约0.2cm，每只大鼠注入0.2ml泡球蚴混悬液，穿刺点压迫止血后丝线关腹（内层连续、外层间断缝合），术后常规饲养。2.5实验动物分组与实验干预模型接种6个月后行实验干预。术前6h禁食水，以上述麻醉方法麻醉大鼠，沿腹中线常规入腹，暴露大鼠肝脏及病灶组织，生理盐水纱布保护周围组织，经剖腹探查成功接种HAE大鼠共24只，游标卡尺测量病灶直径大小。2.5.1实验动物分组对于造模成功的24只HAE大鼠在干预前以抛掷硬币方法随机分为实验组（n=15只）和对照组（n=9只）。2.5.2实验干预（1）对照组：暴露泡球蚴病灶后丝线关腹（内层连续，外层间断）。（2）实验组：开腹后行病灶微波消融术治疗。术前连接好微波消融仪、治疗线和微波天线，穿刺肝叶下方垫湿盐水纱布保护肠管等其他脏器，将微波天线垂直插入肝脏病灶中心，视病灶直径大小确定穿刺深度（穿刺深度超过病灶半径），参考文献[15]操作方法及预实验效果调节输出功率为40W、时间2min，行病灶微波消融术治疗。MWA完毕后，拔出微波天线，确定无出血后丝线关腹，术后大鼠常规饲养。实验干预2个月后，两组大鼠下腔静脉采血，采血管常温静止4h后离心机2800转、15min离心收取上层血清。处死所有大鼠，取出泡球蚴病灶及距病灶边缘0.5cm肝组织，于4%多聚甲醛溶液保存固定。4 青海大学硕士学位论文第2章对象与方法2.6病理石蜡切片病理标本固定36h后，将各标本组织修剪成0.5cm3的组织块放入包埋盒中，通过不同浓度乙醇溶液脱水、二甲苯溶液透明后，石蜡包埋，石蜡切片机连续切片，每张切片厚度4μm。2.7病理切片HE染色病理石蜡切片依次经过二甲苯溶液、不同浓度乙醇溶液和蒸馏水脱蜡复水后，将切片于苏木精溶液中染色3min，自来水下冲洗后放入乙醇溶液分化，自来水下返蓝后放入苏木精溶液复染。再次不同浓度乙醇、二甲苯溶液依次脱水透明后，中性树胶封固。2.8免疫组化法测定HAE边缘带组织IL-2和IL-10的表达（1）石蜡切片37℃烘烤过夜。（2）石蜡切片脱蜡至水：二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10min）→二甲苯Ⅲ（10min）→100%乙醇（2min）→95%乙醇（2min）→90%乙醇（2min）→80%乙醇（2min）→70%乙醇（2min）→50%乙醇（2min）→蒸馏水（1min）。TBS缓冲液洗5min/3次。（3）组织切片抗原修复：病理组织切片放入缓冲液中大火至沸腾，转为小火20min后冷却至室温，TBS液洗5min/3次。（4）组织切片放入双氧水溶液中常温孵育10min。（5）TBS缓冲液洗5min/3次，甩干后5%BSA封闭20min。（6）去除BSA液，每张切片加入已稀释的一抗全部覆盖组织，4℃过夜。（7）TBS液洗5min/3次，每张切片加50μl~100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。（8）TBS液洗5min/3次，每张切片加50~100μl二氨基联苯胺(DAB)液显色后用蒸馏水冲洗。（9）切片入苏木素溶液染色25s，用自来水流水冲洗3~5min。（10）切片依次浸泡：蒸馏水（1min）→50%乙醇（1min）→70%乙醇→80%乙醇（1min）→90%乙醇（1min）→100%乙醇（1min）→二甲苯Ⅰ（3min）→二甲苯Ⅱ（3min）→晾干→封片。5 青海大学硕士学位论文第2章对象与方法（11）每样本随机选3张切片，每张切片随机3个视野在显微镜下观察。利用Image-ProPlus软件计算平均光密度（meanopticaldensity,AOD）。2.9ELISA测定HAE大鼠血清IL-2和IL-10水平（）试剂盒组成（196孔）：①封板膜，2片（96）；②酶标包被板，1x96；③标准品（900pg/ml），0.5mlx1瓶；④标准品稀释液，1.5mlx1瓶；⑤酶标试剂，6mlx1瓶；⑥样品稀释液6mlx1瓶；⑦显色剂A液，6mlx1瓶；⑧显色剂B液，6mlx1瓶；⑨终止液6mlx1瓶；⑩浓缩洗涤液，（20mlx30倍）x1瓶。（）实验步实：2①标准品的稀释：设定标准孔10孔，将标准品稀释后每孔50µl，其浓度分别为600pg/ml、600pg/ml、400pg/ml、400pg/ml、200pg/ml、200pg/ml、100pg/ml、100pg/ml、50pg/ml、50pg/ml。②加样与温育：除空白孔外于将样品稀释液40µl和待测样品10µl依次加入待测样品孔中，封板后于37℃孵育30~60min。③洗涤：移去上层液体，每孔中加入已稀释的浓缩洗涤液，共洗5次，每次30秒。④加酶与温育：除空白孔外，每孔加入酶标试剂50µl，温育同步实②温育。⑤洗涤与显色：洗涤同步实③。每孔依次加入显色剂A、B各50µl于37℃避光显色15min。⑥终止：每孔中加入终止液50µl以终止反应。⑦测定：酶标仪测定每孔在450nm波长处的吸光度（absorbance,OD值），该操作在加终止液后15分钟内完成。