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：密级论文编号：中囯农业科学院学位论文我国蔬菜根部病原镰孢菌鉴定和新病害发现ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｕｓａｒｉｕｍＳｅｃｉｅｓｏｎＲｏｏｔｓｏｆＶｅｅｔａｂｌｅｓａｎｄｐｇｔｈｅＤｉｓｃｏｖｅｒｏｆＮｅｗＤｉｓｅａｓｅｓｉｎＣｈｉｎａｙ硕士研究生：李盼亮‘指导教师：李宝聚研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研究方向：植物病害防治培养单位：蔬菜花齐研究所研究生院提交日期２０１７年５月 密级:论文编号:中国农业科学院学位论文我国蔬菜根部病原镰孢菌鉴定和新病害发现IdentificationofFusariumSpeciesonRootsofVegetablesandtheDiscoveryofNewDiseasesinChina硕士研究生：李盼亮指导教师：李宝聚研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研究方向：植物病害防治培养单位：蔬菜花卉研究所研究生院提交日期2017年5月 Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIdentificationofFusariumSpeciesonRootsofVegetablesandtheDiscoveryofNewDiseasesinChinaM.S.Candidate：LiPanliangSupervisor：Prof.LiBaojuMajor：PlantPathologySpecialty:PreventionandControlofPlantDiseasesMay2017 摘要镰孢菌属（Fusarium）真菌引起的蔬菜枯萎病为土传病害，枯萎病发生后将对蔬菜造成严重减产、甚至绝收，对我国农业造成巨大的经济损失。对蔬菜致病镰孢菌种类的准确鉴定具有非常重要的理论意义和应用价值。镰孢菌属真菌分布广泛，寄主多样，镰孢菌属又是一个非常难以鉴定的属。这些原因就造成了蔬菜枯萎病发生严重，病原菌却模糊不清的生产现状。本文通过对全国蔬菜主产区进行蔬菜枯萎病的调查和样本采集，基于镰孢菌形态学特征、致病性测定和分子生物学分析等方法对病原菌进行了鉴定。主要研究成果如下：1.明确了我国部分省份蔬菜上致病镰孢菌的种类及分布。通过对北京、河南、天津、四川、甘肃、河北、山东、云南等16个省45个地区进行病害调查，共采集到蔬菜镰孢菌病害标本279份，寄主涉及伞形科、十字花科、茄科、葫芦科、菊科、豆科、百合科、锦葵科、姜科等12个科39种蔬菜，还有部分花卉和果树，如葡萄、柑橘、樱桃、牡丹、薰衣草等寄主。共分离得到镰孢菌菌株256株，共鉴定出镰孢菌10个种，分别为锐顶镰孢F.acuminatumEllis&Everh.、燕麦镰孢F.avenaceumFr.、同生镰孢F.communeK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg、木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.、尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.、层出镰孢F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg、茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.、半裸镰孢F.incarnatum(Desm.)Sacc.、烟草镰孢F.tabacinum(J.F.H.Beyma)W.Gams和三线镰孢F.tricinctum(Corda)Sacc.。本研究对严重发生的病害的田间症状和病原菌进行了详细的描述。2.发现并鉴定新记录寄主病害7种。世界新记录寄主病害4种，分别是木贼镰孢F.equiseti引起的花椰菜枯萎病，茄病镰孢F.solani引起的花椰菜根腐病，层出镰孢F.proliferatum引起的花椰菜枯萎病，以及烟草镰孢F.tabacinum引起的甘蓝根腐病。国内新记录寄主病害3种，为茄病镰孢F.solani引起的茄子根腐病，尖孢刺盘孢Colletotrichumacutatum引起的绿豆芽炭疽病和露湿漆斑菌Myrotheciumroridum引起的甜瓜茎基腐病。绿豆芽炭疽病和甜瓜茎基腐病因在生产中发生严重，故记录在此以供参考。3.初步明确了引起十字花科和菊科蔬菜枯萎病的镰孢菌种类。调查地区涉及9个省，共分离镰孢菌菌株54株。十字花科蔬菜包括大白菜、结球大白菜（娃娃菜）、散叶大白菜（快菜）、紫菜薹、结球甘蓝、青花菜和长羽裂萝卜（中国萝卜），鉴定出镰孢菌5个种，分别为燕麦镰孢F.avenaceum、同生镰孢F.commune、木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani。菊科蔬菜包括茎用莴苣（莴笋）和结球莴苣（生菜），共鉴定出4个种，为木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum、层出镰孢F.proliferatum和三线镰孢F.tricinctum。本研究填补了十字花科和菊科蔬菜上致病镰孢菌种类鉴定的空白。本研究通过对全国蔬菜产区进行枯萎病的调查和研究，确定了我国部分省份蔬菜上致病镰孢菌的种类及地区分布，对十字花科和菊科蔬菜枯萎病的镰孢菌种类进行了系统的研究，为蔬菜根部镰孢菌病害的鉴定、病害防治提供了科学参考。关键词：蔬菜，镰孢菌属，病原菌鉴定，新记录寄主病害I AbstractFusariumwiltofvegetablesissoil-bornedisease,whichcausesaterribleharvestloseinproductionandsubsequentlybringhugeeconomiclossesforfarmers.Therefore,theidentificationofpathogenicFusariumspeciesoninfectedvegetableshasanimportanttheoreticalsignificanceandapplicationvalue.Thesituation,thattheoccurrenceofFusariumwiltonvegetablesissosevere,butthepathogenFusariumspp.isambiguousinproductivepractice,iscausedbyitswidedistributionofFusariumfungiandthedifficultyinidentifyingpathogenFusariumspp.Inthisstudy,diseasedvegetableswereinvestigatedandcollectedfrommainvegetablegrowingregionsalloverChina,andtheFusariumspp.wereidentifiedultimatelybasedonmorphologicalcharacteristics,pathogenicitytestandmolecularanalysis.Themainresultswereasfollows:1.IdentifytheFusariumspp.onvegetablesandthedistributionofpathogenicinChina.Atotalof279sampleswerecollectedthroughtheinvestigationofdiseasesfrom16provinces45regionsinChina,suchasBeijing,Henan,Tianjin,Sichuan,Gansu,Hebei,Shandong,Yunnanandsoon.Hostonvegetablesinclude12families39kindsofvegetables,suchasUmbelliferae,Cruciferae,Cucurbitaceae,Asteraceae,Leguminosae,Liliaceae,Malvaceae,Zingiberaceaeandsoon.Therewerealsosomehostsbelongingtoflowersandfruits,suchaspeony,lavender,grapes,citrus,cherryandsoon.Atotalof256strainsofFusariumspp.wereobtainedand10Fusariumspecieswereidentifiedonvegetables,includingF.acuminatumEllis&Everh.,F.avenaceumFr.,F.communeK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg,F.equiseti(Corda)Sacc.,F.oxysporumSchltdl.,F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg,F.solani(Mart.)Sacc.,F.incarnatum(Desm.)Sacc.,F.tabacinum(JFHBeyma)W.GamsandF.tricinctum(Corda)Sacc.Thesymptomsofdiseasesandpathogenofvegetablewiltweredescribeddetaillyinthisstudy.2.SevennewrecordedhostdiseaseswerediscoveredinChina.Fournewrecordedhostdiseasesintheworld.CauliflowerwiltcausedbyF.equiseti,cauliflowerrootrotcausedbyF.solani,CauliflowerwiltcausedbyF.proliferatum,cabbagerootrotcausedbyF.tabacinum.ThreenewrecordedhostdiseasesinChina,include:eggplantrootrotcausedbyF.solani,mungbeansproutanthracnosecausedbyColletotrichumacutatumandmuskmeloncrowncankercausedbyMyrotheciumroridum.Therewere2diseasescausedbyColletotrichumsp.andMyrotheciumsp.,respectively.Itwasrecordedinthispaperforreferencebecauseoftheseverityofthediseasesinproduction.3.IdentifytheFusariumspp.onCruciferousandAsteraceaevegetablespreliminary.Atotalof54Fusariumisolateswereobtainedfromsampleswhichwerecollectedfrom9provinces.TheCruciferousvegetablesincludeChinesecabbage,Chineseheadingcabbage(babycabbage),Chineseleafspreadcabbage(fastcabbage),commonheadcabbage,purplepakchoi,broccoliandChineseradish.FiveFusariumspecieswereidentified,includingF.avenaceum,F.commune,F.equiseti,F.II oxysporumandF.solani.Asteraceaevegetablesincludesstemlettuce(asparaguslettuce)andiceberglettuce(lettuce),fourspecieswereidentified,namely,F.equiseti,F.oxysporum,F.proliferatumandF.tricinctum.Inthisstudy,pathogensofFusariumonCruciferousandAsteraceaevegetableswereidentified,fillinguptheblankofpathogenicFusariumspp.onCruciferousandAsteraceae.TheFusariumspeciesandregionaldistributiononvegetablesweredeterminedandthespeciesofFusariumgenusonCruciferousandAsteraceaeweredefinedpreliminaryinthispaperthroughtheinvestigationandresearchonthevegetablesFusariumwiltinChina.Theseresultsprovidescientificreferencefortheidentification,diseasecontrolandresearchinotherrelatedfields.Keywords:Vegetables,Fusariumgenus,Pathogenidentification,NewrecordedhostdiseasesIII 目录第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展...........................................................................11.1蔬菜栽培现状.........................................................................................................11.2国内外蔬菜镰孢菌根部病害的发生概况.............................................................11.3镰孢菌属分类鉴定研究进展.................................................................................31.3.1国外镰孢菌属分类鉴定研究进展...............................................................31.3.2国内镰孢菌属分类鉴定研究进展...............................................................51.4镰孢菌属分类鉴定方法.........................................................................................51.4.1形态学鉴定...................................................................................................61.4.2致病性测定...................................................................................................71.4.3分子生物学鉴定方法...................................................................................71.5目的和意义.............................................................................................................81.6技术路线.................................................................................................................9第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定.............................................................102.1试验材料...............................................................................................................102.1.1蔬菜根部镰孢菌病害样本的采集.............................................................102.1.2主要试验仪器.............................................................................................102.1.3病原菌培养基制备.....................................................................................102.1.4主要试验试剂.............................................................................................112.2试验方法...............................................................................................................112.2.1病样镜检和病原菌的分离、纯化.............................................................122.2.2镰孢菌形态学鉴定.....................................................................................122.2.3病原菌致病性测定.....................................................................................132.2.4分子生物学鉴定方法.................................................................................142.3病原菌分离和初步鉴定结果...............................................................................16IV 2.4本章小结...............................................................................................................26第三章我国蔬菜根部新记录寄主病害病原菌鉴定.....................................................273.1花椰菜三种致病镰孢菌鉴定...............................................................................273.1.1花椰菜三种致病镰孢菌形态学鉴定.........................................................283.1.2花椰菜三种致病镰孢菌致病性测定.........................................................303.1.3花椰菜三种致病镰孢菌分子生物学鉴定.................................................303.1.4讨论.............................................................................................................353.2茄子茄病镰孢根腐病鉴定...................................................................................353.2.1茄子根腐病病原菌形态学鉴定.................................................................353.2.2茄子根腐病病原菌致病性测定.................................................................363.2.3茄子根腐病病原菌分子生物学鉴定.........................................................373.2.4讨论.............................................................................................................383.3甘蓝烟草镰孢根腐病鉴定...................................................................................383.3.1甘蓝根腐病病原菌形态学鉴定.................................................................393.3.2甘蓝根腐病病原菌致病性测定.................................................................393.3.3甘蓝根腐病病原菌分子生物学鉴定.........................................................403.3.4讨论.............................................................................................................423.4绿豆芽尖孢刺盘孢炭疽病鉴定...........................................................................423.4.1绿豆芽炭疽病病原菌形态学鉴定.............................................................433.4.2绿豆芽炭疽病病原菌致病性测定.............................................................433.4.3绿豆芽炭疽病病原菌分子生物学鉴定.....................................................443.4.4讨论.............................................................................................................453.5甜瓜露湿漆斑菌漆腐病鉴定...............................................................................453.5.1甜瓜漆腐病病原菌形态学鉴定.................................................................463.5.2甜瓜漆腐病病原菌致病性测定.................................................................463.5.3甜瓜漆腐病病原菌分子生物学鉴定.........................................................47V 3.5.4讨论.............................................................................................................483.6本章小结...............................................................................................................49第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定.............................................................504.1十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定...............................................................504.1.1十字花科蔬菜镰孢菌病害样本采集及地域分布.....................................504.1.2十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验.........................................514.1.3十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌形态学鉴定.........................................544.1.4十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌分子生物学鉴定.................................584.1.5讨论.............................................................................................................594.2菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定.......................................................................594.2.1菊科蔬菜镰孢菌病害样本采集及地域分布.............................................594.2.2菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验.................................................604.2.3菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌形态学鉴定.................................................614.2.4菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌分子生物学鉴定.........................................644.2.5讨论.............................................................................................................644.3其它蔬菜镰孢菌病原菌鉴定...............................................................................654.3.1甜瓜茄病镰孢根腐病.................................................................................654.3.2南瓜茄病镰孢根腐病.................................................................................664.3.3西瓜尖孢镰孢叶腐病.................................................................................664.3.4洋葱尖孢镰孢鳞腐病.................................................................................674.3.5由两种镰孢菌引起的分枝列当枯萎病.....................................................684.4本章小结...............................................................................................................70第五章结论与讨论.........................................................................................................715.1结论.......................................................................................................................715.2讨论.......................................................................................................................715.2.1蔬菜根部镰孢菌病害的严重性和复杂性.................................................71VI 