2.10统计学方法用SPSS21.0软件统计分析。测得病灶直径大小、OD值和AOD值用均数±标准差（x±s）表示，得到的所有数据在统计分析前均进行正态性检验，对于非正态分布的数据予以对数转换。干预前和干预2个月后病灶直径大小比较用配对样本t检验统计分析；测得AOD值和OD值IL-2和IL-10水平变化用两个独立样本t检验统计分析，P<0.05差异有统计学意义。6 青海大学硕士学位论文第3章结果第3章结果3.1大鼠及病灶一般情况3.1.1大鼠一般情况HAE模型接种6个月后，大鼠存活39只（39/70），HAE建模成功率为34.3%（24/70）。实验干预2月后，其中MWA组大鼠存活9只（9/15），对照组大鼠存活5只（5/9）；大鼠一般情况良好。3.1.2病灶一般情况模型接种6月后，剖腹后见泡球蚴病灶组织浸润外向性生长，略突出于肝表面，与周围肝组织分界清楚，病灶呈结节状，色灰白或灰黄、质地硬，大小不等、形状不规则，部分病灶与膈肌、胃壁和腹膜轻度粘连（如图3.1）。图3.1大鼠HAE病灶生长情况Fig3.1Generalappearanceofthelesionaftermodelwereestablished6months7 青海大学硕士学位论文第3章结果3.1.3病灶MWA治疗HAE病灶微波消融术中可见病灶及边缘组织表面逐渐脱水、固缩，消融术后瘤体外观轻度焦黄或蜡黄，病灶边缘组织轻度碳化（如图3.2）。图3.2病灶微波消融术治疗（AB,微波消融治疗中；CD,微波消融治疗术后）Fig3.2ThepicturesofAandBshownthatthelesionwasgraduallyatrophyandsallowduringMWAtherapy,andthesurroundinglivertissuescolorchangedgradually;ThepicturesofCandDshownthatthelesiongeneralformafterMWA,theperipheraltissuesweremildcarbonization.3.1.4病理标本实验干预2月后，开腹后见病灶与膈肌、胃大弯、网膜及腹壁严重粘连，病灶呈灰黄色质硬物质，部分病灶可见钙化、结痂。剖开病灶，断面酷似海绵状改变，部分病灶囊腔见豆腐渣样物质或钙化灶，余肝脏大小、质地、色泽正常（如图3.3）。8 青海大学硕士学位论文第3章结果图3.3大鼠HAE病灶大体标本Fig3.3ThepathologicspecimenofHAEafterexperimentalintervention2months.3.2病灶大小分别测量模型接种6月后及实验干预2月后病灶直径大小（如图3.4）。模型接种6月后和实验干预2月后，实验组病灶直径分别为0.84±0.19cm和0.65±0.13（t=3.12，P<0.05）；对照组病灶直径分别为0.81±0.13cm和1.03±0.18cm（t=-4.75，P<0.05）（详见表3.1）。9 青海大学硕士学位论文第3章结果图3.4测量病灶直径大小（AB为实验干预前测量病灶直径；CD为干预2月后测量病灶直径大小）Fig3.4Thelesiondiametersweremeasuredbetweenpre-operationand2monthsafteroperation.（ThepicturesofAandBshownthatthelesiondiametersweremeasuredduringexperimentalintervention.ThepicturesofCandDshownthatthelesiondiametersweremeasured2monthsafteroperation）表3.1大鼠HAE病灶大小比较（⎯x±s）组别实验组对照组模型建立6月后病灶直径（cm）0.84±0.190.81±0.13实验干预2个月后病灶直径（cm）0.65±0.131.03±0.18N（只）95t3.12-4.75P0.014*0.009*注：*P<0.05具有统计学意义。10 青海大学硕士学位论文第3章结果3.3组织切片HE染色病理组织切片HE染色后，肝组织正常结构消失，可见形状不规则的泡状棘球蚴囊腔，腔体内见多个散在的头节及子囊，部分囊腔内可见囊液及散落的泡球蚴碎片，囊壁由内向外依次是生发层和角质层，部分囊壁已塌陷，泡球蚴边缘带组织可见大量淋巴细胞和单核细胞浸润。病灶外围肝组织内纤维结缔组织大量增生（图3.5）。图3.5大鼠HAE病理组织HE染色(×400)Fig3.5TheHEstainingofHAE(×400)3.4免疫组化如图3.6中棕黄色颗粒为白介素-2和白介素-10在泡球蚴病灶边缘带组织阳性表达，主要定位于胞浆，部分位于细胞核。在微波消融组及对照组大鼠HAE周围组织均可见IL-2和IL-10蛋白阳性表达。根据Image-ProPlus软件计算AOD值为：实验组IL-2表达水平为129.88±28.25，对照组IL-2表达水平为83.56±15.28，差异有统计学意义(t=5.87，p<0.05)。实验组IL-10表达水平为125.39±9.60，对照组表达水平IL-10为162.83±16.31；得出IL-10的数据经检验为非正态分布，予以对数转换后行t检验差异有统计学意义（t=-9.38，p<0.05）（表3.2），说明经MWA后，与对照组相比，IL-2水平上升，IL-10水平降低。11 青海大学硕士学位论文第3章结果图3.6IL-2和IL-10在HAE周围组织的表达（免疫组化法,×400；A:IL-2在微波消融组大鼠边缘带组织高表达；B：IL-2在对照组大鼠边缘带组织低表达；C：IL-10在微波消融组大鼠边缘带组织低表达；D：IL-10在对照组大鼠边缘带组织高表达。Fig3.6TheexpressionsofIL-2andIL-10aroundtheHAE(IHC×400；A:HigherexpressionofIL-2inthelivertissueofratsafterMWAaroundtheE.multiloculariscyst.B:LowerexpressionofIL-2inthelivertissueofcontrolgroupratsaroundtheE.multiloculariscyst.C:LowerexpressionofIL-10inthelivertissueofratsafterMWAaroundtheE.multiloculariscyst.D:HigherexpressionofIL-10inthelivertissueofcontrolgroupratsaroundtheE.multiloculariscyst.)12 青海大学硕士学位论文第3章结果表3.2IL-2和IL-10在大鼠HAE边缘带组织的表达水平（⎯x±s）细胞因子IL-2IL-10实验组边缘带AOD水平129.88±28.25125.39±9.60对照组边缘带AOD水平83.56±15.28162.83±16.31N1414t5.87-9.38P0.000*0.000*注：*P<0.05具有统计学意义。3.5ELISA根据样品的OD值，测得实验组大鼠血清IL-2浓度为7914.0±2567.8ng/L，对照组IL-2浓度为5882.7±1781.9ng/L,测得IL-2数据经检验为非正态分布，予以对数转换后行t检验提示差异具有统计学意义(t=3.40，P<0.05)。测得实验组IL-10含量为95.4±17.4ng/L，对照组IL-10含量为113.8±26.9ng/L，经过MWA后IL-10含量较对照组降低（t’=-3.05，P<0.05）（图3.8；表3.3）。图3.7IL-2和IL-10标准曲线Fig3.7ThestandardcurvesofIL-2andIL-1013 青海大学硕士学位论文第3章结果图3.8IL-2和IL-10在大鼠血清中的表达水平Fig3.8TheexpressionlevelsofserumIL-2andIL-10表3.3IL-2和IL-10在HAE大鼠血清中的表达含量（⎯x±s）细胞因子IL-2IL-10实验组大鼠血清中OD含量（ng/L）7914.0±2567.895.4±17.4对照组大鼠血清中OD含量（ng/L）5882.7±1781.9113.8±26.9N1414t（t’）3.40-3.05P0.001*0.004*注：*P<0.05具有统计学意义。14 青海大学硕士学位论文第4章讨论第4章讨论4.1MWA在肝癌中的应用4.1.1MWA在肝癌中的应用将一根特制的微波消融针经皮（或不经皮）穿刺到病灶中心区域，在高频电磁波（频率为300MHz-300GHz、波长为1mm-1m）的作用下产生的交变电场，病灶组织内极性分子为适应频率的改变而高速旋转，与邻近分子相互摩擦迅速产热，当温度升高至60℃时，病变组织脱水、蛋白变性，细胞不可逆性凝固坏死，从而杀灭肿瘤细胞达到治愈的目的[16]。4.1.2MWA治疗肝癌的优势(1)对于病灶直径不超过5cm的单发肿瘤，MWA的治疗效果可以与外科切除手术相媲美,达到治愈效果；对于病灶解剖位置较深、手术难度较大或无法行手术切除的病灶、以及直径大于5cm的单发肿瘤或最大直径大于3cm的多发肿瘤，可行一针多点穿刺、多针多点穿刺或分次穿刺微波固化治疗[17,18]，是肝脏占位性病变重要的治疗手段之一。(2)MWA治疗肝癌方面具有简单易行、创伤小、适应症广泛、局部升温快、热效应高、病灶组织灭活彻底、术后并发症较少以及患者住院周期短、费用低等优点[19]。(3)肿瘤组织血管丰富，常伴有微血管扭曲，MWA可使肿瘤血管透壁性坏死以及凝固坏死的组织脱落形成血栓堵塞临近血管达到预防肿瘤细胞转移的目的[20]。(4)MWA治疗肝癌的同时可提高机体抗肿瘤免疫反应的作用[21,22]。4.2HAE与肝癌的相似性HAE较为罕见，尤其在HAE非流行地区易于肝脏恶性肿瘤相混淆，不易鉴别。据报道，国内有6%~33%HAE误诊为肝癌[23]。分析其原因：（1）临床表现相似：HAE与肝癌均起病隐匿，早期症状不明显，可表现为上腹部疼痛不适、腹胀或恶心等其他不适；中晚期侵犯胆管或其他组织时，可出现消瘦、黄疸及恶病质等酷似恶性肿瘤的表现[1]。