5.2.2分子生物学在镰孢菌分类鉴定中的必要性.............................................725.2.3土传真菌病害病原菌鉴定在病害防控方面的重要性.............................73参考文献.............................................................................................................................75附录一.............................................................................................................................80附录二.............................................................................................................................87致谢...............................................................................................................................101作者简介...........................................................................................................................102VII 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展蔬菜在人们的饮食结构中占据着重要的地位，其良好的营养价值和药用价值逐渐得到世界的广泛认可。据研究，蔬菜中含有多种抗氧化物质，如维生素和矿物微量元素。所以，蔬菜不仅仅是健康的食物，它还具有效缓解人体损伤，预防多种疾病发生的功效。随着我国现代蔬菜产业的不断发展，由镰孢菌属（Fusarium）真菌引起的蔬菜病害的发生逐年严重，成为制约我国蔬菜产业健康发展的重要因素。1.1蔬菜栽培现状中国作为世界农业发源地之一，具有悠久的蔬菜栽培历史。早在3500年前，殷商甲骨文就有了关于蔬菜栽培的记载。发展到21世纪，蔬菜产业依然是我国农业中重要的组成部分。得益于改革开放，我国近代蔬菜产业的长足发展开始于上世纪80年代。1985年我国蔬菜的种植面积仅为4753千公顷，总产量为8243万吨，产业总值仅为350亿元。而2009年我国蔬菜种植面积达18414千公顷，总产量为60000.02万吨，总产值高达8800亿元，占农林牧渔类产业总值的24.98%。自2009年我国蔬菜总产量突破了60000万吨后，我国蔬菜的总产量呈逐年上升的趋势。2010年蔬菜种植面积为18999.89千公顷，产量达65099.41万吨；2011年蔬菜种植面积为19639.16千公顷，总产量达67929.67万吨；2012年蔬菜种植面积为20352.57千公顷，总产量达到了70000万吨。到2014年，我国蔬菜种植面积达21404.79千公顷，总产量达76000万吨，蔬菜产量首次超过粮食产量，蔬菜也成为我国最具经济价值的农产品（尤帅，2016）。中国已经成为世界上名副其实的“菜篮子”，蔬菜产业成为我国农业和农村经济发展的支柱型产业（刘李峰等，2006）。亚洲是世界最大的蔬菜生产地区，以中国和印度为代表。2009年，印度蔬菜总产量就达9076万吨，而后逐年增长。欧洲是世界蔬菜的第二大主要生产区域，2009年欧洲蔬菜总产量为8745万吨。其中俄罗斯的蔬菜产量较大，种植面积逐年上升，2009年达到65.4万公顷（李金秀，2010）。其次的主产区依次为非洲、北美洲、大洋洲和南美洲。美国是世界上第四大蔬菜生产国，商品蔬菜生产地区遍及37个州，种植面积达130万公顷（郑远，2008）。还有非洲的尼日利亚，亚洲的日本、韩国等国家，蔬菜产业蓬勃发展，日新月异。蔬菜是鲜食农产品，随着生活水平的提高，人们逐渐开始追求绿色、高品质的蔬菜。这些意识形态将促进蔬菜生产更加产业化、集约化、设施化、精准化和绿色化，对世界蔬菜产业提高了要求，为各国政府和蔬菜种植者提出了新的挑战。1.2国内外蔬菜镰孢菌根部病害的发生概况镰孢菌属（Fusarium）种类繁多，分布广泛，而且寄主多样，可侵染寄主并导致死亡，在世界范围内对蔬菜生产造成了极大的经济损失。目前已报道的镰孢菌超过500多种（Kirketal.，1 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展2001），其中国外已报道可侵染蔬菜的镰孢菌有180种，涉及种、亚种、变种和专化型。FungalDatabases（2017:https://nt.ars-grin.gov/fungaldatabases/）中正式收录国内可侵染蔬菜的镰孢菌有61个种，其中侵染豆科蔬菜的镰孢菌有26种，葫芦科22种，茄科16种，百合科11种，藜科10种，旋花科9种，伞形科2种，天南星科1种，十字花科2种，薯蓣科1种，姜科1种。我国蔬菜上报道过的镰孢菌专化型多达十余种，常见的尖孢镰孢专化型有12种，分别为尖孢镰孢甘薯专化型F.oxysporumf.sp.batatas、尖孢镰孢甜菜专化型F.oxysporumf.sp.betae、尖孢镰孢黄瓜专化型F.oxysporumf.sp.cucumerinum、尖孢镰孢薯蓣专化型F.oxysporumf.sp.dioscoreae、尖孢镰孢蚕豆专化型F.oxysporumf.sp.fabae、尖孢镰孢番茄专化型F.oxysporumf.sp.lycopersici、尖孢镰孢甜瓜专化型F.oxysporumf.sp.melonis、尖孢镰孢西瓜专化型F.oxysporumf.sp.niveum、尖孢镰孢豇豆专化型F.oxysporumf.sp.phaseoli、尖孢镰孢黄瓜根茎腐专化型F.oxysporumf.sp.radicis-cucumerinum、尖孢镰孢粘团专化型F.oxysporumf.sp.conglutinans、尖孢镰孢苦瓜转化型F.oxysporumf.sp.momordicae等。茄病镰孢专化型有19种，蔬菜作物上的寄主专化型有5种，为茄病镰孢瓜类专化型F.solanif.sp.cucurbitae、茄病镰孢山椒专化型F.solanif.sp.xanthoxyli、茄病镰孢蚕豆专化型F.solanif.sp.phaseoli、茄病镰孢豌豆专化型F.solanif.sp.pisi、茄病镰孢胡椒专化型F.solanif.sp.pipers等。镰孢菌可以侵染植株的根、茎、花及果实，一些镰孢菌也可以侵染叶片，引起根腐、茎腐、穗腐、花腐、果腐等多种病害，引起植株死亡，导致严重减产，造成巨大经济损失（张向民，2005）。欧美国家对蔬菜根部镰孢菌病害的研究起步较早。1809年，Link首次在锦葵科植物上发现镰孢菌，并建立镰孢菌属（FusariumLink）。1925年，在美国佛罗里达州发现了黄瓜枯萎病；1932年在南非发现了由茄病镰孢F.solani引起的南瓜根茎腐病，当时被定名为爪哇镰孢F.javanicum，该病害随后在加拿大、美国等地相继发生。2003年在北美地区报道了层出镰孢F.proliferatum可引起大蒜根腐病（Duganetal.，2003）。2004年在土耳其报道了番茄根镰孢F.oxysporumf.sp.radicis-lycopersici可引起番茄枯萎病(Canetal.，2004)。2013年，美国伊利诺伊州发生了由同生镰孢F.commune和尖孢镰孢F.oxysporum复合侵染辣根的严重病害（Yu&Babadoost，2013）。2014年，美国和加拿大温室番茄发生严重的枯萎病，最终确认病原菌为紧密镰孢F.striatum（Moineetal.，2014）。在我国，1950年云南省首次报道了由燕麦镰孢F.avenaceum和尖孢镰孢F.oxysporum引起的蚕豆枯萎病，以及由茄病镰孢F.solani引起的蚕豆干腐病（俞大绂和方中达，1950）。1962年在江西省报道了由镰孢菌Fusariumsp.引起的甘薯腐烂病。1964年在黑龙江绥化报道了由燕麦镰孢F.avenaceum引起的大豆苗期枯萎病。2004年10月，北京南口甘蓝爆发枯萎病，经鉴定确定病原菌为尖孢镰孢粘团专化型F.oxysporumf.sp.conglutinans（李明远等，2003；李明远，2004）。2014年山东聊城花椰菜爆发镰孢菌枯萎病，受灾面积达300余亩，为多种镰孢菌复合侵染所致。2015年沧州嫁接甜瓜连连出现死苗，减产严重，究其原因是茄病镰孢F.solani引起的南瓜砧木根腐病。而尖孢镰孢西瓜专化型F.oxysporumf.sp.niveum分布于我国各个西瓜产区，能够导致西瓜毁灭性的病害，给西瓜产业带来灾难性破坏（蓝江林等，2007）。此外，镰孢菌次级代谢产物可以产生多种毒素，如伏马毒素和ALL毒素等，毒素富集于粮食和饲料中，能够引起人和牲畜中毒，严重者导致肝脏衰竭，引发癌症（张向民，2005）。由此2 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展可见，镰孢菌属对农业生产、人类生活具有重大影响。因此，做好镰孢菌属分类工作对指导田间生产和人类健康都具有十分重大的意义。1.3镰孢菌属分类鉴定研究进展镰孢菌属（Fusarium）隶属于无性型真菌（Anamorphicfungi），丝孢纲（Hyphomycetes）。其有性态有赤霉属（Gibberella），丽赤壳属（Calonectria），丛赤壳属（Nectria）和小赤壳属等属（Micronectriella）（陈鸿逵和王拱辰，1991）。镰孢菌属种类繁多，很多种之间差异较小，且形态多变，所以镰孢菌属是真菌类群里最难分类的属，同时也是最具研究价值的属。1.3.1国外镰孢菌属分类鉴定研究进展1809年，Link首次在锦葵科植物中发现镰孢菌，命名为粉红镰孢F.roseumLink，并以此为模式种建立属内分类。19世纪末20世纪初，是镰孢菌属分类最为混乱的一个时期，许多学者相继描述了大量的新种，多达上千个种、变种及型，许多其它属的菌（如柱隔孢属Ramularia、小核菌属Sclerotium、柱孢属Clylindrocarpon等）也被命名为镰孢菌（王拱辰等，1996）。探究原因有两点：第一、镰孢菌形态易受外界环境影响，形态变异较大。许多分类学者没有意识到镰孢菌的多形性和变异性，没有或很少考虑培养性状的问题，在缺乏必要的性状依据下便定为新种；第二、当时处于命名的黄金时期，命名人甚至都没有见到新种便加以命名描述（Toussoun&Nelson，1975）。直到1935年，Wollenweber等出版了镰孢菌专著《DieFusarien》，第一次提出了较为完整的镰孢菌属分类系统，极大的促进了镰孢菌属分类工作的系统化和标准化，之后在长达半个世纪的时间内，以Wollenwebe&Reinking（1935）为基础，不同学者又相继提出10种镰孢菌属的分类系统，分别是Snyder&Hansen（1940）、Raillo（1950）、Gordon（1952）、Messiaen&Cassini（1968）、Bilai（1970）、Booth（1971）、Matuo（1972）、Joffe（1974）、Gerlach&Nirenberg（1982）、Nelson&Toussoun&Marasas（1983）。Wollenweber&Reinking（1935）分类系统多以形态特征为分类依据，主要包括分生孢子的特征和菌株培养性状，如大小、形状、隔膜数、色素、分生孢子座、菌核等。Wollenweber等用7种培养基培养镰孢菌，通过观察各菌之间培养性状的差别，将镰孢菌属1000多个种、变种或型归于16个组或群、6个亚组或亚群、65个种、55个变种和22个型（Wollenweber&Reinking，1935）。但由于镰孢菌的不稳定性，同种菌株在不同培养基上的培养性状又有所差异，导致该分类系统变得十分复杂，难以在实践中应用，倍受人们争议。Snyder&Hansen（1940）分类系统强调了镰孢菌变异性的重要性，提出镰孢菌分类鉴定必须使用单孢分离的菌株。研究方法是将单孢分离后的菌株在相同的培养基、相同的条件下进行培养，观察和记录镰孢菌形态特征。该分类系统不采用组而直接采用种，提出9种的分类系统（Snyder&Hansen，1940），大大简化了Wollenweber&Reinking（1935）分类系统。由于该系统将种的概念规划太宽，在实际应用中过于简单而不能反映客观现实，所以认可度不高。3 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展Raillo（1950）分类系统采用单孢分离的方法，将大孢子的弯曲度和顶端细胞的形状作为鉴定最基本的依据，否定其它性状。该系统包括17个组，12个亚组，55个种，10个亚种，55个变种，61个型（Raillo，1950）。但依据的鉴定性状并不稳定，变异性甚大，所以该分类系统并不比Wollenweber&Reinking（1935）的简单，例如多出一个组，又在55个种内有10个亚种。Gordon（1952）分类系统是Wollenweber&Reinking（1935）和Snyder&Hansen（1940）分类系统之间的折中产物。该系统共14个组，26个种，5个变种，69个型，其中有66个型是尖孢镰孢（Gordon，1952）。Messiaen&Cassini（1968）分类系统支持Snyder&Hansen的9种分类系统，包括9个种，9个变种。但对一些问题进行了修改，如采用植物学的变种来代替培养型（Messiaen&Cassini，1968）。Bilai（1970）分类系统试图根据形态和生理两个方面进行分类鉴定，如温湿度对孢子萌发的影响等。但一直没有发表过详尽的讨论或检索表，无法深入研究。Bilai在《Fusaria》一书中，接受了Snyder&Hansen（1940）的9个种分类思想，把镰孢菌划分为9个组，26个种，29个变种（Bilai，1955）。Booth（1971）分类系统吸收了Wollenweber&Reinking（1935）分类系统的合理部分，首次提出把分生孢子梗或产孢结构的形态作为镰孢菌的鉴定依据，强调单孢分离菌系，强调镰孢菌形态变异性，强调标准培养，受到大多数镰孢菌分类工作者的认同。1971年，《TheGenusFusarium》一书出版，将镰孢菌属划分为12个组，44个种，7个变种（Booth，1971），并描述寄主范围和地理分布，为镰孢菌分类做出了突出的贡献。Matuo（1972）分类系统是完全支持Snyder&Hansen（1940）的9个种分类系统，并于1972年提出包含10种的分类系统（Matuo，1970），在Snyder&Hansen的基础上提出一个新种，但并没有被人们认可。Joffe（1974）分类系统将镰孢菌划分为13个组，33个种，14个变种（Joffe，1974）。后来在1986年又提出新的划分，包括12个组，20个种，6个变种，含有分组分种检索表，具有对种的详细描述和插图。Gerlach&Nirenberg（1982）分类系统继承了Wollenweber&Reinking（1935）的研究方法，将菌株在7种培养基上进行培养，以菌株间的差异作为建立种或变种的基础，将有性世代和无性世代相联系，将镰孢菌划分为16个组，65个种，18个变种（Gerlach&Nirenberg，1982）。而在1986年两人合著《TheGenusFusarium-APictorialAtlas》中，又提出16个组，90多个种的划分。Nelson&Toussoun&Marasas（1983）分类系统则是以Wollenweber&Reinking（1935）的系统为基础，吸收多个分类系统的优点，结合近20年的研究成果而建立的分类系统。该系统将镰孢菌划分为12个组，46个种，种下不设变种和型。该系统种的概念清晰明了，主要以菌的形态特征为分类依据，应用方便，如大型分生孢子的形态、小型分生孢子的形态、产孢结构、厚垣孢子的有无、菌落的性状等（Nelsonetal.，1983）。各个分类系统纷繁复杂，但迄今为止，仍然没有一种分类系统可以被公认为是最合理的和最完善的分类系统，镰孢菌属也被认为是真菌类群中在分类上最难的一个属。原因有以下两点：4 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展一是由于镰孢菌易受环境影响而产生变异，极具不稳定性；二是由于不同学者对镰孢菌分类仍存在很大分歧，各成系统，各有千秋，无法统一思想，给分类鉴定工作带来阻力。然而，从分类系统和鉴定的发展趋势来看，一种或几种分类系统被大多数分类工作者所认同，如当前我国许多镰孢菌分类工作者多采用Booth（1971）分类系统；此外，分类依据更加合理、全面，鉴定方法更趋于科学、统一。1.3.2国内镰孢菌属分类鉴定研究进展我国早期的镰孢菌分类工作以Wollenweber&Reinking（1935）分类系统为参考。1958年，前苏联科学家拉依洛的《Fusarium》的中文译本问世，曾一度在中国盛行。但是，这两个系统的分类依据复杂，种的概念狭窄，不易于被广大学者所掌握（张素轩，1991），使得分类工作进展缓慢。直到上世纪70年代，Booth（1971）分类系统受到多个国家分类学者的普遍接受，也得到我国镰孢菌工作者的认同，陈其煐（1988）将《TheGenusFusarium》一书译成中文，为我国广大镰孢菌分类工作者提供了方便。俞大绂最早在国内开展镰孢菌属分类学研究工作，根据Wollenweber&Reinking（1935）分类系统鉴定出我国镰孢菌44个种，35个变种，并在1955年发表了《中国镰刀属（Fusarium）菌种的初步名录》，留下了“中国镰刀菌属菌种初步名录”及其“寄主名录”，对多种镰孢菌植物病害进行了详细阐述，为我国镰孢菌鉴定工作奠定了基础（俞大绂，1955）。陈庆涛（1973-2002），郭英兰，付秀祥和白彦逢等对中国镰孢菌属进行了系统研究。陈鸿逵等（1982）在研究麦类病穗镰孢菌过程中，发现了快速诱发产生子囊壳的方法，使得镰孢菌较为容易的产生大型分生孢子。白逢彦以Wollenweber和Reinking（1935）的分类系统为基础，分离研究了全国（除台湾省）3000多株镰孢菌，初步确定了40个种、变种，发表1个新种，5个新记录种（白逢彦，1987）。陈鸿逵和王拱辰（1991）以Booth（1971）分类系统为参考，对浙江省内2000余份镰孢菌标本进行了鉴定，共鉴定出28个种和6个种级下品种，发表在《浙江镰孢志》。1972年到1985年，我国台湾中兴大学与美国加州大学合作开展对镰孢菌的研究，发表20余篇学术研究论文。孙守恭与黄振文（1996）整合台湾地区54篇镰孢菌研究论文，编著出版了《台湾植物镰孢菌病害》。目前，吕国忠及其团队正在编写《中国真菌志镰孢属》。曹丽华（2001）对麦类穗腐镰孢菌13个种或变种的三种同工酶进行了聚丙烯酞胺凝胶电泳分析，结果表明不同种同工酶谱差异显著且稳定，可作为鉴定的辅助指标。袁薇薇（2013）通过SRAP-PCR技术对镰孢菌进行聚类分析，可将121株镰孢菌分为6个类群，12个亚类群，并将尖孢镰孢与其他种进行了明显的区分。1.4镰孢菌属分类鉴定方法传统形态学鉴定在真菌的鉴定中被广泛接受和使用。在长期探索研究的实践基础上，分类工作者对镰孢菌的保存和形态学鉴定方法进行了归纳统一，并找到了某些菌种产生特殊结构的科学培养方法。使用合适的培养基培养，观察、鉴别其特征，依然是现在常用的鉴定镰孢菌的方法（缪承杜和洪葵，2007）。5 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展然而真菌的形态特征复杂多变，传统方法对真菌进行分类鉴定常出现误差和分歧。随着病原菌鉴定技术的发展，电镜技术类法、数值分类法、蛋白质与同工酶技术、营养体亲和群（vegetativecompatibilitygroups，VCG）技术及分子生物学等技术不断应用于植物病原真菌的鉴定（柳凤等，2015），特别是PCR技术的发展，相比传统的分类方法更加直接、准确和可靠。它能够从核酸水平上反映出真菌个体或群体之间遗传上的差异性和进化关系，从而使人们对真菌遗传的本质和差异有了更为深刻的认识。1.4.1形态学鉴定1.4.1.1菌落特征Booth（1971）采用生长速率来表示菌落的生长速度，Nelson（1983）则以菌株在PDA培养基上生长10~14d的菌落直径为分类依据；此外，气生菌丝的有无、培养物颜色的变化、分泌物颜色的不同都是分类鉴定的辅助性状，如在某些组中培养物颜色有一定的一致性和稳定性。不同种间分生孢子座或粘孢团的颜色也有不同，可以区分马特组真菌，该组镰孢菌产生蓝绿色的分生孢子座，而其它分生孢子座多为橘黄色到红褐色（叶琪明，2002）。1.4.1.2大型分生孢子特征大型分生孢子的隔膜数主要用于区分隔膜数差别较大的种，如雪腐镰孢F.dimerum仅有0~4个隔膜，多隔镰孢F.decemcellulare有9~13个隔膜；大型分生孢子的形状也是重要鉴定依据，主要有三种类型：第一种大型分生孢子窄似针状，直线型。第二种大型分生孢子腹背分明，孢子和孢子的每部分均有弯曲度。第三种大型分生孢子的背部明显比腹部弯曲，孢子的中部比细胞两端要宽；大型分生孢子的顶细胞和足细胞也是重要的分类依据，顶细胞有四种形状：钝状、乳突状、钩状、尖端细状。足细胞也有四种：足型、长足型、凹口型和无凹口型（Booth，1971；白逢彦，1987；Burgessetal.，1994）。1.4.1.2小型分生孢子特征小孢子是分组的主要依据，因为并不是所有的镰孢菌都会产生小型分生孢子，所以它是一个重要的特征。小型分生孢子、产孢细胞的着生点、分隔数、小型分生孢子在产孢细胞上的排列方式等都是很重要诊断特征，是马特组、李瑟组、直孢组和美丽组的重要分类依据。第一个依据是大小：小型分生孢子的隔膜数一般是0或1，但是有的种的孢子会有两个隔膜。可以把孢子的平均长度和隔膜数量作为判断依据；第二个依据是小型分生孢子的形态：常见孢子形态有椭圆形、肾形、倒卵球形（具基部平截）、梨形、芫菁形、球形和梭形；第三个依据是产孢细胞的形态：单瓶梗状和复瓶梗状。层出镰孢F.proliferatum既产生单瓶梗产孢细胞又产生复瓶梗状产孢细胞。产孢细胞的长度也很重要，有长型和短型；第四个依据是小型分生孢子的着生方6 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展式：链生或者假头状着生。链的长度从几个孢子到很长。链的形成取决于培养基的使用。例如，一些种在氯化钾琼脂培养基上形成链，但在CLA上不形成。链的长度是一个非常重要的特征，气生菌丝中链的一般长度需要记录测量；有的菌会产生真头状孢子，比如说曲霉，但是镰孢菌不能，镰孢菌可以在瓶梗状产孢细胞的末端形成块状，类似于头状。链生和假头状着生可同时存在（Booth，1971；白逢彦，1987；Burgessetal.，1994）。1.4.1.3厚垣孢子在许多镰孢菌中厚垣孢子是非常重要的分类特征。厚垣孢子在进化方面不保守，不是十分稳定的性状。厚垣孢子呈单生，对生，聚生和串生，形成厚垣孢子的时间比较长（六周以上）而且不会产生很多，与CLA培养基相比，在SNA培养基上更容易产生厚垣孢子。虽然如此，仍可以作为分类辅助依据，因为有些菌种厚垣孢子的产生与否、厚垣孢子的形态及着生状况是相对稳定的（Booth，1971；白逢彦，1987；Burgessetal.，1994）。1.4.1.4其它特征最显著地次要特征是色素。培养条件和介质对于形成可比较的色素至关重要，有的对光敏感，有的对琼脂培养基的pH敏感。PDA是经常选择的培养基，进行12:12小时的光和黑暗循环处理（Burgessetal.，1994）。Benada（1963）利用色层分析法发现雪腐镰孢菌丝体的色素中含有橙、红、黄和两种洋红的成分；次生代谢物和霉菌毒素也可以作为次要鉴别特征，即使是潜在的产生毒素的能力也可以作为鉴别依据。有的菌可以产生具有气味的挥发性物质，也可以作为诊断依据（赵志慧，2008）。1.4.2致病性测定镰孢菌属真菌既可以营寄生生活，也可以营腐生生活，所以鉴定蔬菜镰孢菌病害需要进行柯赫氏法则的验证，以验证分离得到的菌株是否为导致蔬菜病害的致病菌。根据蔬菜根部镰孢菌病害的发生特点和镰孢菌的生物特性，应用于致病性研究的方法主要有胚根浸种法、伤根蘸根法、伤根灌根法、拌土接种法以及茎基部针刺或贴菌片法（方中达，2001）。1.4.3分子生物学鉴定方法目前应用于镰孢菌分类研究的分子生物学技术主要有：DNA分子标记、基因位点的应用及营养体亲和群（VCG）技术等。Guadet等（1989）率先将分子生物学方法应用于镰孢菌属的分类鉴定中。随后，O’Donnell等（1996）利用分子生物学方法对镰孢菌属做了大量的研究工作，包括镰孢菌属种间、种内的系统发育关系、有性型与无性型的联系等方面（O’Donnelletal.，1998a）。7 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展1.4.3.1DNA分子标记在镰孢菌分类中的应用目前应用于镰孢菌分类研究的DNA分子标记有限制性片段长度多态性（RELP）、随机扩增多态DNA（PAPD）、扩增片段长度多样性（AFLR）、单链构象多态性(SSCP)、简单重复序列（SSR）、内部简单重复序列（ISSR）及基于反转录转座子的IRAP分子标记技术等。DNA分子标记由于具有标记数量多、多态性高、技术简单、快速、易于自动化等许多独特的优点被广泛应用于菌株个体间及地理来源之间相关性的研究，不仅可以分析种间差异性，也可分析种内差异性。相关研究显示，利用IRAP分子标记技术对24株镰孢菌（9株拟轮枝镰孢、8株黄色镰孢、3株木贼镰孢和4株茄病镰孢）进行了遗传多样性分析，共获得844条带，其中多态性条带421（49.88%）。