（2）生物学行为相似：HAE酷似肝癌，可经浸润性扩张、淋巴转移和血性播散途径转移或扩散至其他脏器[2]。（3）影像学特15 青海大学硕士学位论文第4章讨论征：HAE虽有其特定的影像学特征，但部分HAE与肝癌极其类似，不易鉴别[24]。（4）病理标本：部分HAE大体标本与肿瘤无异，单纯肉眼无法鉴别，需行病理学检查。4.3IL-2和IL-10在HAE中的应用Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF等因子，Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5和IL-10等因子[25]。两种免疫模式在棘球蚴病感染中相互作用、相互拮抗，其中，Th1模式与机体免疫保护、清除病原体有关，而Th2亚型与疾病进展有关[26]。相关研究表明[27]，棘球蚴病感染人体后，两种免疫模式失衡，宿主体内的以保护免疫模式为主的Th1转变为有利于疾病进展的Th2免疫模式，从而使多房棘球蚴绦虫逃避宿主免疫系统的监视攻击与机体长期共存，导致感染持续存在、病情慢性进展。白介素-2具有抑制恶性肿瘤生长、延缓棘球蚴病发展及增强宿主免疫功能的作用，使机体倾向以Th1为主的保护免疫模式，而体内白介素-10过量表达可使棘球蚴绦虫逃避宿主的免疫攻击，机体的Th1模式处于抑制状态，使以Th2免疫模式变成主导模式，有利于棘球蚴病的长期存活[28]。这种免疫调节也同样存在于感染泡球蚴的鼠类中，买合皮提汗•艾尔肯等[29]用硝唑尼特联合阿苯达唑治疗感染泡球蚴的小鼠后IL-2水平明显高于空白对照组；AbulaihaitiM等[28]用阿苯达壳聚糖微球治疗小鼠泡状棘球蚴病后IL-2水平明显升高，而IL-10水平明显降低；相关研究报道[30]：利用IL-10来评价药物治疗肝包虫病的效果，治疗有效后IL-10水平降低，相反，表示治疗不佳。4.4大鼠HAE微波消融术后病灶与组织学变化在本实验中，经MWA治疗后的大鼠HAE病灶变小，未进一步生长（P<0.05），病灶组织较对照组大鼠明显钙化，而未经治疗的大鼠HAE病灶继续生长（P<0.05）。表明微波电场产生的高温对泡球蚴组织具有杀伤作用，可抑制病灶进一步生长。经MWA治疗的大鼠血清及病灶边缘带组织较未治疗的HAE大鼠IL-2水平明显升高（P<0.05），IL-10较对照组水平明显降低，差异具有统计学意义，表明了微波消融术可以改变HAE大鼠的免疫状况，大鼠泡球蚴及周围组织活性被抑制，机体免疫水平发生改变，以Th2为主的免疫模式减弱，倾向转变为Th1为主的保护性免疫模式。有利于以机体进一步清除病原体。16 青海大学硕士学位论文第4章讨论4.5不足之处与展望该实验样本量小、观察时间短，病灶较小，目前，相关方面的研究甚少，尚无确切消融时间与功率，在MWA中可能存在消融不全或过度消融情况。本实验单纯用游标卡尺只能测得突出于肝脏表面的病灶大小，病灶直径测得值不准确，影响实验结果，如需进一步实验，可借助影像学手段测量病灶大小，以及在B超或CT引导下行病灶MWA治疗，以减少实验大鼠的损伤或死亡。MWA优点诸多，可进行大量的研究来证实MWA对HAE的疗效。17 青海大学硕士学位论文第5章结论第5章结论通过对大鼠HAE原位模型行微波消融术治疗的实验研究，可以得出以下结论：1.体内实验研究提示微波消融术通过热效应可抑制肝泡型包虫病的进一步发展。2.通过大鼠血清和组织学IL-2和IL-10的检测结果提示，微波消融术可能通过调节大鼠机体免疫抑制肝泡型包虫病的生长。18 青海大学硕士学位论文参考文献参考文献[1]LorenzA,NebikerCA.HepaticEchinococcosis[J].JGastrointestSurg,2017[2]TezS,TezM.Echinococcusandcancer:unsolvedmystery[J].ParasiteImmunol,2015,37(8):426。[3]TuxunT,ApaerS,MaHZ,etal.ThePotentialRoleofTh9CellRelatedCytokineandTranscriptionFactorsinPatientswithHepaticAlveolarEchinococcosis[J].JImmunolRes,2015,2015:895416.[4]DeplazesP,RinaldiL,AlvarezRojasCA,TorgersonPR,HarandiMF,RomigT,etal.GlobalDistributionofAlveolarandCysticEchinococcosis[J].AdvParasitol,2017,95:315-493.[5]曾祥嫚,官亚宜,伍卫平.棘球蚴病的流行病学分布特征[J].中国人兽共患病学报,2014,30(04):413-417.[6]方丹,陈哲宇.肝泡状棘球蚴病的诊断和治疗[J].临床肝胆病杂志,2017,(05):990-993。[7]朱婕,孙柯,季洪健.棘球蚴性胸腔积液的诊断与治疗[J].临床肺科杂,2016,(05):903-905.[8]张梦媛,伍卫平.国内外包虫病疾病负担研究进展[J].中国病原生物学杂,2017,12(05):473-475[9]GottsteinB,StojkovicM,VuittonDA,MillonL,MarcinkuteA,DeplazesP.Threatofalveolarechinococcosistopublichealth--achallengeforEurope[J].TrendsParasitol,2015,31(9):407-12.[10]TamarozziF,VuittonL,BrunettiE,VuittonDA,KochS.Non-surgicalandnon-chemicalattemptstotreatechinococcosis:dotheywork?[J].Parasite,2014,21:75.[11]StadelmannB,RufenerR,AeschbacherD,etal.ScreeningoftheOpenSourceMalariaBoxRevealsanEarlyLeadCompoundfortheTreatmentofAlveolarEchinococcosis[J].PLoSNeglTropDis,2016,10(3):e0004535.[12]阿卜杜艾尼·啊卜力孜,温浩.难治性肝泡型包虫病的多学科个体化治疗[J].临床肝胆病杂志,2015,31(04):639-641.[13]AmabileC,AhmedM,SolbiatiL,MeloniMF,SolbiatiM,CassarinoS,etal.Microwaveablationofprimaryandsecondarylivertumours:exvivo,invivo,andclinicalcharacterisation[J].IntJHyperthermia,2017,33(1):34-42.[14]CairangY,ZhangL,RenB,etal.Efficacyandsafetyofultrasound-guidedpercutaneousmicrowaveablationforthetreatmentofhepaticalveolarechinococcosis:Apreliminarystudy[J].Medicine(Baltimore),2017,96(27):e7137.[15]吴浩,沈顺利,匡铭,等.小鼠皮下移植性肝癌模型的热消融研究[J].中国普通外科杂19 青海大学硕士学位论文参考文献志,2012(08):973-7.[16]LoprestoV,PintoR,FarinaL,CavagnaroM.Treatmentplanninginmicrowavethermalablation:clinicalgapsandrecentresearchadvances[J].IntJHyperthermia,2017,33(1):83-100.[17]PhilipsP,ScogginsCR,RostasJK,McMastersKM,MartinRC.Safetyandadvantagesofcombinedresectionandmicrowaveablationinpatientswithbilobarhepaticmalignancies[J].InternationalJournalofHyperthermia,2016,33(1):43-50.[18]MeloniMF,ChiangJ,LaesekePF,DietrichCF,SanninoA,SolbiatiM,etal.Microwaveablationinprimaryandsecondarylivertumours:technicalandclinicalapproaches[J].IntJHyperthermia,2017,33(1):15-24.[19]ParkWK,MaxwellAW,FrankVE,PrimmerMP,CollinsSA,BairdGL,etal.EvaluationofaNovelThermalAccelerantforAugmentationofMicrowaveEnergyduringImage-guidedTumorAblation[J].Theranostics,2017,7(4):1026-35.[20]YoshimuraK,OkuboK,IchiokaK,TeradaN,MatsutaY,AraiY.Laparoscopicpartialnephrectomywithamicrowavetissuecoagulatorforsmallrenaltumor[J].JUrol,2001,165(6Pt1):1893-6.