聚类结果和遗传相似性数据分析显示，供试菌株可形成4个类群，且这些类群的形成与菌株的地理来源之间无相关性（Arabi&Jawhar，2010）。ISSR分子标记技术也被应用于研究美丽组中尖孢镰孢和芬芳镰孢之间的遗传差异性和亲缘关系（王建明等，2011）。1.4.3.2主要位点基因在镰孢菌分类中的应用应用于镰孢菌属系统学研究的主要基因位点有rDNA基因、EF-lα延伸因子（nucleartranslationelongationfactor-lα，EF-lα）、线粒体小亚基核糖体（mitochondrialsmallsubunitrDNA，mtSSU）和编码蛋白基因β-微管蛋白（β-tubulin）、钙调蛋白（calmodulin）和组蛋白H3等（柳凤等，2015）。有的菌株通过单基因位点的最大简约性分析就可以说明一些问题，而有的菌株则需要多个基因位点多方面分析得出结论。利用EF-lα对甘肃马铃薯镰孢菌干腐病进行研究，病原菌的优势菌群为接骨木镰孢F.sambucinum，研究表明接骨木镰孢菌株均位于系统发育树的同一分支，与形态学的鉴定结果一致（李金花等，2011）。而研究小麦腐烂幼苗的内生菌时，需综合翻译延伸因子、线粒体小亚基、β-微管蛋白和钙调蛋白等序列才得出结果，为层出镰孢F.proliferatum（Kwonetal.，2001）。1.4.3.3营养体亲和群(VCG)技术在镰孢菌分类中的应用真菌的营养体亲和性又称体细胞亲和性，是指真菌菌株间菌丝能融合并交换细胞质或核物质的特性；根据营养体亲和性划分的群体称为营养体亲和群。营养体亲和群不仅能反映菌株之间的遗传相似性，而且有助于真菌繁殖方式及其群体遗传结构的分析。1985年，VCG技术应用到尖孢镰孢专化型的研究（Puhalla，1985），鉴定出了16个VCG。相关研究表明，VCG与专化型之间存在一定的对应性，即具有相同VCG的菌株属于同一专化型，而且不同专化型中的VCG数目差异性较大（柳凤等，2015）。近年来，VCG技术被广泛应用于多种植物病原真菌的研究，植物病原真菌中不同营养体亲和群的群体结构变化可以作为病害流行研究的一种重要指标（Punja，1988）。1.5目的和意义自上世纪80年代以来，我国蔬菜产业的发展迅猛，蔬菜生产不仅满足了国内消费，而且扩8 中国农业科学院硕士学位论文第一章我国蔬菜根部镰孢菌研究进展大了出口。然而，随着蔬菜产业的发展，土传镰孢菌病害的发生呈现逐年加重的趋势，其特点是寄主范围广、为害面积大、地域分布辽阔。我国著名植物病理学家愈大绂曾撰文：“无论研究镰孢菌的生理、生态、致病力、遗传变异或生理生化，一个必要的前提是所采用的菌种名称，是为大家公认的菌种。镰孢菌的分类学研究是镰孢菌生物学的各个领域研究的基础。”（愈大绂，1990）。因此，做好镰孢菌分类鉴定工作对人类的生活生产具有重大意义。目前国际上镰孢菌属的研究已发生翻天覆地的变化，我国镰孢菌的分类研究应与时俱进，将传统形态学方法和分子生物学技术有机结合，逐步完善我国镰孢菌数据库，为镰孢菌的诊断鉴定、防治、遗传多样性、次级代谢产物及生态学研究奠定基础。本研究通过在全国各蔬菜种植区进行广泛的病害调查和病样采集，采用传统的形态学特征和分子生物学手段对病害进行综合研究，掌握目前我国蔬菜根部致病镰孢菌的主要种类并不断发现新病害，为我国蔬菜病害的诊断与防治提供理论依据，为蔬菜病害相关领域研究奠定基础。1.6技术路线田间症状照相病样采集病原菌分离病原菌显微拍摄菌株保存镰孢菌鉴定菌株分离和保存形态学鉴定分子生物学鉴定致病性测定传统镰孢菌病害镰孢菌新病害分类地位生物学特征9 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2014年9月至2017年1月，课题组在北京、河南、天津、四川、甘肃、河北、山东、云南、安徽、海南、湖北、内蒙古、新疆、福建、湖南、山西等16个省45个地区的蔬菜产区对根部病害进行了广泛调查和病样采集。此外，课题组面向全国蔬菜、瓜类主产区免费提供病害诊断，接收全国蔬菜寄送病害样本。采集的样本和分离的菌株进行统一登记和鉴定，均保存于中国农业科学院蔬菜花卉研究所菜病综防课题组。2.1试验材料2.1.1蔬菜根部镰孢菌病害样本的采集2014年9月至2017年1月期间，通过病样采集和接收全国寄送病样收集蔬菜根部病害样本。对收集的病样进行详细的记录和描述，主要记录内容有病害名称、病害发生程度、病样采集时间、采集地点、采集人、病害症状、显微镜初步镜检结果等。病害发生程度分为轻度发病（+）、中度发病（++）和严重发病（+++）。对每一份病害样本进行田间症状照片采集、编号并干燥保存。2.1.2主要试验仪器数码相机索尼SONYDSC-HX50普通光学显微镜正置生物显微镜UB203i相差显微镜Nikon80i荧光显微镜OLYMPUSBX51型超净工作台北京德天佑科技发展有限公司，DTY-900型高压灭菌锅ZEALWAY公司，GI54TR型光照培养温箱江都太仓市试验厂，HTG-C型振荡培养箱上海知楚仪器，ZQLY-180型冷冻干燥机德国CHRIST，ALPHA1-4LDplus型涡旋震荡仪德国IKA公司，R104型高速冷冻离心机德国Sigma公司，3K15型微量移液器德国Eppendorf公司PCR仪美国伯乐BIO-RAD，PTC-200型电泳仪北京市六一仪器厂，DYY-6C型凝胶成像仪美国伯乐BIO-RAD，GelDocXR+型2.1.3病原菌培养基制备10 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，蒸馏水1000mL。马铃薯葡萄糖（PD）培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。康乃馨琼脂（CLA）培养基：康乃馨叶片（新鲜、灭菌、烘干失水）若干，琼脂粉20g，蒸馏水1000mL。2.1.4主要试验试剂乳酚油：苯酚（结晶体融化）20mL，甘油40mL，乳酸20mL，蒸馏水20mL，混合摇匀，存于棕色瓶内。75%酒精：纯酒精75mL，蒸馏水25mL，混匀即可。0.6%NaClO：13%次氯酸钠10mL，蒸馏水157mL，混匀，存于棕色瓶。生化试剂：DNA提取试剂盒（天跟生化科技有限公司，北京）。主要试剂包括缓冲液GP1，缓冲液GD，漂洗液PW，缓冲液GP2，洗脱缓冲液TE，电泳缓冲液1×TAE，核酸染色剂Goldenview，DNA染色剂6×LoadingBuffer，MasterMix（TaqDNA聚合酶，dNTPs），BM5000DNAMaker。引物：本次研究中所用引物均为北京博迈德基因技术有限公司合成，具体引物信息见表2.1。表2.1论文相关引物信息Table2.1Detailsofprimersusedinthisstudy目标基因引物名称引物序列片段大小参考文献TargetgenePrimernameSequenceFragmentsReferencesITS15′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′Whiteetal.ITS≈550bpITS45′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′1990CgInt25′-GGGGAAGCCTCTCGCGG-3′Brownetal.ITS≈550bITS45′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′1996NL-15′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′O’Donnell,28SrRNA≈600bpNL-45′-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3′1992EF1Ha5′-ATGGGTAAGGARGACAAGAC-3′O’DonnelletEF-1α≈720bpEF2Tb5′-GGARGTACCAGTRATCATGTT-3′al.1998bEF1-983f5′-GCYCCYGGHCAYCGTGAYTTYAT-3′TEF1≈980bpRehner,2001EF1-2218r5′-ATGACACCRACRGCRACRGTYTG-3′’NMS1a5′-CAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATG-3′mtSSU≈720bpLietal.1994NMS2b5′-GCGGATCATCGAATTAAATAACAT-3′T15′-AACATGCGTGAGATTGTAAGT-3′O’Donnell&β-tubulin≈1300bpT225′-TCTGGATGTTGTTGGGAATCC-3′Cigelnik,199711 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2.2试验方法本研究采用传统形态学鉴定、致病性测定和分子生物学鉴定手段对蔬菜根部镰孢菌进行全面鉴定。2.2.1病样镜检和病原菌的分离、纯化2.2.1.1病样镜检选取发病典型的病组织，用手术刀片刮取适量发病组织或病部霉层，置于滴有无菌水的载玻片上制成临时玻片，在光学显微镜下对病原菌的显微特征进行观察，对致病菌进行初步鉴定。若病组织较厚，则将刮取的病组织置于滴有乳酚油的载玻片上，盖上盖玻片后在酒精灯上方加热若干次，待组织透明化后再利用显微镜进行观察。2.2.1.2病原菌的分离纯化采用组织分离法对蔬菜根部病害进行病原菌分离。取组织病健交界处，切为5mm×5mm的小块，放入75%酒精或0.6%NaClO中进行表面消毒，时间分别为30s或1min，之后用消毒的镊子夹取病组织放于无菌水中漂洗3次，取出晾干。最后将晾干的病组织转移到PDA培养基中进行培养，温度为25°C，光照条件为12h光照/12h黑暗交替培养。待病组织周围长出菌丝后，用无菌接种针挑取边缘菌丝体，转移至新的PDA培养基中进行纯化。对纯化的菌株进行编号，记录菌落生长情况并拍摄培养性状。最后将纯化得到的菌株保存到PDA斜面试管中，于4°C条件下保存。单孢分离法：将镰孢菌孢子配制成低浓度的孢悬液，孢子浓度调节到4×10倍下每视野1个孢子左右，吸取一滴菌悬液放置于灭菌的盖玻片上，利用显微镜进行观察，若整个盖玻片视野中只有一个孢子，则将滴有悬浮液的灭菌盖玻片置于PDA培养基中进行培养（Leslie&Summerell，2006）。2.2.2镰孢菌形态学鉴定纯化的病原菌在PDA培养基上培养5d后进行菌落培养性状观察，部分镰孢菌菌株需要在CLA培养基上进行培养，以观察到典型的形态特征。通过光学显微镜观察并测量和记录病原菌显微形态。培养性状：菌落形状，菌丝形态（棉絮状、羊毛状、绒状、毡状、蛛丝状等），颜色，直径，生长速率等。大型分生孢子：顶细胞形状（锥形、鸟嘴形、渐尖、楔形等），基细胞形状（有无足跟），孢子形状（纺锤形、美丽形、马特形、镰刀形等），弯曲度，大小，隔膜数等。小型分生孢子：形状（球形、梨形、卵形、椭圆形、哑铃型、肾形等），着生方式（串生、假头状），大小，隔膜数等。12 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定产孢结构：层出梗，复瓶梗，多芽产孢，单瓶梗。厚垣孢子：形状，着生方式（单生、对生、串生等），颜色等。其他：子实体，菌核，分生孢子座，子囊壳等。2.2.3病原菌致病性测定将获得的病原菌进行寄主回接，完成柯赫氏法则的验证。观察实验室寄主发病症状与田间发病症状是否保持一致，验证发病的寄主中分离的病原菌与接种病原菌是否一致，并记算病原菌的致病力。具体操作如下：催芽：选取饱满的种子，用55°C无菌水浸泡种子2h后，把种子放在底部铺有湿润纱布的保湿盒中，置于28°C的恒温箱中进行催芽，备用。菌种培养：将保存的菌种在PDA平板上活化后，转接至PD液体培养基中，放在摇床上28°C振荡培养7d，用于菌悬液的制备。菌悬液的制备：将在PD液体培养基中培养好的菌株用双层纱布过滤除去菌丝，5000rpm离心10min后，弃上清液，取沉淀物加入适量的蒸馏水，再用血球计数板将菌悬液调配成浓度为1×106mL-1的孢子悬浮液备用。接种方法有以下3种：伤根灌根法。待蔬菜苗长至2~3片真叶时，利用灭菌牙签对植株侧根进行损伤，在伤口周围1cm处扎一约3~4cm的小穴，沿小穴灌入10mL的菌悬液，以灌入10mL的无菌水的植株为清水对照。蘸根接种法。蔬菜幼苗在一叶一心时，拔出幼苗，洗去泥土，将根部稍加损伤，在接种液中浸泡15min并不断摇晃，最后定植在消毒土中。对照处理用无菌水浸泡根部15min并不断摇晃，最后定植。胚根浸种法。种子出芽长2~3mm左右时进行接种，将胚根长度一致的种子置于小烧杯内，注入菌悬液，浸泡30min后倒去菌悬液，立即播种于装有灭菌土的塑料钵内，覆土。对照处理用无菌水浸泡30min后，立即播种，覆土。试验一般设置3次重复，每个重复设10个处理。接种后，每天观察植株的长势和发病情况，及时记录并采集症状图像。待植株发病后，完成柯赫氏法则的验证，确认分离得到的镰孢菌为导致蔬菜根部病害的致病菌。根据调查结果分析病害的发病程度并计算病情指数，病害评估标准和病情指数公式2-1如下：0级：无病症1级：真叶或子叶上出现轻微萎蔫，但生长正常2级：真叶或子叶上出现明显的坏死斑，根部出现病变，生长受到一定影响3级：根部坏死引起局部性萎蔫，或生长僵化4级：整体萎蔫，倒伏枯死，根部严重病变病情指数=[∑(各级病株数×相对级数值)/(总株数×最高级数代表值)]×100公式2-113 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2.2.4分子生物学鉴定方法2.2.4.1菌丝体的收集将供试菌株于PDA平板上活化，在26°C下培养5d，用无菌接种针从菌落边缘挑取三小块（5mm×5mm）菌丝块转入PD培养基中，在28°C，120rpm的恒温摇床上震荡培养7d左右，至有菌丝球出现。用双层无菌纱布过滤，控去多余水分，收集菌丝。用无菌锡箔纸包裹收集的菌丝，在冷冻干燥机中进行真空抽提5d，之后放于-20°C冰箱中保存备用。2.2.4.2基因组DNA的提取本研究均采用试剂盒法对DNA进行提取，DNA试剂盒由北京天根生化科技有限公司提供。具体方法如下：（1）取冷冻抽干的菌丝约100mg，加入液氮充分碾磨。（2）将研磨的粉末移入无菌的1.5mL离心管中，加入700µL65°C预热缓冲液GP1（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），颠倒混匀后，将离心管放在恒温水浴锅中65°C水浴20min，水浴过程中每5min颠倒一次离心管。（3）加入700µL氯仿，充分混匀，12,000rpm（~13,400×g）离心5min。（4）将步骤3中所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700µL缓冲液GP2，充分混匀。（5）将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000rpm（~13,400×g）离心30sec，弃掉废液。（一次加入700µL液体，分两次进行离心。）（6）向吸附柱CB3中加入500µL缓冲液GD（缓冲液GD加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。（7）向吸附柱CB3中加入600µL漂洗液PW（漂洗液PW已加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。（8）重复操作步骤7。（9）将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉废液。将吸附CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。（10）将吸附柱CB3转移至新的离心管中，向吸附膜中滴加75µLddH2O，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，收集溶液于-20°C冰箱中保存。2.2.4.3琼脂糖凝胶电泳检测用1.2％琼脂糖凝胶（0.24g琼脂糖+20mL1%TAE缓冲液+1μLgoldenview）进行DNA检测。取DNA样品与6×LoadingBuffer各2μL混匀加入胶孔中，置于130V电压电泳25min，之后将凝胶置于凝胶成像仪中观察是否有单一的明亮条带产生，并通过软件系统进行拍照。14 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2.2.4.4PCR扩增本研究通过对镰孢菌的核糖体转录间隔区（ITS），线粒体小亚基（mtSSU），翻译延长因子（TEF-1α)和β微管蛋白（β-tubulin）等基因进行序列分析。通过PCR对以上基因进行序列扩增，反应体系和反应程序如下。PCR反应体系（25μL）见表2.2：表2.2PCR反应体系Table2.2Polymerasechainreaction(PCR)反应体系阴性对照ReactionsystemNegativecontrol引物11μL引物11μL引物21μL引物21μLMix12.5μLMix12.5μL模板DNA2μL模板DNA0μLddH2O8.5μLddH2O10.5μLPCR反应程序见表2.3，参考文献见表2.1：表2.3PCR反应程序Table2.3ThePCRconditionsforamplification引物专一性PCR反应程序PrimercodeSpecificityReactionconditionsITS1/ITS4属94°C4min，（94°C1min，55°C1min，72°C1min）35cycles，72°C10minCgInt2/ITS4种94°C4min，（94°C1min，55°C30s，72°C1min）35cycles，72°C10minNL-1/NL-4种95°C4min，（94°C1min，55°C1min，72°C2min）35cycles，72°C10minEF-1/EF-2种94°C4min，（94°C1min，55°C1min，72°C1min）35cycles，72°C10minEF1-983f/EF1-2218r种94°C4min，（94°C1min，56°C1min，72°C1min）35cycles，72°C10minNMS-1Ha/NMS-2Tb种94°C4min，（94°C1min，60°C1.5min，72°C2min）35cycles，72°C10minT1/T22种94°C4min，（94°C1min，55°C1min，72°C1min）35cycles，72°C10min2.2.4.5PCR扩增序列分析取5μLPCR扩增产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳检测，其余扩增产物送至北京博迈德基因技术有限公司进行测序。所得序列在GenBank中进行BLAST核酸序列比对，确定病原菌的种级分类地位，并将序列提交至NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）中。通过MEGA5.1软件中N-J法构建系统发育树辅助分析。15 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2.3病原菌分离和初步鉴定结果采集的样本和分离的菌株均保存在中国农业科学院蔬菜花卉研究所菜病综防课题组，菌株的详细信息和初步鉴定结果见表2.4，分离菌株涉及镰孢菌属（Fusarium），刺盘孢属（Colletotrichum），以及漆斑菌属（Myrothecium）三个属。相同病原菌的拉丁名和异名详见附录二。表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationBC14061407大白菜大白菜根腐病茄病镰孢F.solani2014.06河北省张北县BC14092540大白菜大白菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2014.09河北省沽源县BC1405140301大白菜大白菜根腐病茄病镰孢F.solani2014.05山东潍坊农科院BC1405140302大白菜大白菜根腐病茄病镰孢F.solani2014.05山东潍坊农科院BC14110501-1大白菜大白菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2014.11北京南口基地BC14092810大白菜大白菜根腐病茄病镰孢F.solani2014.09河北省尚义县BC11101901大白菜大白菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.10甘肃省榆中县BC1106200202大白菜大白菜根腐病茄病镰孢F.solani2011.06河北省廊坊市BC1608240512大白菜大白菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2016.08内蒙古乌兰察布BC1608311301大白菜大白菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.08张家口市张北县BC14110501-2大白菜大白菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2014.11北京南口基地BH15072412百合百合枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.07甘肃省榆中陶家窑CD15080809菜豆菜豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.08甘肃酒泉市CD15072803菜豆菜豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07甘肃酒泉市泉湖乡CM15040305草莓草莓枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04廊坊垡上村CM1503180302草莓草莓枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03山东聊城农科院CM15042623草莓草莓枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04成都市CM15110607草莓草莓枯萎病茄病镰孢F.solani2015.11河北邯郸肥乡县DG1607060504冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆金凤镇虎峰村DG1607060503冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆金凤镇虎峰村DG160706040201冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆金凤镇虎峰村DG1607060501冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆金凤镇虎峰村DG160706040202冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆九龙坡金凤镇DG160706040203冬瓜冬瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07重庆九龙坡金凤镇DS15052101大蒜大蒜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05天津宝坻蔬菜中心DS1505210102大蒜大蒜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05天津宝坻蔬菜中心16 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationDS15121703大蒜大蒜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.12四川省彭州市荥阳DY16011401绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011402绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011403绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011404绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011405绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011406绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011407绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011408绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011409绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011410绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011411绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011412绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011413绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011414绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011415绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011416绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011417绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011418绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博DY16011419绿豆芽绿豆芽炭疽病尖孢刺盘孢C.acutatum2016.01山东淄博FQ15031603番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03宁夏石嘴山FQ15042002番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省烟台市FQ15041601番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04天津市宝坻区FQ1504240101番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ1504240102番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ1504240103番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ1504240104番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ1504240105番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ1504240106番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东省海阳市FQ15051839番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.05甘肃省银达市FQ15062501番茄番茄根腐病茄病镰孢F.solani2015.06不详FQ15071503番茄番茄根腐病茄病镰孢F.solani2015.07内蒙古赤峰17 