[21]SchuellerG,StiftA,FriedlJ,DubskyP,Bachleitner-HofmannT,BenkoeT,etal.Hyperthermiaimprovescellularimmuneresponsetohumanhepatocellularcarcinomasubsequenttoco-culturewithtumorlysatepulseddendriticcells[J].IntJOncol,2003,22(6):1397-402.[22]LuMD,ChenJW,XieXY,LiuL,HuangXQ,LiangLJ,etal.Hepatocellularcarcinoma:US-guidedpercutaneousmicrowavecoagulationtherapy[J].Radiology,2001,221(1):167-72.[23]潘奇,杜东鹏,姜文雄.巨大肝泡状棘球蚴病一例误诊为肝癌分析[J].临床误诊误治,2011,24(S1):23.[24]TreskaV,KolarovaL,MirkaH,DaumO,MatejuJ,LiskaV,etal.Alveolarechinococcosis-ararediseasewithdifferentialdiagnosticproblems[J].RozhlChir,95(6):240-4.[25]TurhanN,EsendagliG,OzkayarO,TunaliG,SokmensuerC,AbbasogluO.CoexistenceofEchinococcusgranulosusinfectionandcancermetastasisinthelivercorrelateswithreducedTh1immuneresponses[J].ParasiteImmunol,2015,37(1):16-22.[26]WangJ,GottsteinB.ImmunoregulationinlarvalEchinococcusmultilocularisinfection[J].ParasiteImmunol,2016,38(3):182-92.[27]RickenFJ,NellJ,GrunerB,etal.AlbendazoleincreasestheinflammatoryresponseandtheamountofEm2-positivesmallparticlesofEchinococcusmultilocularis(spems)inhumanhepaticalveolarechinococcosislesions[J].PLoSNeglTropDis,2017,11(5):e0005636.20 青海大学硕士学位论文参考文献[28]AbulaihaitiM,WuXW,QiaoL,etal.EfficacyofAlbendazole-ChitosanMicrosphere-basedTreatmentforAlveolarEchinococcosisinMice[J].PLoSNeglTropDis,2015,9(9):e0003950.[29]买合皮热提汗·艾尔肯,王云海,赵晋明,等.硝唑尼特和阿苯达唑联合治疗小鼠原发性和继发性泡状棘球蚴病的机制探讨[J].中国人兽共患病学报,2011(06):534-8.[30]高亮亮,张示杰.肝包虫病相关因子的研究进展[J].中国人兽共患病学报,2013(01):78-8121 青海大学硕士学位论文文献综述致谢时间转瞬即逝，美好而充实的硕士研究生生涯即将结束，想着即将走出校门踏上社会的征程，内心五味杂陈，大美青海给我留下了许多宁静与美好。三年来，对于那些帮助我的人表示由衷的感谢，祝愿他们工作顺利，身体康泰！首先，衷心感谢我的导师任利教授以及樊海宁教授和张灵强副教授，从科研思维的培养、课题的筛选、实验的设计与实施，到实验结果的分析以及论文的写作等方面，都倾注了他们大量的心血，他们传道解惑，使得在课题进展中遇到的种种困难都能迎刃而解，在此，向他们表示崇高的敬意。在学习上，任老师知识渊博、技艺精湛、临床经验丰富、治学严谨，授人以渔，是我学习的榜样；在生活上，他是人生挚友，对我关怀备至，再次向他表示感谢！感谢张灵强老师在期刊文章的指引和修改等方面予以无私的帮助。其次，感谢青海省省地方病预防控制所老师、病理科郭新建老师以及师兄弟们在实验过程中给予以的帮助。再次，感谢肝胆胰外科全科老师以及规培轮转中带教老师在专业知识及临床经验的无私馈赠，临床经验无价之宝、来之不易，我将永远铭记他们，不断钻研。最后，真诚的感谢我的父亲、母亲以及所有的亲戚朋友，他们是我人生中最坚强的后盾，有了他们，我才能无所顾忌，不断前行，在这里，我向他们送上最真挚的祝福，愿他们身体健康、苦尽甘来、笑口常开！22 青海大学硕士学位论文附录A综述附录A综述肝泡型包虫病的治疗现状【摘要】肝泡型包虫病是一种病程进展缓慢的、容易被忽视的、诊治较为复杂的恶性寄生虫病。尽管目前做了大量的实验与研究，但是可实际应用于临床上并且取得较为满意的治疗方法仍较为匮乏。经常不断总结肝泡型包虫病的各种治疗方法，分析总结其优缺点，不但可以规范肝泡型包虫病的治疗，而且能为其治疗开启新的思路，本文就其治疗进行综述。