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationFQ1509080202番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.09山西运城市新绛县FQ15082502番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.08甘肃FQ1511180501番茄番茄根腐病茄病镰孢F.solani2015.11北京通州郭县镇FQ1511180502番茄番茄根腐病茄病镰孢F.solani2015.11北京通州郭县镇FQ15110406番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.11河北邯郸肥乡县FQ15102105番茄番茄根腐病茄病镰孢F.solani2015.10山西运城是新绛县FQ16011204番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01河南汝南FQ1606050101番茄番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.06瓦房店FQ16050827番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05瓦房店FQ04-001番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2004.01北京大兴FQ09070301番茄番茄枯萎病木贼镰孢F.equiseti2009.07山东省潍坊蔬菜所FQ051124番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2005.11不详FQ11030902番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.03瓦房店FQ1015番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2010.01瓦房店FKW-C3番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum-----瓦房店FQ05122401番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2005.12昌平通讯部队04-001番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2004.01大兴FQ16050827番茄番茄枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05瓦房店GJ15122204柑橘柑橘枯萎病茄病镰孢F.solani2015.12河南洛河GL09082208结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2009.08湖北火烧坪GL1110160402结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.10甘肃省榆中县GL14091709结球甘蓝结球甘蓝枯萎病同生镰孢F.commune2014.09北京南口基地GL09101502结球甘蓝结球甘蓝枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2009.17河南省安阳县GL1110160403结球甘蓝结球甘蓝枯萎病木贼镰孢F.equiseti2011.10甘肃省榆中县GL1109160401结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.09河北省张家口GL0908220802结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2009.08湖北省火烧坪GL1110160202结球甘蓝结球甘蓝枯萎病木贼镰孢F.equiseti2011.10甘肃省榆中县GL11101616甘蓝甘蓝根腐病烟草镰孢F.tabacinum2011.10甘肃榆中县GL1110160201结球甘蓝结球甘蓝枯萎病木贼镰孢F.equiseti2011.10甘肃省榆中县GL080404结球甘蓝结球甘蓝枯萎病层出镰孢F.proliferatum2008.04不详GL08040402结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2008.04不详GL12052202结球甘蓝结球甘蓝枯萎病燕麦镰孢F.avenaceum2012.05西藏农科院原种场18 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationGL12061902结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2012.06甘肃省榆中县GL11101403结球甘蓝结球甘蓝枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.10北京市南口基地HCT09110501紫菜薹紫菜薹枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2009.11不详HHC15070301黄花菜黄花菜花腐病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07四川省大罗镇政府HG15032605黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03广东茂名农技站HG15032315黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03广东茂名市谢鸡镇HG1503260501黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03广东茂名农技站HG15041367黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光HG15041370黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光HG15042533黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.04成都市威远县HG15041448黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光HG15051321黄瓜番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05山东临沂县苏村镇HG15051714黄瓜番茄枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05云南建水县曲江镇HG15051902黄瓜黄瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.05甘肃酒泉肃州区HG15021415黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.02山东临沂伊汶镇HG15051326黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05山东临沂市苏村镇HG15051838黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.05甘肃银达非耕地HG15061107黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.06蔬菜花卉研究所HG15061901黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.06河南省禹州市HG15061902黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.06河南省禹州市HG15051109黄瓜黄瓜花腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.05山东寿光亿嘉农化HG1505110902黄瓜黄瓜花腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.05山东寿光亿嘉农化HG15071307黄瓜黄瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.07山东聊城农科院HG15071301黄瓜黄瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.07湖南省张家界HG15061903黄瓜黄瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河南省禹州市HG15091101黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.09天津绿丰公司HG1509110102黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.09河北张家口张北县HG15121807黄瓜黄瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.12福建漳州南靖县HG16032112黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.03山西运城HG16051306黄瓜黄瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05山东沂南HG1607172602黄瓜黄瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07新疆昌吉市阜康县HYC1410080101花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡19 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationHYC1410080201花椰菜花椰菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080401花椰菜花椰菜枯萎病层出镰孢F.proliferatum2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080202花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080203花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080204花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080301花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080401花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080102花椰菜花椰菜根腐病茄病镰孢F.solani2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080103花椰菜花椰菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2014.10山东莘县王庄集乡HYC1410080205花椰菜花椰菜枯萎病层出镰孢F.proliferatum2014.10山东莘县王庄集乡J1605130301姜姜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05山东昌邑JC1504200102韭韭菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东莱州市掖县JD15032801豇豆豇豆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03辽宁省海城市JD15042512豇豆豇豆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04成都龙溪镇东岳村JD1504251501豇豆豇豆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04成都市JD1512140502豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.12三亚亚洲区崖城镇JD15072607豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07甘肃武威华藏寺镇JD1512140503豇豆豇豆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.12海南三亚JD1601220208豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220209豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220204豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220207豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220205豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220201豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220202豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220203豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JD1601220206豇豆豇豆枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南三亚JHN1504261302菊花脑菊花脑枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04成都市JQSC15070818结球莴苣结球莴苣枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.07河北张家口张北县JQSC15070816结球莴苣结球莴苣枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.07河北张北县馒头营JYWJ1507072802茎用莴苣茎用莴苣枯萎病层出镰孢F.proliferatum2015.07河北张北县赐儿山JYWJ15091106茎用莴苣茎用莴苣枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.09河北张家口张北县20 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationJYWJ1507072801茎用莴苣茎用莴苣枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07河北张北县赐儿山KC14083002散叶大白菜散叶白菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2014.08云南呈贡农业基地LB11010605长羽裂萝卜萝卜枯萎病半裸镰孢F.incarnatum2011.10云南悬洪市LD1508081501分枝列当分枝列当枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.08新疆昌吉州阜康市LD1508081502分枝列当分枝列当枯萎病锐顶镰孢F.acuminatum2015.08新疆昌吉州阜康市LD16082301分枝列当分枝列当枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.08内蒙古四子王旗LD16082304分枝列当分枝列当枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.08内蒙古四子王旗LD16082305分枝列当分枝列当枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.08内蒙古四子王旗LD16082302分枝列当分枝列当枯萎病锐顶镰孢F.acuminatum2016.08内蒙古四子王旗LD16082303分枝列当分枝列当枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.08内蒙古四子王旗LG1607172003薄皮甜瓜薄皮甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.07新疆昌吉市阜康县LG1607172001薄皮甜瓜薄皮甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07新疆康威县LJ15051719辣椒辣椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05云南建水县曲江镇LJ15051720辣椒辣椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05云南建水县曲江镇LJ15052103辣椒辣椒枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.05兰州市永登通远乡LJ15052102辣椒辣椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05兰州市永登通远乡LJ15051903辣椒辣椒枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.05甘肃酒泉肃州区LJ15052705辣椒辣椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05山东市临淄农业局LJ15062306辣椒辣椒根腐病茄病镰孢F.solani2015.06湖北市黄石蔬菜所LJ1506230101辣椒辣椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.06湖北市黄石农科院MD15072806牡丹牡丹枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07北京顺义基地MDX15062905迷迭香迷迭香根腐病茄病镰孢F.solani2015.06湖北大冶市茗山乡MLS15080601马铃薯马铃薯根腐病茄病镰孢F.solani2015.08河南省沽源县MLS1509112201马铃薯马铃薯枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.09河北张北县MLS1509112201马铃薯马铃薯枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.09河北省新地方大队MLS1509112201马铃薯马铃薯枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.09河北省新地方大队MLS1608251303马铃薯马铃薯枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.08内蒙古白银查干镇MLS16082513马铃薯马铃薯枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.08内蒙古白银查干镇NG1504142001南瓜南瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光NG1504142002南瓜南瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光PT16033014葡萄葡萄根腐病茄病镰孢F.solani2016.03宁夏银川QC1503310702芹菜芹菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03北京顺义21 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationQC1504300302芹菜芹菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04大兴综合试验站QC15061008芹菜芹菜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06北京通州1号果园QC15061006芹菜芹菜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06北京通州1号果园QC15061007芹菜芹菜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06北京通州1号果园QC15061009芹菜芹菜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06北京通州2号果园QC15061005芹菜芹菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.06北京农林科学院QC15111305芹菜芹菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.11北京通州小务村QC15111305芹菜芹菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.11北京通州QC1607301805芹菜芹菜根腐病镰孢菌Fusariumsp.2016.07内蒙古乌兰察布QC1607301802芹菜芹菜根腐病镰孢菌Fusariumsp.2016.07内蒙古乌兰察布QC1607301804芹菜芹菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07乌兰察布商都县QC16073016芹菜芹菜根腐病茄病镰孢F.solani2016.07乌兰察布商都县QK15082712秋葵秋葵根腐病茄病镰孢F.solani2015.08天津武清QHC15051702青花菜青花菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.05云南昆明市塔山路QHC15051707青花菜青花菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.05云南昆明市塔山路QHC15051708青花菜青花菜枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.05云南昆明市塔山路QHC15051701青花菜青花菜枯萎病茄病镰孢F.solani2015.05云南昆明市塔山路QZ15031301茄子茄子枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03不详QZ15051822茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.05甘肃酒泉肃州区QZ15071306茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.07山东聊城农科院QZ15072002茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.07山东聊城光明山庄QZ15071303茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.07河北省秦皇岛市QZ15071003茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.07山东聊城农科院QZ15071004茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.07山东聊城农科院QZ15080513茄子茄子枯萎病半裸镰孢F.incarnatum2015.08甘肃张掖市沙井镇QZ15080517茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.08甘肃张掖市古城村QZ1512140602茄子茄子枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.12海南省三亚市QZ1512140602茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.12海南三亚QZ15121406茄子茄子根腐病茄病镰孢F.solani2015.12海南三亚QZ1512140603茄子茄子枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.12海南三亚QZ1512140604茄子茄子枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.12海南三亚SC1605200107结球莴苣结球莴苣枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05北京顺义22 