【关键词】肝脏泡型包虫病治疗综述肝泡型包虫病（hepaticalveolarechinococcosis，HAE）是多房棘球蚴幼虫期的持续增值所致的慢性进行性肝功能损害人畜共患寄生虫病[1]。该病主要流行于北半球高纬度的寒冷地区，如北美、欧美和亚洲等地[2]。在我国于西北及西南等地区以草原游牧业为主的藏族人群所高发[3]。感染泡球蚴后肝脏是其最常寄生的器官，可高达90%以上，肺、脑、肾、脾以及骨等组织器官均可成为其直接感染或由其他脏器转移的靶器官[4]。HAE起病隐匿、发展缓慢，具有恶性肿瘤的特征不断侵犯破坏正常组织，部分患者可终身无症状，有的表现为腹部不适、纳差乏力、厌油恶心、胆管炎或慢性肝病等其他症状，患者多于医院就诊偶然发现该病或待疾病中晚期就诊而确诊[5,6]。由于该病发病地区经济状况落后、卫生条件差、患者就医意识淡薄，待出现上述临床症状时该病已发展至中晚期，病灶往往已侵蚀大部分肝脏组织、下腔静脉、门静脉或已远处转移至肺脏、脑部等器官，只能以姑息性手段缓解疾病的进展，最终导致肝衰竭或其他脏器衰竭而死亡[7,8]。由于HAE较为罕见，容易忽视，目前临床研究较为匮乏，尚无治疗该病的特效药物[9]。本文拟HAE的近年来的治疗进行归纳综述。1.手术治疗1.1HAE根治性手术虽然目前可供HAE治疗的方法有很多，但是，外科病灶切除手术仍是HAE治疗的首选[10]。对于局限于肝脏内的泡球蚴病灶，可根据患者自身情况行病灶连同病灶边缘至少1cm范围肝组织完整切除，术后规律口服阿苯达唑药物治疗，23 青海大学硕士学位论文附录A综述此种方法可达到彻底性治愈的效果[11]，是目前根治HAE的经典治疗方法。术前评估是确定病变完全切除的重要依据，严格按照WHO-IWGEPNM分类评估根治性切除术的可能性[12]。术前可结合肝脏动态三维成像等技术[13]，术中可应用免疫荧光技术可增加病灶完整切除的可能性[14]。但是，由于HAE其生物学特性，大部分患者就诊时病灶已侵犯重要血管或脏器，甚至已经发生远处转移，切除率较低，临床实际根治率较低。1.2姑息性病灶切除术——“包虫病灶减体积术”HAE具有浸润性扩张生长的特点，随着病灶不断的生长，逐渐产生压迫症状，患者常表现为恶心、呕吐、腹胀等症状，对于无法根治性切除的巨大HAE病灶，可行“包虫病灶减体积术”或“包虫病灶瘤体减压术”，此种方式可缓解患者压迫症状，适用于终末期患者的姑息性治疗[15]。但是，该手术不能延缓疾病的进展，甚至容易出现胆汁漏、出血、腹腔感染甚至肝功能衰竭等严重并发症，临床应用较为少见，仅有少量文献报道。1.3PTCDPTCD（percutaneoustranshepaticcatheterdrainage），经皮经肝胆管穿刺术是借助影像学方法引导下将穿刺引流管导入离病变部位较近的肝胆管从而起到引流等治疗作用。PTCD可用于因泡球蚴病灶侵蚀肝胆管导致的梗阻性黄疸，特别是梗阻部位较高、远离肝脏中心的梗阻，行PTCD治疗可引流梗阻淤积的胆汁、缓解胆汁对肝脏的毒害作用[16]，对于HAE病灶较大、形成残腔液化感染的患者可起到冲洗引流的作用[17]。也可用于外科手术术前减黄，该操作简单、易行，是治疗梗阻性黄疸的重要手段之一。但是，行PTCD可引起胆汁漏、出血以及增加逆行感染可能，并且患者需长期携带引流管。1.4ERCP（endoscopicretrogradechlangio-pancreatography）对于低位梗阻性黄疸的HAE患者，可行ERCP留置鼻胆管引流胆汁，或放置支架扩张胆道缓解黄疸，也可用于术前减黄、术前留置鼻胆管引导手术切除病灶的作用[18]。但是，ERCP易引起急性胰腺炎、出血等并发症，是中晚期梗阻性黄疸的HAE患者重要治疗手段之一。1.5肝移植异体肝移植或离体自体肝移植是晚期肝衰竭HAE患者一种有效的选择，可以有效的延长患者的生存期[19]。但是，该手术难度大、术后并发症多、手术费用高昂，对于异体肝移植患者容易出现排斥反应等特点[20,21]，限制了临床上的24 青海大学硕士学位论文附录A综述应用。2.药物治疗对于根治性手术的HAE患者，术前口服和术后联合阿苯达唑治疗是彻底治愈HAE的重要方式[22]。对于无法以外科手术缓解病情的患者，需长期服用阿苯达唑。据统计，规律的阿苯达唑治疗可使患者10年生存期增加至80%[9]，是HAE患者必不可缺少的一种重要治疗手段。服用阿苯达唑的患者应该CT和/或MRI每隔2-3年检查一次，以评估疾病的复发或进展[23]。但是，目前仍无根治HAE患者的药物，阿苯达唑仅是能延缓部分HAE患者疾病进展的药物，部分HAE患者服用阿苯达唑后无明显疗效。长期服用该药的患者容易出现以下并发症，如不能耐受、恶心纳差、频繁呕吐等其他不适[24]。随着研究的进展，目前虽然有一些替代药物，如甲苯达唑、吡喹酮或中草药等药物，但是均没有阿苯达唑疗效好[24]。3.消融治疗3.1热消融技术射频消融术和微波消融术两者均是利用热效应原理使病灶组织脱水、破坏细胞组织结构来治疗占位性病变。目前，两种技术均可使小于5cm的单发肿瘤或病灶不超过3个且最大直径不超过3cm的恶性肿瘤达到完全治愈的效果[25,26]。