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationSC1605200101结球莴苣结球莴苣枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05北京顺义SG15042600丝瓜丝瓜根腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.04成都市SG15070312丝瓜丝瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.07北京房山区芦西村SJ1508041302酸浆酸浆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.08甘肃张掖市沙井镇SJ1508041301酸浆酸浆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.08甘肃张掖市沙井镇SJ1508041302酸浆酸浆枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.08甘肃张掖市沙井镇SJ15063006生姜生姜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东昌邑市邰新村TNX15071504天南星天南星枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.07山东济宁市TG1504100401甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光TG1504100402甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光TG15041007甜瓜甜瓜茎基腐尖孢镰孢F.oxysporum2015.04山东寿光TG1504140701甜瓜甜瓜果腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光TG1504140702甜瓜甜瓜果腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光TG1504270201甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04山东寿光TG1504270202甜瓜甜瓜漆腐病露湿漆斑菌M.roridum2015.04山东寿光TG15060810甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060809甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060806甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060907甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060804甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.06河北青县TG15060801甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060906甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060812甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG15060908甜瓜甜瓜根腐病茄病镰孢F.solani2015.06河北青县TG16032901甜瓜甜瓜茎腐病尖孢镰孢F.oxysporum2016.03宁夏银川TG16032902甜瓜甜瓜茎腐病尖孢镰孢F.oxysporum2016.03宁夏银川TG1603290102甜瓜甜瓜茎腐病尖孢镰孢F.oxysporum2016.03宁夏银川TG1605190202甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05湖北农科院经作所TG1605190201甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05湖北农科院经作所TG1605190203甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05湖北农科院经作所TG1605240301甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05甘肃庆阳TG1605240303甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05甘肃庆阳23 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationTG1605060802甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05北京顺义TG1605060803甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05北京顺义TG1605060801甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.05北京顺义TG1605240302甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.05甘肃庆阳TG1607040801甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607041301甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607041204甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607041303甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607041302甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG16070407甜瓜甜瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2016.07湖南怀化TG1607041104甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607060504甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化TG1607041203甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化市TG1607040803甜瓜甜瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.07湖南怀化市TJ15122201甜椒甜椒枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.12福建漳州南靖县TJ1512020401甜椒甜椒枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.12无土栽培课题组WJ15070735茎用莴苣茎用莴苣枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07河北张北县郝家营WJ15070821茎用莴苣茎用莴苣根腐病三线镰孢F.tricinctum2015.07河北张家口张北县WWC11101613结球大白菜结球白菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.10甘肃榆中县郑家坪WWC11101601结球大白菜结球白菜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2011.10甘肃榆中县郑家坪WWC11101615结球大白菜结球白菜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2011.10甘肃榆中县全店镇WS15051809茎用莴苣茎用莴苣枯萎病木贼镰孢F.equiseti2015.05云南玉溪通海县XC1504251301芫荽芫荽枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04大兴XC1504251302芫荽芫荽枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04大兴XC1504251303芫荽芫荽枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04大兴XG15033007西瓜西瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03甘肃蔬菜技术中心XG15090703西瓜西瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.09甘肃省白银靖远县XG15121407西瓜西瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.12云南XG15121407西瓜西瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.12云南勐海XG16012204西瓜西瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南陵水XG16012205西瓜西瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.01海南陵水XG16022908西瓜西瓜叶腐病尖孢镰孢F.oxysporum2016.02河北定兴24 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定表2.4分离菌株信息和病原菌鉴定结果（续）Table2.4Informationofisolatesandidentificationofpathogen(continue)菌株编号寄住病害名称病原菌采集时间采集地NumberHostDiseasednamePathogenDateLocationXG16031809西瓜西瓜枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2016.03北京XHL15061042西葫芦西葫芦果腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.06北京市农林科学院XHL15060422西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区皇城营XHL15052714西葫芦西葫芦枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.05甘肃洛门镇罗山村XHL15061038西葫芦西葫芦枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.06北京市农林科学院XHL15060404西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区皇四官XHL15060417西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区南荣家XHL15060411西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区皇四官XHL15060403西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区南四官XHL1506103802西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06北京市农林科学院XHL15060402西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.06山东临淄区南四官XHL15052001西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2015.05甘肃威武市天祝县XHL15060404西葫芦西葫芦枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.06山东临沂XHL16032509西葫芦西葫芦根腐病茄病镰孢F.solani2016.03山东临淄XYC15062903薰衣草薰衣草枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.06湖北大冶市彭晚村XYC15060904薰衣草薰衣草茎腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.06湖北大冶市茗山乡YC1503300601洋葱洋葱枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03河南通许水利路YC1503300602洋葱洋葱枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.03河南通许水利路YC15072202洋葱洋葱枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.07甘肃YG15042704越瓜越瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04安徽淮南农科所YG1504270501越瓜越瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04安徽淮南农科所YG1504270502越瓜越瓜枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.04安徽淮南农科所YJC1607270301甜瓜甜瓜果腐病木贼镰孢F.equiseti2016.07沧州市东风合作社YJC1607270306甜瓜甜瓜果腐病木贼镰孢F.equiseti2016.07沧州市东风合作社YJ1506290202月季月季茎腐病镰孢菌Fusariumsp.2015.06湖北大冶市吴岭湾YT15102103樱桃樱桃枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.10大连农技推广中心YT1510210302樱桃樱桃根腐病茄病镰孢F.solani2015.10大连农技推广中心YT1510210301樱桃樱桃枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.10大连农技推广中心YX15081001银杏银杏枯萎病镰孢菌Fusariumsp.2015.08陕西省灵沼科技园ZLX15090901籽粒苋籽粒苋枯萎病尖孢镰孢F.oxysporum2015.09上海金山区注：上述部分寄主上镰孢菌暂鉴定到属一级，后续鉴定工作仍在继续。25 中国农业科学院硕士学位论文第二章蔬菜根部镰孢菌病害采集与初步鉴定2.4本章小结2014年9月至2017年1月，课题组在全国16个省45个地区进行蔬菜根部镰孢菌病害调查，共采集到蔬菜镰孢菌病害标本279份，包括12个科39种蔬菜，还有部分花卉和果树，如葡萄、柑橘、樱桃、牡丹、薰衣草、月季等寄主。总共分离得到镰孢菌菌株256株，此外还有炭疽菌菌株19株，漆斑菌菌株1株。通过形态学鉴定、致病性测定和分子生物学方法，共鉴定出镰孢菌属10个种，分别为锐顶镰孢F.acuminatum、燕麦镰孢F.avenaceum、同生镰孢F.commune、木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum、层出镰孢F.proliferatum、茄病镰孢F.solani、半裸镰孢F.incarnatum、烟草镰孢F.tabacinum、三线镰孢F.tricinctum。刺盘孢属真菌1个种，为尖孢刺盘孢C.acutatum。漆斑菌属真菌1个种，为露湿漆斑菌M.roridum。26 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定第三章我国蔬菜根部新记录寄主病害病原菌鉴定通过对病样标本和菌株进行整理鉴定，本研究共发现7个新记录寄主病害。其中，由镰孢菌属（Fusarium）真菌引起的新记录寄主病害5个，其他真菌引起的新记录寄主病害2个。因在生产中这2种病害发生严重，故记录在此以供参考。分别为由刺盘孢属（Colletotrichum）真菌引起新记录寄主病害1个，漆斑菌属（Myrothecium）真菌引起新记录寄主病害1个。本章通过形态学特征、致病性测定和分子生物学方法对7种病害进行了深入的研究。3.1花椰菜三种致病镰孢菌鉴定病原菌：木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.层出镰孢F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg田间发病症状：该病害为三种致病镰孢菌复合侵染导致，病原菌主要侵染植株根茎部，导致整个植株萎蔫、死亡。植株发病初期，花椰菜下部叶片黄化，中午时植株整株萎蔫，早晚时分则恢复正常，根部病斑则呈褐色水渍状。随着病情扩展，叶片发黄脱落，长势不佳、矮小（图3.1）。根部逐渐褐变、腐烂（图3.2）。茎部维管束成褐色或黑褐色，中空（图3.3）。最后植株死亡。寄主：花椰菜BrassicaoleraceaL.var.botrytisL.采集地：山东省聊城市莘县王庄集乡。菌株编号：HYC1410080201（木贼镰孢F.equiseti）HYC1410080401（层出镰孢F.proliferatum）HYC1410080102（茄病镰孢F.solani）HYC1410080205（层出镰孢F.proliferatum）发病部位及为害程度：为害植株根茎部（+++）。世界分布：中国。图3.1田间整体发病症状图3.2植株根部褐变腐烂图3.3植株茎部维管束褐变Fig.3.1DiseasesymptomsintheFig.3.2RootrotofcauliflowerplantsFig.3.3Brownvascularinnerstemfield27 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.1.1花椰菜三种致病镰孢菌形态学鉴定木贼镰孢F.equiseti培养性状：在PDA培养基上25°C培养7d，菌落初为白色，棉絮状，后变为深褐色，后期有暗褐色色素产生，直径为5.1cm（图3.4）。在CLA培养基上可见橘红色分生孢子座（图3.5）。木贼镰孢F.equiseti显微特征：小型分生孢子无。大型分生孢子由分生孢子座产生（图3.6），镰刀形，弯曲度大，腹背分明，顶细胞成锥形，基细胞足跟状，壁厚，多数5~7个隔膜，大小20.5~79.5×2.6~6.5µm（图3.7）。厚垣孢子球形，单生或对生于菌丝顶端或链生于菌丝体中间，直径6.8~9.2µm，后期变为淡褐色，具疣状突起（图3.8）。图3.4PDA培养性状图3.5CLA培养性状图3.6分生孢子座(20μm)Fig.3.3ColonyofF.equisetionPDAFig.3.3ColonyofF.equisetionCLAFig.3.6SporodochiumofF.equiseti(20μm)图3.7大型分生孢子(20μm)图3.8厚垣孢子(20μm)Fig.3.7MacroconidiaofF.equisetiFig.3.8ChlamydosporesofF.(20μm)equiseti(20μm)茄病镰孢F.solani培养性状：在PDA培养基上27°C培养5d，菌落呈白色，毡状，不产生色素，直径为5cm（图3.9）。茄病镰孢F.solani显微特征：小型分生孢子圆形、卵圆形、肾形等，壁较厚，0~1个隔膜，大小10.7~18.1×2.9~5.7μm（图3.10）。大型分生孢子马特型，两端较顿，顶部稍尖，壁较厚，2~8个隔膜，多数3个隔膜，大小24.4~42.6×4.5~6.5μm（图3.10）。气生菌丝上产孢结构为长筒形单瓶梗，不分枝或稀少分枝。产生分生孢子座（图3.11）。厚垣孢子多，圆形，壁光滑，单生或对生，直径6.3~9.8μm（图3.12）。28 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.9PDA培养性状图3.10分生孢子(20μm)图3.11分生孢子座(20μm)Fig.3.9ColonyofF.solanionPDAFig.3.10ConidiaofF.solani(20μm)Fig.3.11SporodochiasofF.solani(20μm)图3.12厚垣孢子(20μm)Fig.3.12ChlamydosporesofF.solani(20μm)层出镰孢F.proliferatum培养性状：在PDA上25°C培养5d，气生菌丝大量，菌落初为白色，后逐渐变为紫色，可产生紫色到深紫色色素，直径可达6.2cm（图3.13）。层出镰孢F.proliferatum显微特征：气生菌丝上产孢梗大量，分枝较多，为单瓶梗或层出复瓶梗（图3.14）。气生菌丝上产生大量的小型分生孢子，卵形或棒槌形，顶端略膨大，基部平截。多为0隔，偶尔见1隔，大小4.7~15.1×2.2~4.3μm（图3.15）。大型分生孢子细长，两端略弯曲，呈舟形，多为3~5隔。图3.13PDA培养性状图3.14复瓶梗产孢(20μm)图3.15小型分生孢子(20μm)Fig.3.13ColonyofF.proliferatumFig.3.14PolyphialidesofF.Fig.3.15MicroconidiaofF.onPDAproliferatum(20μm)proliferatum(20μm)29 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.1.2花椰菜三种致病镰孢菌致病性测定通过胚根浸种法和伤根蘸根法进行致病性测定。茄病镰孢F.solani和层出镰孢F.proliferatum通过胚根浸种法进行回接，试验表明，接种后种子出苗率受到严重影响，种子几乎无法正常出土，并且伴有褐变的症状（图3.16和图3.17），而对照出苗正常无任何病变（图3.18）。木贼镰孢F.equiseti通过伤根蘸根法回接，植株接菌21d后，植株叶片发黄、脱落，根部须根坏死，茎部发褐伴有开裂，维管束同样发褐坏死，最后植株枯萎死亡，发病率为100%（图3.19），而对照无任何病变症状（图3.20）。该试验接种结果与田间症状基本一致，对病变部位进行重新分离鉴定，与原接种菌株一致，符合柯赫氏法则。故确定供试菌株为导致花椰菜根部病害的致病菌。图3.16接种茄病镰孢后无法出土图3.17接种层出镰孢后无法出土图3.18清水对照Fig.3.16NonemergenceafterseedsFig.3.17NonemergenceafterseedsFig.3.18ControlplantsinoculationwithF.solaniinoculationwithF.proliferatum图3.19接种木贼镰孢后植株枯萎图3.20清水对照Fig.3.19PlantwiltafterinoculationFig.3.20ControlplantswithF.equiseti3.1.3花椰菜三种致病镰孢菌分子生物学鉴定利用PCR技术，对4株供试菌株（HYC1410080205、HYC1410080102、HYC1410080401和HYC1410080201）的核糖体内转录间隔区（ITS），翻译延长因子（EF-1α）和线粒体小亚基（mtSSU）三个基因位点进行序列扩增。经琼脂糖凝胶电泳图显示，菌株在550bp，700bp和720bp处有扩增条带（图3.21和图3.22）。30 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.214株镰孢菌mtSSU和EF-1α序列扩增凝胶电泳图Fig.3.21AmplificationofmtSSUandEF-1αregionof4strainsbyPCRM:Maker;1-2:HYC1410080205mtSSU序列;3-4:HYC1410080102mtSSU序列;5-6:HYC1410080401mtSSU序列;7-8:HYC1410080201mtSSU序列;9-10:HYC1410080205EF-1α序列;11-12:HYC1410080102EF-1α序列;13-14:HYC1410080401EF-1α序列;15-16:HYC1410080201EF-1α序列;M:Maker;1-2:GenemtSSUofHYC1410080205;3-4:GenemtSSUofHYC1410080102;5-6:GenemtSSUofHYC1410080401;7-8:GenemtSSUofHYC1410080201;9-10:GeneEF-1αofHYC1410080205;11-12:GeneEF-1αofHYC1410080102;13-14:GeneEF-1αofHYC1410080401;15-16:GeneEF-1αofHYC1410080201;图3.224株镰孢菌ITS序列扩增凝胶电泳图Fig.3.22AmplificationofITSregionof4strainsbyPCRM:Maker;1-2:HYC1410080205ITS序列;3-4:HYC1410080102ITS序列;5-6:HYC1410080401ITS序列;7-8:HYC1410080201ITS序列;M:Maker;1-2:GeneITSofHYC1410080205;3-4:GeneITSofHYC1410080102;5-6:GeneITSofHYC1410080401;7-8:GeneITSofHYC1410080201;3.1.3.1木贼镰孢的分子生物学鉴定通过核糖体内转录间隔区（ITS），翻译延长因子（EF-1α）和线粒体小亚基（mtSSU）对供试菌株（HYC1410080201）进行测序，分别得到534bp、691bp、745bp大小的序列。将所得序列在NCBI的Genbank中进行BLAST比对，三个基因序列均与木贼镰孢F.equiseti同源性最高。ITS序列比对同源性高达100%（FJ459976.1，KR364600.1），EF-1α序列比对同源性达99%（KP732014.1），mtSSU序列比对同源性达99%（JQ717202.1）。三种基因比对结果高度一致，并且与形态学鉴定结果一致，将所测序列提交到NCBI获得登录号为KX583609、KX583610和KX583611。本研究中序列测序结果详见附录一。在Genbank中下载镰孢菌属不同种的ITS和31 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定EF-1α相关序列，并用MEGA5.1软件N-J法构建系统发育树，系统发育树显示所鉴定的菌株与木贼镰孢F.equiseti聚在一个分枝上（图3.23和图3.24）。图3.23木贼镰孢F.equiseti及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.23ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonITSsequence图3.24木贼镰孢F.equiseti及其近缘菌株EF-1α序列系统发育树Fig.3.24ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonEF-1αsequence32 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.1.3.2茄病镰孢的分子生物学鉴定通过核糖体内转录间隔区（ITS），翻译延长因子（EF-1α）和线粒体小亚基（mtSSU）对供试菌株（HYC1410080102）进行测序，分别得到546bp、721bp、615bp大小的序列。将所得序列在Genbank中进行BLAST比对，三个基因序列均与茄病镰孢F.solani同源性最高。ITS序列比对同源性高达100%（AB470904.1），EF-1α序列比对同源性达99%（KF939495.1），mtSSU序列比对同源性达100%（KF125009.1），序列比对结果与形态学鉴定结果一致。在Genbank中下载镰孢菌属不同种的ITS和EF-1α相关序列，并用MEGA5.1软件N-J法构建系统发育树，系统发育树显示所鉴定的菌株与茄病镰孢F.solani聚在一个分枝上（图3.25和图3.26）。图3.25茄病镰孢F.solani及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.25ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonITSsequence图3.26茄病镰孢F.solani及其近缘菌株EF-1α序列系统发育树Fig.3.26ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonEF-1αsequence3.1.3.3层出镰孢的分子生物学鉴定33 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定通过核糖体内转录间隔区（ITS），翻译延长因子（EF-1α）和线粒体小亚基（mtSSU）对供试菌株（HYC1410080401和HYC1410080205）进行测序。菌株HYC1410080401分别得到537bp、699bp、711bp大小的碱基序列，菌株HYC1410080205分别得到561bp、713bp、681bp大小的碱基序列。