HAE在临床表现、生物学行为等方面及其类似于肝癌[27,28]，热消融技术理论上也应同样有效于HAE的治疗。但是，目前仅有极少量关于热消融术治疗HAE的报道[29]。热消融技术简单易行，优点较多，急需大量研究探讨热消融技术对于HAE的疗效。3.2冷冻消融技术氩氦刀冷冻消融技术是利用氩氦刀刀头突然超低温使病灶细胞遭到冰晶的物理破坏导致细胞死亡达到治疗的目的[30]。目前，我们学科团队利用氩氦刀技术治疗1例肝泡型包虫病患者，术后随访并1年发现病灶缩小钙化、无继续生长迹象。但是，尚无关于氩氦刀治疗HAE的报道。进一步探讨冷冻消融技术，也许能为HAE患者的治疗上带来福音。4.硬化剂治疗在B超引导下将穿刺针穿刺至HAE病灶中央，注入硬化剂或无水乙醇使病灶组织达到硬化坏死。该操作可多部位、多点穿刺注射。对于液化坏死的HAE病灶也可结合PTCD引流或抽吸缓解病情[31]。该操作适用于泡型包虫病术前的25 青海大学硕士学位论文附录A综述辅助治疗，尤其适用于中晚期HAE不能耐受手术的患者。其操作简单，可重复性强，是联合治疗的重要辅助手段[32]。但是，该操作有增加包虫种植到其他部位的可能性。5.放射治疗将一定量的放射线对包虫病灶组织进行照射，可使病灶细胞蛋白质合成障碍从而导致病灶组织缩小。经相关文献报道[33,34]，放射治疗亦有效于HAE的治疗，尤其是无法手术治疗或其他治疗手段不佳的HAE患者。但是，由于在杀灭病灶的同时对健康组织损伤较为严重，尚缺乏放射治疗对HAE治疗有效性的可靠证据，临床应用较为局限。尽管目前有大量关于HAE的研究，诊断方法和治疗手段也日新月异，但是，仍缺乏早期特异性诊断与其治疗方法，临床治疗也较为局限，效果尚不理想。在治疗HAE的方案上，仍需联合治疗和多学科治疗。我们仍需做大量的研究来探讨HAE新的治疗方案，如疫苗的研制、分子靶向治疗等方面的研究。同时，包虫病重在预防，要加大包虫病相关知识的宣传力度，让HAE高发地区群众从自我做起，将HAE消灭在根源上。参考文献：[1]TaxyJB,GibsonWE,KaufmanMW.Echinococcosis:UnexpectedOccurrenceandtheDiagnosticContributionofRoutineHistopathology[J].AmJSurgPathol,2017,41(1):94-100.[2]DeplazesP,RinaldiL,AlvarezRojasCA,etal.GlobalDistributionofAlveolarandCysticEchinococcosis[J].AdvParasitol,2017,95:315-493.[3]温浩,吐尔干艾力·阿吉,邵英梅,等.棘球蚴病防治成就及面临的挑战[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2015(06):466-71.[4]路越晴,邓勇,张灵强,等.泡型肝包虫病的临床治疗进展[J].中国普外基础与临床杂志,2016(05):547-51.[5]BatcikOE,OgrenciA,KobanO,etal.CerebralAlveolarEchinococcosisConcomitantwithLiverandLungLesionsinaYoungAdultPatient:CaseReportandLiteratureReview[J].TurkiyeParazitolDerg,2016,40(3):169-71.[6]GottsteinB,StojkovicM,VuittonDA,etal.Threatofalveolarechinococcosistopublichealth--achallengeforEurope[J].TrendsParasitol,2015,31(9):407-12.[7]黄士波,米圆圆,刘爱琴,等.肝包虫病的诊断现状及进展[J].现代生物医学进展,2016(04):797-800.26 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青海大学硕士学位论文作者简介作者简介一．基本情况姓名：周启锋性别：男籍贯：陕西安康出生年月：1991年08月最后学历：大学本科毕业院校：陕西中医药大学二．学习工作经历2009.09-2014.07陕西中医药大学，临床医学2015.09-2018.07青海大学，外科学（普通外科）三．发表文章1.周启锋,任利,张灵强,樊海宁.肝泡状棘球蚴病动物模型的研究进展［J］.临床肝胆病杂志,2017,33(11):2247-2250．2.周启锋,张灵强,廖梦娇,庞明泉,李梦轩,任利,樊海宁.裸鼠皮下泡状棘球蚴病移植瘤模型的建立.临床肝胆病杂志,2018,34(3):588-590.3.《Thetherapyeffectofmicrowaveablationtohepaticalveolarechinococcosisinratmodel》，投稿中。29