将所得序列在Genbank中进行BLAST比对，均与层出镰孢F.proliferatum同源性最高，序列比对同源性均高达100%，比对结果与形态学鉴定结果一致。在Genbank中下载镰孢菌属不同种的ITS和mtSSU相关序列，并用MEGA5.1软件N-J法构建系统发育树，系统发育树显示所鉴定的菌株与层出镰孢F.proliferatum聚在一个分枝上（图3.27和图3.28）。图3.27层出镰孢F.proliferatum及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.27ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonITSsequence图3.28层出镰孢F.proliferatum及其近缘菌株mtSSU序列系统发育树Fig.3.28ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonmtSSUsequence34 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.1.4讨论由镰孢菌引起的花椰菜枯萎病在多个国家均有报道。巴西和墨西哥曾报道过尖孢镰孢F.oxysporum可以引起花椰菜枯萎病（Fitófilo，1982；Mendesetal.，1998）。后在许多国家，如加拿大、韩国、美国诸多州研究表明，引起花椰菜枯萎病的病原菌为尖孢镰孢粘团专化型F.oxysporumf.sp.conglutinans。2003年，我国报道了F.oxysporumf.sp.conglutinans可引起甘蓝、抱子甘蓝、青花菜、芥兰及樱桃萝卜等六种十字花科蔬菜的枯萎病（李明远等，2003）。除此之外，未发现其它相关报道和记载。三种镰孢菌复合侵染花椰菜为首次发现与研究，为新记录寄主病害。3.2茄子茄病镰孢根腐病鉴定病原菌：茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.田间发病症状：病原菌主要为害植株根系和维管束，引起植株枯萎。植株苗期就可以受到侵染，成株期田间症状主要表现为白天叶片萎蔫、发黄，而在早晚时候恢复，反复多日后植株整株枯死，根部发生不同程度的病变，初生根或支根表皮变褐，根系表皮和毛细根腐烂（图3.29和图3.30）。寄主：茄子SolanummelongenaL.采集地和菌株编号：甘肃酒泉肃州区总寨镇（QZ15051822）。发病部位及为害程度：为害植株根茎部（++）。世界分布：科特迪瓦，希腊，印度，伊朗，马来西亚，中国。图3.29植株根部腐烂图3.30植株根部腐烂Fig.3.29RootrotofeggplantplantsFig.3.30Rootrotofeggplantplants3.2.1茄子根腐病病原菌形态学鉴定茄病镰孢F.solani培养性状：在PDA培养基上25°C培养7d，菌落呈白色或浅灰色，薄绒状，直径达6.4cm（图3.31）。在CLA培养基上菌落较薄，絮状（图3.32）。茄病镰孢F.solani显微特征：大型分生孢子马特型，两端较钝，顶胞稍尖，有圆形足跟，壁较厚，2~8个隔膜，大小10.0~73.5×3~8µm（图3.34）。小型分生孢子数量多，卵形或肾形，35 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定壁较厚，0~1个隔膜，大小8~15×2.7~4.5µm（图3.34）。气生菌丝上的产孢结构为长筒形单瓶梗，少分枝。分生孢子座菊花状（图3.33）。厚垣孢子圆形，壁光滑或粗糙，单生或对生，直径8~10µm。图3.31PDA培养性状图3.32CLA培养性状图3.33分生孢子座(20μm)Fig.3.31ColonyofF.solanionPDAFig.3.32ColonyofF.solanionFig.3.33SporodochiumofF.solaniCLA(20μm)图3.34分生孢子(20μm)Fig.3.34ConidiaofF.solani(20μm)3.2.2茄子根腐病病原菌致病性测定通过胚根浸种法进行致病性测定。试验表明，接种后种子出苗受到严重影响，几乎无法正常出土（图3.35），幼苗感病后，根部完全腐烂坏死，植株僵化死亡（图3.36）。对照处理出苗正常无任何病变，长势良好（图3.37）。通过对病变部位进行重新分离鉴定，与原接种菌株一致，符合柯赫氏法则。所以，供试菌株为导致茄子根腐病的致病菌。图3.35接菌后种子缺苗断垄图3.36茄子幼苗枯死图3.37清水对照Fig.3.35NonemergenceafterseedsFig.3.36WiltedafterinoculationFig.3.37ControlplantsinoculationwithF.solaniwithF.solani36 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.2.3茄子根腐病病原菌分子生物学鉴定通过核糖体内转录间隔区（ITS），翻译延长因子（EF-1α）和线粒体小亚基（mtSSU）对供试菌株（QZ15051822）进行测序。经琼脂糖凝胶电泳图显示，菌株在600bp处有明亮的扩增条带（图3.38）。图3.38镰孢菌ITS、EF-1α及mtSSU序列扩增凝胶电泳图Fig.3.38AmplificationofITS,EF-1αandmtSSUregionofFusariumsp.byPCRM:Maker;1-2:QZ15051822mtSSU序列;3-4:HYC1410080102EF-1α序列;5-6:HYC1410080401ITS序列;M:Maker;1-2:GenemtSSUofQZ15051822;3-4:GeneEF-1αofQZ15051822;5-6:GeneITSofQZ15051822;经过在博迈德公司进行测序，分别得到547bp、666bp、607bp大小的三段碱基序列。将所得序列在NCBI的Genbank中进行BLAST比对，三个基因序列均与茄病镰孢F.solani同源性最高。ITS序列比对同源性高达100%（LN828155.1），EF-1α序列比对同源性达99%（KU738440.1），mtSSU序列比对同源性达100%（KR528471.1）。分子生物学鉴定结果与形态学鉴定结果一致，将所测序列提交到NCBI获得登录号为KX981059、KX981060和KX981061。利用ITS和EF-1α基因与3.1.3.2中茄病镰孢F.solani（HYC1410080102）共同构建系统发育树，结果显示供试菌株与茄病镰孢F.solani聚在一个分枝上（图3.39和图3.40）。图3.39茄病镰孢F.solani及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.39ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonITSsequence37 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.40茄病镰孢F.solani及其近缘菌株EF-1α序列系统发育树Fig.3.40ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonEF-1αsequence3.2.4讨论世界范围内报道过的可侵染茄子的镰孢菌有8个种，还有2个变种和1个专化型。中国报道过可侵染茄子的镰孢菌就多达6种，分别为F.anguioides（Tai，1979）、F.culmorum（Zhuang，2005）、F.graminearum（Zhuang，2005）、F.moniliforme（Tai，1979）、F.oxysporum（Tai，1979）和F.incarnatum（Tai，1979）。国内部分报道仅限于防治和症状识别，未见到关于茄病镰孢F.solani侵染茄子的详细描述。本次研究首次对茄子上茄病镰孢F.solani进行了详细的鉴定和描述，为国内新记录寄主病害。3.3甘蓝烟草镰孢根腐病鉴定病原菌：烟草镰孢F.tabacinum(J.F.H.Beyma)W.Gams（有性态名称、现用名：黄瓜不整球壳菌Plectosphaerellacucumerina(Lindf.)W.Gams）田间发病症状：幼苗发病后，根部发黄、褐变，须根完全腐烂，主根坏死。成株期发病后，植株开始出现萎蔫，叶片逐渐发黄，根部、叶柄部逐渐腐烂，最后整株枯萎死亡（图3.41，图3.42和图3.43）。寄主：甘蓝BrassicaoleraceaL.采集地和菌株编号：甘肃省兰州市榆中县（GL11101616）。发病部位和为害程度：为害植株根茎部和叶柄（++）。世界分布：中国。38 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.41甘蓝植株根部腐烂图3.42甘蓝植株根部腐烂图3.43甘蓝植株茎部腐烂Fig.3.41RootrotofcabbageintheFig.3.42RootrotofcabbageintheFig.3.43Rootstemofcabbageinfieldfieldthefield3.3.1甘蓝根腐病病原菌形态学鉴定烟草镰孢F.tabacinum（P.cucumerina）培养性状：在PDA培养基上27°C培养14d，菌落呈浅黄色至橙红色，菌落边缘不规则，形态多样，致密，菌丝匍匐生长，气生菌丝较少或无，直径为7.5cm（图3.44）。烟草镰孢F.tabacinum（P.cucumerina）显微特征：菌丝无色，具隔膜，分枝，常见菌丝螺旋状生长，上着生瓶梗状产孢结构（图3.45）。产孢细胞单瓶梗状，单生，光滑，无色，偶有一个隔膜，瓶梗稍直或弯曲，上部逐渐变细，大小9.9~36.9×1.5~3.5μm（图3.45）。分生孢子单生，卵圆形至长椭圆形，无色，单孢，大小3.8~9.1×2.5~4.5μm，内具油球，常见1~4个（图3.46），假头状着生。图3.44PDA培养性状图3.45单瓶梗产孢(10μm)图3.46分生孢子(10μm)Fig.3.44ColonyofF.tabacinumonFig.3.45MonophialidesofF.Fig.3.46ConidiaofF.tabacinumPDAtabacinum(10μm)(10μm)3.3.2甘蓝根腐病病原菌致病性测定通过胚根浸种法进行致病性测定。结果表明，该病原菌对甘蓝出苗率影响极大，缺苗断垅现象严重（图3.47），未出苗者根部褐变、发黄，须根腐烂完全，主根坏死，子叶失绿（图3.48），整个植株腐烂或枯萎死亡。清水处理则植株生长正常，根系发达（图3.49）。取发病植株进行重39 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定新分离，得到的菌株与接种甘蓝胚根的菌株相同，符合柯赫氏法则。所以，烟草镰孢F.tabacinum（P.cucumerina）为导致甘蓝根腐病的致病菌。图3.47接菌后种子缺苗断垄图3.48幼苗根系腐烂图3.49清水对照Fig.3.47NonemergenceafterseedsFig.3.48RootrotafterinoculationFig.3.49ControlplantsinoculationwithF.tabacinumwithF.tabacinum3.3.3甘蓝根腐病病原菌分子生物学鉴定采用普通PCR对病原菌的ITS和D1/D2of28SribosomalDNAgene序列进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳图显示，菌株在550bp和600bp处有明亮的扩增条带（图3.50和图3.51）。图3.50镰孢菌ITS序列扩增凝胶电泳图Fig.3.50AmplificationofITSregionofFusariumsp.byPCRM:Maker;1-4:GL11101616ITS序列;M:Maker;1-4:GeneITSofGL11101616;图3.51镰孢菌28SrRNA序列扩增凝胶电泳图Fig.3.51Amplificationof28SrRNAregionofFusariumsp.byPCRM:Maker;1-4:GL1110161628SrRNA序列;M:Maker;1-4:Gene28SrRNAofGL11101616;40 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定测序后分别获得562bp和608bp的DNA片段。将所获得序列与Genbank中的核酸序列进行BLAST比对，与P.cucumerina（F.tabacinum）菌株的同源性可达100%，确定引起甘蓝枯萎病的病原菌为P.cucumerina（F.tabacinum），序列提交到Genbank后登录号为KT596812和KT596813。利用ITS和D1/D2of28SribosomalDNAgene基因构建系统发育树，结果显示供试菌株与P.cucumerina（F.tabacinum）聚在一个分枝上（图3.52和图3.53）。图3.52P.cucumerina（F.tabacinum）及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.52ThephylogenetictreeofdifferentPlectosphaerellaspeciesbasedonITSsequence图3.53P.cucumerina（F.tabacinum）及其近缘菌株D1/D2of28SrDNAgene序列系统发育树Fig.3.53ThephylogenetictreeofdifferentPlectosphaerellaspeciesbasedonD1/D2of28SrDNAgenesequence41 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.3.4讨论最初，黄瓜不整球壳菌P.cucumerina被Lindfors（1919）定名为黄瓜黑星菌Venturiacucumerina。之后，Klebahn（1929）在黄瓜上分离得到一种病原菌并加以描述，定名为Plectosphaerellacucumeris。1970年，Elbakyan（1970）发现Lindfors和Klebahn描述的为同一种病原菌，并重新定名为Plectosphaerellacucumerina。1995年，Palm等将烟草镰孢Fusariumtabacinum定为黄瓜不整球壳菌P.cucumerina的无性型（Palmetal.，1995）。因此，该病原菌的不同异名曾被使用进行研究报道。P.cucumerina在国外分布较广，寄主范围较多，但在中国分布较少。目前，在意大利、德国、美国、马来西亚、新西兰、日本、伊朗、埃及等国家都有报道，报道的寄主涉及甜菜、菊苣、茴香、莴苣、番茄、油麦菜、向日葵等寄主（Matta，1978；Odunfa，1979；Abadetal.，2000）。1987年，意大利报道F.tabacinum能够侵染向日葵，并引起枯萎病（Zazzerini&Tosi，1987）。而在中国，2014年才首次报道P.cucumerina可以侵染番茄，引起番茄枯萎病（Xuetal.，2014）；2015年，中国报道P.cucumerina能够导致向日葵枯萎病（Zhangetal.，2015）；同年，以异名Microdochiumtabacinum报道该菌可引起甘肃省苜蓿枯萎病（Wenetal.，2015）。除此之外，无其它相关报道。通过互查网站（http://nt.ars-grin.gov/fungaldatabases/）和查阅相关文献，确认由（F.tabacinum）P.cucumerina引起的甘蓝根腐病为国内外首次发现与研究。3.4绿豆芽尖孢刺盘孢炭疽病鉴定病原菌：尖孢刺盘孢C.acutatumJ.H.Simmonds.田间发病症状：病原菌可为害绿豆芽的胚根、胚轴和胚芽（图3.54）。胚根发病后，褐色，有缢缩（图3.55）。胚芽和胚轴发病初期呈水渍状，后逐渐褐变，出现点状或长线型褐色病斑，后期逐渐腐烂（图3.56）。湿度较大时，在病斑处着生黑色点状物。寄主：绿豆芽Vignaradiata(Linn.)R.Wilczek.采集地和菌株编号：山东省淄博市（DY16011401-DY16011419）。发病部位和为害程度：为害绿豆芽各个部位（+++）。世界分布：中国。图3.54绿豆芽整体感病症状图3.55绿豆芽胚根处缢缩、褐变图3.56胚芽和胚轴褐色病变Fig.3.54SymptomsofmungbeanFig.3.55ConstrictionandbrownonFig.3.56Brownlesionsonplumulesproutsradicleandplumularaxis42 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.4.1绿豆芽炭疽病病原菌形态学鉴定尖孢刺盘孢C.acutatum培养性状：在PDA培养基上菌落圆形，边缘整齐，气生菌丝较发达，菌丝初期为白色，逐渐变为橘红色，后期出现橘红色奶油状分生孢子团，生长后期具明显同心轮纹（图3.57）。尖孢刺盘孢C.acutatum显微特征：菌丝具隔膜，具分枝，单瓶梗产孢结构（图3.59）。分生孢子产量很大，无色，单胞，纺锤形或梭形，两端较尖，内含油球，大小为8.3~16.7×2.2~4.1μm（图3.58）。图3.57PDA培养性状图3.58分生孢子(20μm)图3.59单瓶梗产孢结构(20μm)Fig.3.57ColonyofC.acutatumonFig.3.58ConidiaofC.acutatumFig.3.59MonophialideofC.PDA(20μm)acutatum(20μm)3.4.2绿豆芽炭疽病病原菌致病性测定通过喷雾法对绿豆芽进行回接试验。用血球计数板将孢子悬液调配成浓度为1×106mL-1，用喷壶将配制好的孢子悬浮液对绿豆芽进行喷雾接菌。完成接种后，将保湿盒置于25°C条件下保存，并用无菌蒸馏水进行保湿处理。结果表明，尖孢刺盘孢C.acutatum对绿豆芽具有高度的侵染性（图3.60），侵染初期在胚芽、胚轴上形成点状褐色小斑（图3.62）；后期逐渐向上和向下扩展，胚轴上形成线形斑（图3.63），胚根处出现缢缩、褐色病变（图3.64）；最后整个豆芽腐烂（图3.65）。清水对照处理则生长正常，无任何病变（图3.61）。该症状与初始症状一致，且从病斑处可重新分离到尖孢刺盘孢C.acutatum，证明该菌是引起绿豆芽炭疽病的病原菌。图3.60接种对照图3.61清水对照图3.62褐色点状斑Fig.3.60Inoculation(left)andFig.3.61ControlplantsinoculationFig.3.62Brownspotonplumularcontrolplants(right)withwateraxis43 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.63褐色线性斑图3.64根部出现缢缩图3.65植株腐烂Fig.3.63BrownlineonplumularFig.3.64ConstrictionandbrownonFig.3.65Decayedafterinoculationaxisradicle3.4.3绿豆芽炭疽病病原菌分子生物学鉴定利用通用引物ITS1/ITS4和特异性引物CgInt2/ITS4对该菌的核糖体内转录间隔区（ITSrDNA）进行序列扩增，分别获得578bp和575bp序列片段（图3.66）。图3.66刺盘孢菌ITS序列扩增凝胶电泳图Fig.3.66AmplificationofITSregionofColletotrichumsp.byPCRM:Maker;1:通用引物扩增序列;2:特异性引物扩增序列;M:Maker;1:Amplificationsequenceofuniversalprimer;2:Amplificationsequenceofspecificprimer;图3.67尖孢刺盘孢C.acutatum及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.67ThephylogenetictreeofdifferentColletotrichumspeciesbasedonITSsequence44 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定将所获得序列与Genbank中的核酸序列进行BLAST比对，与尖孢刺盘孢C.acutatum菌株的同源性可达100%，确定引起绿豆芽炭疽病的病原菌为尖孢刺盘孢C.acutatum，序列提交到Genbank后登录号为KX436091和KX436092。分子鉴定结果与形态学鉴定结果一致。利用ITS基因构建系统发育树，结果显示供试菌株与尖孢刺盘孢C.acutatum聚在一个分枝上（图3.67）。3.4.4讨论绿豆上报道的过的刺盘孢有3种，为尖孢刺盘孢C.acutatum、菜豆刺盘孢C.lindemuthianum和大豆刺盘孢C.truncatum。刺盘孢属真菌主要侵染植株的叶片、荚、果实和茎秆。2010年，台湾省发现并报道了尖孢刺盘孢C.acutatum可以侵染加工蔬菜绿豆芽，且具有传染性（Shenetal.，2010）。2016年，课题组在山东淄博发现绿豆芽整株不断褐变、死亡，在生产实践中病害发生快、蔓延性强。长期以来，生产上对绿豆芽褐变原因一直不明。经过对病原菌的分离和鉴定，确定是由尖孢刺盘孢C.acutatum引起的绿豆芽炭疽病，为我国内地首次发现和报道。3.5甜瓜露湿漆斑菌漆腐病鉴定病原菌：露湿漆斑菌M.roridumTode田间发病症状：发病初期，植株茎基部出现褐色病变。随着病情的扩展，病斑不断扩大，布满大部分植株表皮。茎组织内部也发生褐变（图3.70），可以观察到深墨绿色的分生孢子团（图3.69），湿度大时病斑处着生白色絮状菌丝。最后植株叶片发黄，萎蔫死亡（图3.68）。寄主：甜瓜CucumismeloL.采集地和菌株编号：山东省寿光市（TG1504270202）。发病部位和为害程度：为害植株根茎部（+++）。世界分布：巴巴多斯，巴西，文莱，美国，中国。图3.68植株萎蔫死亡图3.69茎基部着生墨绿色菌体图3.70茎组织内部褐变Fig.3.68WiltedplantsinthefieldFig.3.69Greenish-blacksporodochiaFig.3.70Brownlesionsinnerstemonthebaseofstem45 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.5.1甜瓜漆腐病病原菌形态学鉴定露湿漆斑菌M.roridum培养性状：在PDA培养基上25°C培养7d，菌落白色，絮状，较为致密，中心稍突起，后期产生深墨绿色小点，为病原菌的分生孢子团，平均直径为4.3cm。（图3.71）。露湿漆斑菌M.roridum显微特征：分生孢子梗具分枝，于末端产生3~7个产孢细胞，无色，圆柱形，大小10.5~16.5×1.6~2.2µm（图3.72）。分生孢子无色，棒状，两端较为钝圆，大小4.6~7.3×1.2~2.5µm（图3.73）。图3.71PDA培养性状图3.72产孢结构(20µm)图3.73分生孢子(20µm)Fig.3.71ColonyofM.roridumonFig.3.72ConidiogenouscellsofM.Fig.3.73ConidiaofM.roridumPDAroridum(20µm)(20µm)3.5.2甜瓜漆腐病病原菌致病性测定通过针刺法对甜瓜茎基部进行回接试验。将孢子调配成浓度为1×106mL-1孢子悬浮液，用灭菌的牙签蘸菌针刺甜瓜茎基部，每个植株茎部针刺三个点，相距1cm。完成接种后，将甜瓜置于温度25°C，湿度98%条件下进行栽培，对照处理用无菌蒸馏水进行针刺接种。接种7d后，植株茎基部上出现深棕色病变，后期组织开裂、中空（图3.75）。在病斑上可观察到墨绿色分生孢子团（图3.76）。14d后，接种植物的叶片发黄、脱落和植株枯萎死亡（图3.74）。而清水对照处理长势良好（图3.74）。发病症状与初始症状一致，且从病斑处可重新分离到露湿漆斑菌M.roridum，符合科赫氏法则，说明该菌是引起甜瓜漆腐病的致病菌。图3.74接菌处理(右)对照处理(左)图3.75茎部褐变、开裂图3.76墨绿色分生孢子团Fig.3.74Inoculation(right)andFig.3.75BrownlesionsandcrackingFig.3.76Greenish-blackcontrolplants(left)onthebaseofstemsporodochiaonthebaseofstems46 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定3.5.3甜瓜漆腐病病原菌分子生物学鉴定通过ITS-5.8SrDNA和TEF1两个基因对供试菌株进行序列扩增，分别获得603bp和990bp大小的序列片段。琼脂糖凝胶电泳图如下（图3.77和图3.78）：图3.77漆斑菌ITS序列扩增凝胶电泳图Fig.3.77AmplificationofITSregionofMyrotheciumsp.byPCRM:Maker;1-2:漆斑菌ITS序列扩增条带;M:Maker;1-2:AmplificationofITSregionofMyrotheciumsp.;图3.78漆斑菌TEF1序列扩增凝胶电泳图Fig.3.78AmplificationofTEF1regionofMyrotheciumsp.byPCRM:Maker;1-4:漆斑菌TEF1序列扩增条带;M:Maker;1-4:AmplificationofTEF1regionofMyrotheciumsp.;将所获得序列与Genbank中的核酸序列进行BLAST比对，与露湿漆斑菌M.roridum菌株的同源性可达100%，将序列提交到Genbank后获得登录号为KX421205和KX421206。利用ITS和TEF1基因构建系统发育树，结果显示供试菌株与露湿漆斑菌M.roridum聚在一个分枝上（图3.79和图3.80）。分子鉴定结果与形态学鉴定结果相同，确定引起甜瓜漆腐病的病原菌为露湿漆斑菌M.roridum。47 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定图3.79露湿漆斑菌M.roridum及其近缘菌株ITS序列系统发育树Fig.3.79ThephylogenetictreeofdifferentMyrotheciumspeciesbasedonITSsequence图3.80露湿漆斑菌M.roridum及其近缘菌株TEF1序列系统发育树Fig.3.80ThephylogenetictreeofdifferentMyrotheciumspeciesbasedonTEF1sequence3.5.4讨论露湿漆斑菌M.roridum寄主范围广泛，能侵染危害多种经济作物，相关报道和记载也屡见不鲜。寄主范围涉及蔬菜、花卉和草等作物，如国内在雍菜（王莹莹等，2017）、常春藤（贲海燕等，2009）和鼠尾草（Mangandietal.，2007）上报道过该菌可引起植株叶斑病。此外，该菌还可侵染植株的叶柄、果实、荚、根茎等。国外方面，在巴巴多斯，巴西，文莱，美国的伊利诺伊州等地报道该菌可以侵染甜瓜果实，并导致甜瓜果腐病（Norse，1974；Mendesetal.，1998；Peregrine&Ahmad，1982），但是没有在田间观察到侵染茎基部的症状。48 中国农业科学院硕士学位论文第三章我国蔬菜根部新纪录寄主病害病原菌鉴定该菌侵染甜瓜为国内首次发现研究，并且该病原菌侵染甜瓜茎基部症状为国内外首次发现，为国内新记录寄主病害。3.6本章小结本章对7个新记录寄主病害的田间发病症状、病原菌培养特性、病原菌形态学特征、致病性测定和分子生物学鉴定结果进行了详细的研究。其中世界新记录寄主病害4个，分别是木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.引起的花椰菜枯萎病，茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.引起的花椰菜根腐病，层出镰孢F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg引起的花椰菜枯萎病，烟草镰孢F.tabacinum(J.F.H.Beyma)W.Gams引起的甘蓝枯萎病；发现国内新记录寄主病害3个，分别是茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.引起的茄子根腐病，尖孢刺盘孢C.acutatumJ.H.Simmonds引起的绿豆芽炭疽病，以及露湿漆斑菌M.roridumTode引起的甜瓜茎基腐病。49 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定本文主要对全国蔬菜主产区十字花科蔬菜和菊科蔬菜镰孢菌病害进行了系统性的病害调查和病样采集，并对蔬菜病样进行了菌株分离和病原菌鉴定。涉及到的十字花科蔬菜有大白菜、结球大白菜（娃娃菜）、散叶大白菜（快菜）、紫菜薹、结球甘蓝、青花菜、长羽裂萝卜（中国萝卜）和花椰菜等8种寄主。菊科蔬菜包括茎用莴苣（莴笋）和结球莴苣（生菜）2种。此外，本章对一些地区严重发生的镰孢菌枯萎病也进行了病原菌鉴定，主要有葫芦科的甜瓜（羊角脆）、南瓜、西瓜，百合科的洋葱以及列当科的分枝列当。4.1十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.1.1十字花科蔬菜镰孢菌病害样本采集及地域分布对北京、河北、河南、山东、甘肃、湖北、西藏等9个省14个地区进行了病害调查和标本采集，共采集46份病害标本。病样数量及采集地区见表4.1。表4.1十字花科蔬菜镰孢菌病害寄主和分布Table4.1FusariumwiltcausedbyFusariumspp.onCruciferaevegetablesinChina寄主病样数量分布HostDiseasesampleDistribution河北（张家口、廊坊），山东（潍坊），北京（大兴、南口），甘肃大白菜11（兰州），内蒙古（乌兰察布）湖北（火烧坪），甘肃（兰州），北京（昌平、南口），河南（安阳），结球甘蓝14河北（张家口），西藏（拉萨）青花菜4云南（昆明），北京（南口）长羽裂萝卜1云南（悬洪）散叶大白菜（快菜）1云南（昆明）紫菜薹1不详花椰菜11山东（聊城）结球大白菜（娃娃菜）3甘肃（兰州），北京（昌平）田间发病症状：大白菜发生枯萎病后，叶片逐渐黄化，植株长势弱，外叶皱缩、展开，不能包心结球，根系褐变、植株枯萎（图4.1和图4.2）；结球甘蓝发生枯萎病后，外叶迅速黄化，容易形成死棵（图4.3和图4.4），缺苗断垅现象十分严重，根系完全干枯、褐变，维管束黑色或褐色病变（图4.5）。其余寄主发病后田间症状相似，根部出现不同程度的褐色坏死。50 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定图4.1大白菜田间发病症状图4.2大白菜田间发病症状图4.3结球甘蓝田间发病症状Fig.4.1SymptomofChineseFig.4.2SymptomofChineseFig.4.3Symptomoncommonheadcabbagesinthefieldcabbagesinthefieldcabbagesinthefield图4.4结球甘蓝田间发病症状图4.5结球甘蓝根部枯萎Fig.4.4SymptomoncommonheadFig.4.5Symptomoncommonheadcabbagesinthefieldcabbagesrootinthefield4.1.2十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验4.1.2.1致病性试验结果采用胚根浸种法对46株十字花科蔬菜上的镰孢菌进行了致病性试验，供试菌株具体信息见第二章表2.4，致病性试验结果见下表4.2。结果显示，大白菜上有10个菌株对原寄主有致病性，其中高致病性菌株有6株，发病植株表现为种子腐烂，无法出苗；较强致病性菌株1株，发病植株表现为出苗后，生长受到抑制，逐渐枯萎死亡；弱致病性菌株3株，接种植株表现为幼苗生长正常，但生长受抑制，植株矮小。结球甘蓝上有6个菌株对原寄主具有强致病性，4株具有较强致病性，3株具有弱致病性，1株无致病性，不同病级发病表现与大白菜相同。青花菜上有2株菌具有强致病性，2株菌具有较强致病性。结球大白菜（娃娃菜）上分离的3个菌株均对原寄主表现出强致病性。散叶大白菜（快菜）上分离的1株镰孢菌对原寄主具有较强的致病性。长羽裂萝卜（中国萝卜）上分离的1株镰孢菌对原寄主无致病性。紫菜薹上分离的1株镰孢菌对原寄主有强致病性。花椰菜上强致病镰孢菌有4株，花椰菜上致病镰孢菌具体鉴定过程和结果详见第三章3.1，本章节不再赘述。51 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定表4.2十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验调查结果Table4.2ResultofpathogenicitytestonCruciferaevegetablesinoculationbyFusariumspp.处理菌株编号寄主发病率(%)病情指数TreatmentNO.HostDiseaseincidence(%)Diseaseindex1BC14061407大白菜46.6741.672BC14092540大白菜20.0010.003BC1405140301大白菜100.0080.004BC1405140302大白菜100.0085.005BC14110501-1大白菜33.3318.336BC14092810大白菜100.0095.007BC11101901大白菜100.00100.008BC1106200202大白菜53.3348.339BC1608240512大白菜100.0098.3310BC1608311301大白菜0.000.0011BC14110501-2大白菜80.0071.6712GL09082208结球甘蓝46.6722.2213GL1110160402结球甘蓝100.0082.2214GL14091709结球甘蓝100.0098.3315GL09101502结球甘蓝0.000.0016GL1110160403结球甘蓝40.0040.0017GL1109160401结球甘蓝100.0096.6718GL0908220802结球甘蓝100.0096.6719GL1110160202结球甘蓝93.3365.0020GL1110160201结球甘蓝86.6763.3321GL080404结球甘蓝60.0036.6722GL08040402结球甘蓝93.3362.2223GL12052202结球甘蓝100.0085.0024GL12061902结球甘蓝80.0053.3325GL11101403结球甘蓝100.0095.0026QHC15051702青花菜100.0055.0027QHC15051707青花菜100.0097.5028QHC15051708青花菜100.0096.6729QHC15051701青花菜70.0050.0030WWC11101613结球大白菜（娃娃菜）100.00100.0031WWC11101601结球大白菜（娃娃菜）100.00100.0032WWC11101615结球大白菜（娃娃菜）100.00100.0052 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定表4.2十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验调查结果（续）Table4.2ResultofpathogenicitytestonCruciferaevegetablesinoculationbyFusariumspp.(continue)处理菌株编号寄主发病率(%)病情指数TreatmentNO.HostDiseaseincidence(%)Diseaseindex33KC14083002散叶大白菜（快菜）70.0050.0034LB11010605长羽裂萝卜（中国萝卜）0.000.0035HCT09110501紫菜薹100.00100.0036HYC1410080101花椰菜6.676.6737HYC1410080201花椰菜93.3376.6738HYC1410080202花椰菜33.3320.0039HYC1410080203花椰菜40.0021.6740HYC1410080204花椰菜73.3358.3341HYC1410080301花椰菜0.000.0042HYC1410080401花椰菜86.6765.0043HYC1410080102花椰菜80.0026.6744HYC1410080103花椰菜33.3323.3345HYC1410080205花椰菜100.00100.0046HYC1410080302花椰菜26.6726.674.1.2.2致病性发病症状种子接菌后的主要症状分为4级，不同寄主接种病原菌后的发病症状如下。0级：无病变症状；1级：植株矮小，但生长正常；2级：植株生长受到抑制，根部可见明显褐色病变；3级：出苗后长势不佳，僵化死亡；4级：种子腐烂无法出苗。图4.6大白菜接种后缺苗断垅图4.7大白菜接种后发病(3级)图4.8结球甘蓝接种后发病(4级)Fig.4.6NonemergenceafterFig.4.7SymptomonChineseFig.4.8SymptomsoncabbagesafterinoculationonChinesecabbagecabbagesafterinoculation(level3)inoculation(level4)53 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定图4.9青花菜接种后发病症状(4级)图4.10娃娃菜接种后发病症状(4级)图4.11快菜接种后发病症状(4级)Fig.4.9SymptomsonbroccolisafterFig.4.10SymptomsonbabyFig.4.11Symptomsonfastcabbagesinoculation(level4)cabbagesafterinoculation(level4)afterinoculation(level4)图4.12紫菜薹接种后发病(4级)Fig.4.12Symptomsonpurplepakchoiafterinoculation(level4)4.1.3十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌形态学鉴定结合致病性试验和形态学鉴定，本次研究共鉴定出大白菜上致病镰孢菌3种，分别为木贼镰孢Fusariumequiseti(Corda)Sacc.、茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.和尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.结球甘蓝上致病镰孢菌4种，分别为燕麦镰孢F.avenaceumFr.、同生镰孢F.communeK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg、木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.和尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.青花菜上致病镰孢菌有2种，为木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.和茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.结球大白菜（娃娃菜）上致病镰孢菌有1种，为尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.散球大白菜（快菜）上有致病镰孢菌1种，为木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.紫菜薹上鉴定出致病镰孢菌1种，为尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.（1）燕麦镰孢F.avenaceumFr.病原菌培养特性：在PDA上气生菌丝绒状至棉絮状，草朱红色，伴有土黄色，基物表层淡红色，培养基不变色（图4.13）。54 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定病原菌显微特征：小型分生孢子偶见。大型分生孢子鳗鱼形，细长，略弯，两端渐尖，基胞足跟不明显，3~7个分隔，多数5隔，大小27.3~99.8×2.7~5.2μm（图4.14和图4.15）。产孢细胞多为单瓶梗，偶见复瓶梗。寄主、采集地和菌株编号：结球甘蓝BrassicaoleraceaL.var.capitataL.，西藏农科院蔬菜原种场（GL12052202）。发病部位和为害程度：根部和茎基部（+）。图4.13PDA培养性状图4.14大型分生孢子(20μm)图4.15大型分生孢子(20μm)Fig.4.13ColonyofF.avenaceumonFig.4.14MacroconidiaofF.Fig.4.15MacroconidiaofF.PDAavenaceum(20μm)avenaceum(20μm)（2）同生镰孢F.communeK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg病原菌培养性状：在PDA培养基上菌落白色，气生菌丝较多，絮状至茸毛状，培养基呈洋红色或紫色（图4.16和图4.17），培养时间较长菌落多呈品红色。无特殊气味。病原菌显微特征：培养10d后，气生菌丝开始大量产孢。产孢细胞分为单瓶梗和复瓶梗。短的单瓶梗宽4.0μm，长17μm，细长单瓶梗宽3.5μm，长60μm。复瓶梗宽3.5μm，长40μm。小型分生孢子圆柱形，直或稍弯，大小5.1~7.9×2.4~3.8μm（图4.18）。大型分生孢子纺锤锭状，顶细胞稍弯，基细胞足跟状，向两端渐尖，多数3~5隔，大小32.5~61.8×3.8~5.1μm（图4.18）。厚垣孢子光滑，间生或端生，单生或对生，直径8~12μm。寄主、采集地和菌株编号：结球甘蓝BrassicaoleraceaL.var.capitataL.，北京昌平区南口基地（GL14091709）。发病部位和为害程度：根部和茎基部（+）。图4.16PDA培养性状图4.17PDA培养性状图4.18分生孢子(20μm)Fig.4.16ColonyofF.communeonFig.4.17ColonyofF.communeonFig.4.18ConidiaofF.communePDAPDA(20μm)55 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定（3）木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.病原菌培养性状：病原菌形态与3.1.1中病原菌形态一致。PDA培养基上25°C培养7d，气生菌丝较多，菌落白色，棉絮状，后期呈深褐色，直径为5.3cm（图4.19）。病原菌显微特征：小型分生孢子未观察到。大型分生孢子产生于分生孢子座上（图4.20）。大型分生孢子，镰刀状，腹背分明，顶细胞锥形，基细胞足跟状，多数5~7隔膜，大小19.8~72.6×2.3~5.9µm（图4.20）。厚垣孢子球形，常形成链状产于菌丝体中间，直径7.2~10.2µm，淡褐色，具疣突（图4.21）。寄主、采集地和菌株编号：大白菜BrassicacampestrisL.spp.pekinensis(Lour.)Olsson，内蒙古乌兰察布（BC1608240512）、北京南口基地（BC14110501-2）；结球甘蓝BrassicaoleraceaL.var.capitataL.，甘肃兰州榆中县三角城乡高墩营村（GL1110160403、GL1110160202、GL1110160201）；青花菜BrassicaoleraceaL.var.italicPlenck，云南省昆明市呈贡县塔山路（QHC15051702、QHC15051707、QHC15051708）；散叶大白菜（快菜）BrassicacampestrisL.spp.pekinensis(Lour.)Olssonvar.dissolutaLi，云南昆明呈贡县农产业基地（KC14083002）。发病程度和为害部位：根部（+++）。图4.19PDA培养性状图4.20分生孢子座(20μm)图4.21厚垣孢子(20μm)Fig.4.19ColonyofF.equisetionFig.4.20SporodochiaofF.equisetiFig.4.21ChlamydosporesofF.PDA(20μm)equiseti(20μm)（4）茄病镰孢F.solani(Mart.)Sacc.病原菌培养性状：病原菌形态与3.2.1中病原菌形态一致。在PDA培养基上27°C培养5d后，菌落圆形，毡状，白色，无色素产生，直径为5.2cm（图4.22）。病原菌显微特征：小型分生孢子卵圆形或肾形等，壁较厚，0~1个隔膜，大小9.8~17.9×2.8~5.1μm，假头状着生于长的单瓶梗上（图4.24）。大型分生孢子马特型，两端较顿，顶部稍尖，多数3个隔膜，大小27.4~44.6×4.1~6.2μm（图4.23）。寄主、采集地和菌株编号：大白菜BrassicacampestrisL.spp.pekinensis(Lour.)Olsson，山东潍坊农科院（BC1405140302、BC1405140301），河北省张家口市尚义县大青沟镇（BC14092810）；青花菜BrassicaoleraceaL.var.italicPlenck，云南省昆明市呈贡县塔山路（QHC15051701）。发病程度和为害部位：根部（++）。56 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定图4.22PDA培养性状图4.23大型分生孢子(20μm)图4.24假头状着生(20μm)Fig.4.22ColonyofF.solanionFig.4.23MacroconidiaofF.solaniFig.4.24False-headofF.solaniPDA(20μm)(20μm)（5）尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.病原菌培养性状：在PDA培养基上27°C培养5d后，菌落稀疏，毛毡状，白色，后期有紫色色素产生，直径为5cm（图4.25）。病原菌显微特征：小型分生孢子数量较多，卵圆形或肾形，假头状着生，大小6.4~13.5×3.1~5.9μm（图4.27）。大型分生孢子月牙形、镰刀形，稍弯或弯曲，两端逐渐变尖，顶细胞喙状，2~8个隔膜，多数3个隔膜，大小20.6~42.4×2.5~6.1μm（图4.26）。厚垣孢子球形，单生、对生或串生，直径6.6~10.4μm。产孢细胞为短的单瓶梗。寄主、采集地和菌株编号：大白菜BrassicacampestrisL.spp.pekinensis(Lour.)Olsson，甘肃兰州榆中县（BC11101901）；结球甘蓝BrassicaoleraceaL.var.capitataL.，湖北火烧坪（GL09082208、GL0908220802），甘肃兰州榆中县三角城乡（GL1110160402），河北张家口（GL1109160401），不详（GL08040402），甘肃省榆中县农业技术推广中心（GL12061902），北京南口（GL11101403）；结球大白菜（娃娃菜）BrassicacampestrisL.spp.pekinensis(Lour.)Olssonvar.cephalataTsenetLee，甘肃兰州市榆中县金崖镇郑家坪（WWC11101613、WWC11101601）；紫菜薹BrassicacampestrisL.spp.chinensis(L.)Makinovar.purpureaBailey，不详（HCT09110501）。发病程度和为害部位：根部（+++）。图4.25PDA培养性状图4.26大型分生孢子20μm图4.27小型分生孢子20μmFig.4.25ColonyofF.oxysporumonFig.4.26MacroconidiaofF.Fig.4.27MicroconidiaofF.PDAoxysporum20μmoxysporum20μm57 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.1.4十字花科蔬菜镰孢菌病害病原菌分子生物学鉴定通过翻译延长因子（EF）对十字花科蔬菜上致病镰孢菌进行测序，在GenBank中进行序列比对，同源性均达99%以上，基于该基因通过N-J法进行系统发育树的构建，如图4.28。尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani是复合种，在镰孢菌属分类中将孢子形态、产孢结构相似的划分为一个种。根据系统发育树可以分析得出，尖孢镰孢F.oxysporum在系统发育方面或许存在明显的地域性差别。菌株WWC11101601、WWC11101613、GL12061902和GL1110160402形成单独一枝，标本均采集于甘肃省。菌株GL09082208和GL0908220802形成一个分枝，两者均采集于湖北火烧坪。同生镰孢F.commune与尖孢镰孢F.oxysporum亲缘关系较近，形态特征较为相似，是从尖孢镰孢F.oxysporum中划分出来的新种。图4.28十字花科蔬菜上致病镰孢菌EF序列系统发育树Fig.4.28ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonEFsequence58 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.1.5讨论十字花科蔬菜在蔬菜种类中占据重要地位，是具有重大经济价值的一类蔬菜。长期以来，十字花科根肿病为广大科研工作者所重视。而近年来，十字花科蔬菜镰孢菌枯萎病的严重发生也逐渐成为制约蔬菜生产的难题。国外对十字花科蔬菜上致病镰孢菌研究较早，且镰孢菌种类鉴定比较全面，寄主涉及芥蓝、甘蓝（Garibaldietal.，2006）、萝卜（Richardson，1990）、辣根、芝麻菜、荠菜等，镰孢菌种类包括F.incarnatum、F.oxysporum、F.roseum、F.acuminatum、F.equiseti、F.solani、F.moniliforme等。我国对十字花科蔬菜甘蓝枯萎病研究较多，1979年，戴芳澜在《中国真菌总汇》中记载了F.conglutinans（现用名为F.oxysporum）可以侵染甘蓝。2003年，李明远先生对北京周边甘蓝枯萎病进行了鉴定，继而进行了对十字花科蔬菜的致病力测定，结果为F.oxysporumf.sp.conglutinans（李明远等，2003），并提出要警惕十字花科蔬菜枯萎病的蔓延（李明远等，2006）。2005年，蔬菜花卉研究所对延庆一带甘蓝枯萎病进行研究，发现轮状镰孢F.verticillioides也可侵染甘蓝（张扬等，2008）。然而，国内外对白菜和其它寄主上的致病镰孢菌研究很少，也未见详细的鉴定。本研究通过对十字花科蔬菜广泛的调查和采集，通过病原菌形态学鉴定，致病性测定和分子生物学鉴定，鉴定出致病镰孢菌5个种，涉及8个蔬菜寄主，极大的填补了十字花科蔬菜枯萎病致病镰孢菌种类鉴定的空白。4.2菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.2.1菊科蔬菜镰孢菌病害样本采集及地域分布本文对云南、张家口2个省进行了病害调查和标本采集，共采集8份病害标本。病样数量及采集地区见表4.3。表4.3菊科蔬菜镰孢菌病害寄主和分布Table4.3FusariumwiltcausedbyFusariumspp.onAsteraceaevegetablesinChina寄主病样数量分布HostDiseasesampleDistribution茎用莴苣（莴笋）6河北（张家口），云南（玉溪）结球莴苣（生菜）2河北（张家口）田间发病症状：两种蔬菜田间枯萎病发病症状较为一致。发病初期，叶部逐渐黄化，中午时分出现萎蔫，早晚恢复正常；随着病情的发展，植株叶部黄化枯死，植株生长矮小，与正常植株差距很大；后期植株整体枯萎，出现死棵（图4.29和图4.31），拔出后根部呈黑色或褐色病变（图4.30和图4.32）。59 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定图4.29生菜枯萎病田间症状图4.30生菜根部发病症状图4.31莴笋枯萎病田间症状Fig.4.29FusariumwiltoflettucesinFig.4.30SymptomsonrootsofFig.4.31Fusariumwiltofasparagusthefieldlettuceslettucesinthefield图4.32莴笋根部发病症状Fig.4.32Symptomsonrootsofasparaguslettuces4.2.2菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验4.2.2.1致病性试验结果采用胚根浸种法对8株菊科蔬菜上镰孢菌进行了致病性试验，供试菌株具体信息见第二章表2.4，致病性试验结果见下表4.4。结果表明，8株镰孢菌均对原寄主具有强致病性。表4.4菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌致病性试验调查结果Table4.4ResultofpathogenicitytestonAsteraceaevegetablesinoculationbyFusariumspp.处理菌株编号寄主发病率(%)病情指数TreatmentNO.HostDiseaseincidence(%)Diseaseindex1WS15051809茎用莴苣（莴笋）100.00100.002JYWJ1507072802茎用莴苣（莴笋）100.0097.503JYWJ15091106茎用莴苣（莴笋）100.00100.004JYWJ1507072801茎用莴苣（莴笋）100.0097.505WJ15070735茎用莴苣（莴笋）100.00100.006WJ15070821茎用莴苣（莴笋）100.00100.007JQSC15070818结球莴苣（生菜）100.00100.008JQSC15070816结球莴苣（生菜）100.0087.5060 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.2.2.2致病性发病症状种子接菌后的发病症状分为4级，不同寄主4级发病症状如下。茎用莴苣（莴笋）致病性试验结果见图4.33，图4.34，图4.35和图4.36。结球莴苣（生菜）接种结果见图4.37和图4.38。0级：无病变症状；1级：植株矮小，但生长正常；2级：植株生长受到抑制，根部可见明显褐色病变；3级：幼苗后长势不佳，僵化死亡；4级：种子腐烂。图4.33处理一试验结果(4级)图4.34处理二试验结果(4级)图4.35处理三试验结果(4级)Fig.4.33ResultoftreatmentsNo.1Fig.4.34ResultoftreatmentsNo.2Fig.4.35ResultoftreatmentsNo.2(level4)(level4)(level4)图4.36处理六试验结果(4级)图4.37处理七试验结果(4级)图4.38处理八试验结果(4级)Fig.4.36ResultoftreatmentsNo.6Fig.4.37ResultoftreatmentsNo.7Fig.4.38ResultoftreatmentsNo.8(level4)(level4)(level4)4.2.3菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌形态学鉴定本次研究共鉴定出茎用莴苣（莴笋）上致病镰孢菌4种，分别是木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.、尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.、层出镰孢F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg和三线镰孢F.tricinctum(Corda)Sacc.结球莴苣（生菜）上的致病镰孢菌1种，为木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.（1）木贼镰孢F.equiseti(Corda)Sacc.病原菌培养性状：该病原菌形态与3.1.1中病原菌形态一致。在PDA培养基上25°C培养7d，菌落较为致密，棉絮状，初为白色，后期为深褐色，直径为5.5cm（图4.39）。61 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定病原菌显微特征：小型分生孢子无。大型分生孢子镰刀状，腹背分明，较弯曲，顶细胞锥形，基细胞足跟状，多数5~7个隔膜，大小25.1~73.5×2.1~6.2µm（图4.40）。厚垣孢子球形，单生、对生或链生，多见链生，直径7.5~9.9µm，后期培养呈淡褐色（图4.41）。寄主、采集地和菌株编号：茎用莴苣（莴笋）LactucasativaL.var.asparaginaBailey，云南省玉溪通海县（WS15051809）；结球莴苣（生菜）LactucasativaL.var.capitataL.，河北张家口张北县王簸箕沟（JQSC15070818），河北张家口张北县馒头营（JQSC15070816）。发病程度和为害部位：根部或茎基部（++）。图4.39PDA培养性状图4.40大型分生孢子(20μm)图4.41厚垣孢子(20μm)Fig.4.39ColonyofF.equisetionFig.4.40MacroconidiaofF.equisetiFig.4.41ChlamydosporesofF.PDA(20μm)equiseti(20μm)（2）尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.病原菌培养性状：PDA培养基27°C培养5d后，气生菌丝较多，菌落毛毡状或棉絮状，白色，后带有粉色，后期有紫色色素产生，直径达5.3cm（图4.42）。病原菌显微特征：小型分生孢子数量较多，卵圆形或肾形。大型分生孢子镰刀形，稍弯，两端渐尖，顶细胞喙状，2~7隔，多数3隔，大小22.6~45.4×2.4~5.9μm（图4.43）。厚垣孢子球形，单生、对生或串生，直径7.1.6~9.8μm（图4.44）。寄主、采集地和菌株编号：茎用莴苣（莴笋）LactucasativaL.var.asparaginaBailey，河北张家口张北县（JYWJ15091106、JYWJ1507072801、WJ15070735）。发病程度和为害部位：根部（++）。图4.42PDA培养性状图4.43大型分生孢子(20μm)图4.44厚垣孢子(20μm)Fig.4.42ColonyofF.oxysporumonFig.4.43MacroconidiumofF.Fig.4.44ChlamydosporesofF.PDAoxysporum(20μm)oxysporum(20μm)62 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定（3）层出镰孢F.proliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg病原菌培养性状：菌落初为白色，后略带粉色（图4.45），后期可产生紫色到深紫色色素。病原菌显微特征：产孢结构有两种，复瓶梗产孢（图4.46）和单瓶梗产孢（图4.47）。小型分生孢子较多，卵形或棒槌形，顶端略膨大，基部平截。多为0隔，大小4.5~14.9×2.1~4.2μm（图4.48）。大型分生孢子细长，两端略弯曲，呈舟形。寄主、采集地和菌株编号：茎用莴苣（莴笋）LactucasativaL.var.asparaginaBailey，河北张家口张北县赐儿山（JYWJ1507072802）。发病程度和为害部位：根部（+）。图4.45PDA培养性状图4.46复瓶梗产孢(20μm)图4.47单瓶梗产孢(20μm)Fig.4.45ColonyofF.proliferatumFig.4.46PolyphialidesofF.Fig.4.47MonophialidesofF.onPDAproliferatum(20μm)proliferatum(20μm)图4.48小型分生孢子(20μm)Fig.4.48MicroconidiaofF.proliferatum(20μm)（4）三线镰孢F.tricinctum(Corda)Sacc.病原菌培养性状：在PDA上气生菌丝棉絮状，菌落初为白色，后期带有朱红色，培养基不变色，产生橘黄色分生孢子座（图4.49）。病原菌显微特征：小型分生孢子形状多样，梨形、柠檬形、瓜子形等，无隔膜，偶见1个隔膜，大小5.3~19.2×2.1~4.3μm（图4.51）。大型分生孢子月牙形，两端渐尖，基孢足跟状，2~6个隔膜，多数3隔。厚垣孢子球形。产孢细胞单瓶梗，多分枝，聚生（图4.50）。寄主、采集地和菌株编号：茎用莴苣（莴笋）LactucasativaL.var.asparaginaBailey，河北张家口张北县王簸箕沟（WJ15070821）。发病程度和为害部位：根部（++）。63 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定图4.49PDA培养性状图4.50单瓶梗产孢(20μm)图4.51小型分生孢子(20μm)Fig.4.49ColonyofF.tricinctumonFig.4.50MonophialidesofF.Fig.4.51MicroconidiaofF.PDAtricinctum(20μm)tricinctum(20μm)4.2.4菊科蔬菜镰孢菌病害病原菌分子生物学鉴定通过核糖体内转录间隔区（ITS）对菊科蔬菜上致病镰孢菌进行分子生物学鉴定，序列比对同源性结果均达100%。通过ITS构建系统发育树，如图4.47。图4.52菊科蔬菜上致病镰孢菌ITS序列系统发育树Fig.4.52ThephylogenetictreeofdifferentFusariumspeciesbasedonITSsequence4.2.5讨论菊科蔬菜较为常见的种类有茎用莴苣（莴笋）、结球莴苣（生菜）、苦苣、茼蒿、菊苣、菊花脑等，其中茎用莴苣（莴笋）和结球莴苣（生菜）种植广泛，成为重要的经济作物。国外对莴苣研究较多，鉴定出致病镰孢菌5个种，2个专化型，分别为F.avenaceum、F.oxysporum、F.oxysporumf.sp.lactucae、F.oxysporumf.sp.niveum、F.pallidoroseum、F.roseum、F.solani。目前，国内未见到对菊科蔬菜枯萎病病害的详细研究和鉴定。本研究通过对菊科蔬菜的调查和采集，经病原菌形态学鉴定，致病性测定和分子生物学鉴定，鉴定出致病镰孢菌4个种，涉及2个蔬菜寄主，明确了部分地区导致菊科蔬菜枯萎病的镰孢菌种类。64 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.3其它蔬菜镰孢菌病原菌鉴定4.3.1甜瓜茄病镰孢根腐病病原菌：F.solani(Mart.)Sacc.田间发病症状：植株发病后，叶片出现萎蔫，随着病情的不断发展，叶片干枯，并伴有较大程度的落叶（图4.53）。植株整体失水、干枯，生长受到抑制。根部表皮开裂，须根腐烂，主根受损干枯，呈干腐状（图4.54）。植株无法坐果或果实不膨大。病原菌培养性状：在PDA培养基上菌落呈绒状，白色，气生菌丝均匀，不产生色素，25°C下培养5d菌落直径达4.5cm（图4.55）。病原菌显微特征：分生孢子座菊花状（图4.56）。大型分生孢子多由分生孢子座产生，马特形，两端顿圆，顶孢稍尖，大小28.6~47.7×4.5~6.5μm（图4.58）。小型分生孢子多产生在单瓶梗上（图4.57），卵形或肾形，大小11.5~21.9×3.3~5.1μm（图4.58）。寄主、采集地和菌株编号：甜瓜（羊角脆）CucumismeloL.，河北省沧州市青县（TG15060810、TG15060809、TG15060806、TG15060907、TG15060801、TG15060906、TG15060812、TG15060908）。发病部位和为害程度：根部、茎基部（+++）。世界分布：美国，加拿大，中国，洪都拉斯，印度，新西兰，西班牙，委内瑞拉，津巴布韦。图4.53田间发病症状图4.54根部腐烂图4.55PDA培养性状Fig.4.53FusariumwiltofmelonsinFig.4.54RootrotofmelonsFig.4.55ColonyofF.solanionPDAthefield图4.56分生孢子座(20μm)图4.57单瓶梗产孢(20μm)图4.58分生孢子(20μm)Fig.4.56SporodochiaofF.solaniFig.4.57MonophialidesofF.solaniFig.4.58ConidiaofF.solani(20μm)(20μm)(20μm)65 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定4.3.2南瓜茄病镰孢根腐病病原菌：F.solani(Mart.)Sacc.田间发病症状：主要为害根和茎基部，发病后根部呈黄褐色，须根较少，植株矮化。后期植株枯萎，须根完全腐烂，主根呈黑褐色并逐渐腐烂，根部剖开内部发褐（图4.59和图4.60）。病原菌培养性状：在PDA培养基上菌落呈薄绒状，白色，圆形，25°C培养7d天菌落直径达6.3cm（图4.61）。病原菌显微特征：小型分生孢子呈肾形、卵形、椭圆形，壁厚，大小9.51~17.8×2.5~4μm（图4.64）。大型分生孢子较宽，马特型，两端钝圆，顶孢稍尖，足跟不明显，2~8个隔膜，大小为26.2~48.5×3.2~6.1μm（图4.64）。气生菌丝上产孢细胞为长筒形单瓶梗，少分枝（图4.63）。分生孢子座上产孢细胞分枝多，长短不一（图4.62）。寄主、采集地和菌株编号：南瓜CucurbitamoschataDuch.exPoir.，东北农业大学园艺学院（NG15061602）。发病部位和为害程度：根部和茎部（++）。世界分布：美国，中国。图4.59根部腐烂图4.60根部腐烂图4.61PDA培养性状Fig.4.59RootrotofpumpkinsFig.4.60RootrotofpumpkinsFig.4.61ColonyofF.solanionPDA图4.62分生孢子座(20μm)图4.63单瓶梗产孢(20μm)图4.64分生孢子(20μm)Fig.4.62SporodochiumofF.solaniFig.4.63MonophialidesofF.solaniFig.4.64ConidiaofF.solani(20μm)(20μm)(20μm)4.3.3西瓜尖孢镰孢叶腐病病原菌：F.oxysporumSchltdl.66 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定田间发病症状：西瓜苗期感病后，子叶边缘逐渐出现黄褐色病变，病斑形状不规则（图4.65），子叶发黄、萎蔫；随着病情的发展，病斑向下扩展，叶柄和茎部逐渐干枯、开裂（图4.66）。发病严重时，西瓜子叶脱落，严重时幼苗子叶全部脱落仅剩下茎秆（图4.67）。湿度大时在病变部位出现粉状霉层。病原菌培养性状：病原菌在PDA培养基上27°C条件培养5d后，菌落直径达5cm。气生菌丝绒毛状、菌落白色（图4.68），后期有红色色素产生。病原菌显微特征：大型分生孢子月牙形、镰刀形，稍弯或弯曲，两端逐渐变尖，顶细胞喙状，2~8个隔膜，多数3个隔膜，大小23.5~41.3×3.67~5.52μm（图4.69）。小型分生孢子数量较多，卵圆形或肾形，假头状着生，大小9.1~13.0×3.3～4.6μm（图4.69）。厚垣孢子球形，单生、对生或串生，直径6.9~10.8μm（图4.70）。产孢细胞为短的单瓶梗。寄主、采集地和菌株编号：西瓜Citrulluslanatus(Thunb.)Matsum.etNakai，河北定兴（XG16022908）。发病部位和为害程度：子叶、叶柄和茎秆（+++）。世界分布：澳大利亚，中国，希腊，老挝，利比亚，美国，格鲁吉亚，希腊，以色列，新西兰，台湾，巴西，韩国，尼加拉瓜，南非，乌克兰。图4.65子叶病变图4.66茎部开裂图4.67子叶脱落Fig.4.65SymptomsoncotyledonFig.4.66CrackingonstalkFig.4.67Cotyledondropping图4.68PDA培养性状图4.69分生孢子(20μm)图4.70厚垣孢子(20μm)Fig.4.68ColonyofF.oxysporumonFig.4.69ConidiaofF.oxysporumFig.4.70ChlamydosporesofF.PDA(20μm)oxysporum(20μm)4.3.4洋葱尖孢镰孢鳞腐病病原菌：F.oxysporumSchltdl.67 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定田间发病症状：地上部首先表现症状，叶部萎蔫、发黄。地下部主要危害鳞茎，病原菌从根系入侵，后逐渐向上扩展，危害鳞茎。鳞茎发病后，初成水渍状，后变为褐色，上密布白色霉层（图4.71和图4.72）。剖开鳞茎，内部成淡褐色、水渍状腐烂（图4.73）。病原菌培养性状：病原菌在PDA培养基上25°C条件培养5d后，菌落直径达4.7cm。气生菌丝较少，菌落白色，较为致密，基物淡黄色（图4.74）。病原菌显微特征：大型分生孢子镰刀形，稍弯或弯曲，顶细胞喙状，2~8个隔膜，多数3隔，大小35.5~59.7×3.6~5.5μm（图4.75）。厚垣孢子球形，单生、对生或串生，直径7.1~11.8μm（图4.76）。寄主、采集地和菌株编号：洋葱AlliumcepaL.，甘肃纽内姆（北京）种子有限公司繁种基地（YC15072202）。发病部位和为害程度：鳞茎（+++）。世界分布：澳大利亚，巴西，哥斯达黎加，古巴，萨尔瓦多，芬兰，危地马拉，洪都拉斯，墨西哥，尼加拉瓜，巴拿马，坦桑尼亚，委内瑞拉，赞比亚，中国。图4.71鳞茎病变图4.72鳞茎病变图4.73内部褐变Fig.4.71SymptomsonbulbofFig.4.72SymptomsonbulbofFig.4.73Browninnerbulbofoniononiononion图4.74PDA培养性状图4.75大型分生孢子(20μm)图4.76厚垣孢子(20μm)Fig.4.74ColonyofF.oxysporumonFig.4.75MacroconidiaofF.Fig.4.76ChlamydosporesofF.PDAoxysporum(20μm)oxysporum(20μm)4.3.5由两种镰孢菌引起的分枝列当枯萎病病原菌：尖孢镰孢F.oxysporumSchltdl.锐顶镰孢F.acuminatumEllis&Everh.68 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定田间发病症状：该病害为复合侵染，寄主为加工番茄上寄生的分枝列当。发病严重时，列当表皮干枯、脱落（图4.78）。茎秆内也稍有褐变，上密布白色霉层（图4.79）。整个植株枯萎、死亡（图4.77）。图4.77田间发病症状图4.78表皮发褐图4.79茎秆着生白色霉层Fig.4.77FusariumwiltinthefieldFig.4.78BrownontheskinFig.4.79Whitemildewonthestem尖孢镰孢F.oxysporum培养性状：在PDA培养基上25°C条件培养5d后，菌落直径达5.3cm。菌落圆形，白色，多而密，棉絮状，基物略有淡黄色（图4.80）。尖孢镰孢F.oxysporum显微特征：大型分生孢子美丽形，稍弯，足跟状略明显，2~7个隔膜，大小31.8~61.2×3.9~6.1μm（图4.81）。小型分生孢子卵形或肾形，0~1个隔膜，大小3.8~11.9×1.8~6.2μm（图4.81）。厚垣孢子球形，单生、对生或串生（图4.82）。锐顶镰孢F.acuminatum培养性状：在PDA培养基上25°C条件培养5d后，菌落直径为4.8cm。菌落近圆形，边缘不整齐，棉絮状至绒状，初为白色，后为草朱红色，中间逐渐变为浅驼色，基物不变色（图4.83）。锐顶镰孢F.acuminatum显微特征：气生菌丝上产生的大型分生孢子形态不一，多数3~5隔，大小25.3~49.8×2.5~5.3μm（图4.84）。分生孢子座产生的大型分生孢子形态较为一致，镰刀形。厚垣孢子圆形至椭球形。产孢细胞单瓶梗（图4.85）。寄主、采集地和菌株编号：分枝列当OrobancheacgyptiacaPers.，新疆昌吉州阜康市（F.oxysporumLD1508081501；F.acuminatumLD1508081502）。发病程度：严重发病（+++）。世界分布：中国。图4.80尖孢镰孢PDA培养性状图4.81分生孢子(20μm)图4.82厚垣孢子(20μm)Fig.4.80ColonyofF.oxysporumonFig.4.81ConidiaofF.oxysporumFig.4.82ChlamydosporesofF.69 中国农业科学院硕士学位论文第四章我国部分蔬菜镰孢菌病害病原菌鉴定PDA(20μm)oxysporum(20μm)图4.83锐顶镰孢PDA培养性状图4.84分生孢子(20μm)图4.85单瓶梗产孢(20μm)Fig.4.83ColonyofF.acuminatumFig.4.84ConidiaofF.acuminatumFig.4.85MonophialidesofF.onPDA(20μm)acuminatum(20μm)4.4本章小结本章重点对发生严重枯萎病的十字花科蔬菜和菊科蔬菜进行了病样采集和病原菌鉴定，在调查过程中，对其它导致蔬菜严重枯萎病的镰孢菌也进行了鉴定。病样采集地区涉及河北（张家口、廊坊、青县、保定），山东（潍坊、聊城），北京（昌平、大兴、南口），甘肃（兰州），内蒙古（乌兰察布），湖北（火烧坪），河南（安阳），西藏（拉萨），黑龙江（哈尔滨），云南（昆明、悬洪、玉溪），新疆（昌吉）等11省19个地区，寄主涉及4个科15种寄主。十字花科蔬菜包含大白菜、结球大白菜（娃娃菜）、散叶大白菜（快菜）、结球甘蓝、青花菜、长羽裂萝卜（中国萝卜）、紫菜薹和花椰菜等8个寄主，菊科蔬菜有茎用莴苣（莴笋）和结球莴苣（生菜）等2个寄主，葫芦科蔬菜包含甜瓜（羊角脆）、西瓜、南瓜等3个寄主，百合科蔬菜包含洋葱1个寄主，列当科1个寄主，为分枝列当。本章对病害的田间症状进行了详细描述，并对病原菌进行了鉴定，总共鉴定出镰孢菌属8个种。十字花科蔬菜（除花椰菜）上致病镰孢菌5个种，分别为燕麦镰孢F.avenaceum、同生镰孢F.commune、木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani。菊科蔬菜上4个菌种，分别为木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum、层出镰孢F.proliferatum和三线镰孢F.tricinctum。葫芦科上致病镰孢菌2种，尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani。百合科上致病镰孢菌1种，尖孢镰孢F.oxysporum。列当科上致病菌为尖孢镰孢F.oxysporum和锐顶镰孢F.acuminatum。本章重点对十字花科和菊科蔬菜枯萎病进行了系统的研究，将该寄主上的致病镰孢菌鉴定到种一级，填补了十字花科和菊科蔬菜上致病镰孢菌种类鉴定的空白，为叶菜类蔬菜枯萎病的鉴定和防治奠定了基础。70 中国农业科学院硕士学位论文第五章结论与讨论第五章结论与讨论5.1结论2014年9月至2017年1月，在北京、河南、天津、四川、甘肃、河北、山东、云南、安徽、海南、湖北、内蒙古、新疆、福建、湖南、山西等全国主要蔬菜种植区进行了病害采集和调查，并通过形态学、分子生物学和致病性测定对分离的镰孢菌菌株进行了鉴定。本次研究的主要结论如下：（1）蔬菜镰孢菌病害调查和菌株分离。通过在全国16个省45个蔬菜种植地区进行蔬菜根部镰孢菌病害调查，共采集到蔬菜镰孢菌病害标本279份，包括12个科39种蔬菜，分离得到镰孢菌256株，鉴定出镰孢菌10种。分别为锐顶镰孢Fusariumacuminatum，燕麦镰孢F.avenaceum，同生镰孢F.commune，木贼镰孢F.equiseti，尖孢镰孢F.oxysporum，层出镰孢F.proliferatum，茄病镰孢F.solani，半裸镰孢F.incarnatum，烟草镰孢F.tabacinum和三线镰孢F.tricinctum。此外，还分离得到刺盘孢真菌19株，为尖孢刺盘孢Colletotrichumacutatum。漆斑菌1株，为露湿漆斑菌Myrotheciumroridum。（2）鉴定新记录寄主病害7种。其中世界新记录寄主病害4种，分别是由木贼镰孢F.equiseti引起的花椰菜枯萎病，茄病镰孢F.solani引起的花椰菜根腐病，层出镰孢F.proliferatum引起的花椰菜枯萎病，以及烟草镰孢F.tabacinum引起的甘蓝根腐病。国内新记录寄主病害3种，分别为茄病镰孢F.solani引起的茄子根腐病，尖孢刺盘孢C.acutatum引起的豆芽炭疽病，以及露湿漆斑菌M.roridum引起的甜瓜茎基腐病。（3）初步明确了十字花科和菊科蔬菜上致病镰孢菌的种类。十字花科蔬菜包括大白菜、结球大白菜（娃娃菜）、散叶大白菜（快菜）、结球甘蓝、青花菜、长羽裂萝卜（中国萝卜）和紫菜薹，共鉴定出致病镰孢菌5个种，分别为燕麦镰孢F.avenaceum、同生镰孢F.commune、木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani。菊科蔬菜包括茎用莴苣（莴笋）和结球莴苣（结球生菜），共鉴定出4个种，分别为木贼镰孢F.equiseti、尖孢镰孢F.oxysporum、层出镰孢F.proliferatum和三线镰孢F.tricinctum。5.2讨论5.2.1蔬菜根部镰孢菌病害的严重性和复杂性由镰孢菌引起的蔬菜病害发生日益严重，呈现出整体逐渐加重，个别地区或寄主爆发严重的发生趋势，这与目前我国蔬菜栽培现状密不可分。我国是农业大国，2014年蔬菜产业总产值已超过其它农林牧类产业产值，成为我国第一大农产品。然而，在有限的土地上进行高度集约71 中国农业科学院硕士学位论文第五章结论与讨论化的生产，设施栽培中高密度、长时间的单一品种栽培以及土壤中致病菌的大量积累势必导致土传病害，尤其是镰孢菌枯萎病的大爆发。在近几年的调查中发现，蔬菜镰孢菌病害发生不仅严重，而且复杂多变，对田间防治造成很大困扰。一方面，单一镰孢菌侵染加重，多种镰孢菌复合侵染增多。蔬菜根部镰孢菌病害可由单一病原菌侵染，也可由多种病原菌复合侵染，其中以尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani危害最广、造成的经济损失最大。2011年11月，河北青县嫁接甜瓜发生由茄病镰孢F.solani引起的根腐病（周慧敏，2012）。而2015年6月，该地区再次爆发了严重的甜瓜根腐病，幼苗和成株均可感病，发生程度和危害面积均严重于前者，几乎危害当地整个甜瓜产业，而致病菌依然是茄病镰孢F.solani。2014年10月，山东聊城某地发生严重的花椰菜枯萎病，几乎绝产，究其原因是由3种镰孢菌复合侵染所致。2016年9月，北京昌平农业合作社发生严重的百合枯萎病，病原菌为尖孢镰孢F.oxysporum、串珠镰孢F.subglutinans和茄病镰孢F.solani。而兰州地区鉴定的引起百合枯萎病的镰孢有5种，且优势菌群还包括禾谷镰孢F.graminearum（边小荣等，2016）。同样，引起内蒙古地区马铃薯枯萎病的镰孢菌有3种，为尖孢镰孢F.oxysporum、三线镰孢F.tricinctum和茄病镰孢F.solani（陈慧等，2016）。蔬菜枯萎病的发生正逐渐形成以尖孢镰孢F.oxysporum和茄病镰孢F.solani中一种或两种为主，多种镰孢菌复合侵染的现状。另一方面，镰孢菌侵染部位多变，引起的症状多变。症状的多变与寄主所处的地理环境有很大的关系，更重要的是，镰孢菌除侵染寄主的根茎部维管束外，还可以危害其它部位。2015年，北京市蔬菜花卉研究所温室大棚发生了黄瓜茎腐病，黄瓜根系良好，病斑自茎基部向上扩展，病斑呈纵向、粗线状，未环绕茎部，干腐状。2015年7月，四川大罗镇发生黄花菜花腐病，花朵水渍状腐烂，着生白色霉层。2016年，山西运城和江苏徐州相继发生嫁接黄瓜枯萎病，主要危害部位为嫁接口。2016年2月，保定定兴发生西瓜叶腐病，病原菌主要为害西瓜幼苗的子叶和叶柄，不为害根系，病斑褐变开裂，后期子叶脱落。四种病害的症状虽然千差万别，但致病菌均为尖孢镰孢F.oxysporum，如果通过传统的症状加经验来确定病原菌就容易误诊、错判。如何快速识别病原，如何准确鉴定，需要我们借助科学的工具，如利用显微镜和PCR技术等，这就对广大农业工作者提出了更高的要求。5.2.2分子生物学在镰孢菌分类鉴定中的必要性镰孢菌形态变化较大，不同的培养环境和寄主上形态均有差异，经过单孢分离的菌株在扩繁几代后也会出现形态差异的现象。正因如此，镰孢菌属分类鉴定历史上曾出现新种命名的黄金时期，多达1000余个新种被发现，这与该属真菌形态的多变性有直接关系。这一点极大的造成了单单依靠形态学鉴定镰孢菌属的困难性和局限性。一方面，随着不同学者对镰孢菌属分类系统进行不断的梳理和标准化，根据形态结构的相似性，大量的种被重新划分为几个种或者复合种，不同分类系统划分依据不同，有的系统晦涩而难以实际应用，有的较为简明易于接受。这就造成了目前国际上没有一个公认的镰孢菌属分类系统。另一方面，随着生产实践的不断需求，迫切需要对镰孢菌的种及种下等级进行正确鉴定。在这个背景下，形态学应用的局限性暴露无疑，分子生物学手段逐渐被国内外学者所采用。72 中国农业科学院硕士学位论文第五章结论与讨论2003年，同生镰孢F.commune被当做新种进行描述（Skovgaardetal.，2003）。在此之前，因F.commune的形态特征与尖孢镰孢非常相似，而被定为尖孢镰孢F.oxysporum。两个菌唯一不同的特征是F.commune偶尔能观察到的聚瓶梗产孢结构。然而，这些形态上的差别是细微的且具有可变性的，因此形态学特征很难准确区分两者。2013年，美国学者利用EF-1α和mtSSU两个基因序列将F.commune和F.oxysporum准确鉴定（Yu&Babadoost，2013）。分子生物学技术同样可以应用于镰孢菌专化型的研究。Mbofung等利用3个基因综合分析了尖孢镰孢莴苣专化型F.oxysporumf.sp.lactucae，最后将该专化型分为3个型，且具有明显的地域性（Mbofungetal.，2007）。分子生物学方法应用于镰孢菌鉴定中是科学进步的必然趋势，需要与传统的形态学鉴定进行有效的结合统一。诚然两种方法存在不一致性（Kristensenetal.，2005），但要正确对待和判断，随着科学技术的发展，形态学鉴定和分子生物学方法之间势必要做到完善的结合，在此过程中还需要大量的工作进行验证和研究。5.2.3土传真菌病害病原菌鉴定在病害防控方面的重要性土传病害，是将土壤或土壤病残体上繁殖的病原体，待条件适宜时从植株根部或茎基部侵染植株，从而引起植株发病的一类病害统称为土传病害。其中，由真菌引起的根部土传病害对农业生产为害最为严重，如镰孢菌属（Fusarium）真菌引起的植株枯萎病，丝核菌属（Rhizoctonia）真菌引起茎基腐病和立枯病，疫霉属（Phytophthora）真菌引起的晚疫病，腐霉属（Pythium）真菌引起的猝倒病，轮枝菌属（Verticillium）真菌引起的黄萎病，以及核盘菌属（Sclerotinia）真菌引起的菌核病等。由镰孢菌属（Fusarium）真菌引起的枯萎病尤为严重，曾多次造成经济作物毁灭性的损失。1988年，湖北谷城县发生山药枯萎病，病害不断蔓延，波及周边北河乡、双合乡等多个地区，田块发病率高达98%，部分田块绝收（姚圣梅，1988）。江苏省常熟市曾发生严重的蚕豆枯萎病，田块的平均发病率在30%左右，严重者发病率超过40%（任海英，2002）。2011年，美国濒危物种香榧发生毁灭性枯萎病，病害发生率达71%到100%，致病菌为镰孢菌新种F.torreyae（Smithetal.，2011；Aokietal.，2013）。目前，我国大部分蔬菜抗枯萎病品种匮乏，生产上仍然以化学防治为主，配合田间轮作、土壤消毒、种子消毒、砧木嫁接等方法防治枯萎病。而病原菌的鉴定工作是研究和防治枯萎病的基础和前提，应引起广大农业工作者的重视。抗病品种的选育以明确的病原菌为前提。育种工作中，选择抗源的前提是必须明确本地农作物上主要致病菌的种类及其生理小种的组成，这就需要来自生产一线的病害发生情况的准确资料。不同病原菌可以造成极其相似的田间发病症状，如由尖孢镰孢F.oxysporum引起的枯萎病和大丽轮枝菌V.dahliae引起的黄萎病，两种病原菌均为害植株维管束，导致植株枯萎、死亡。因此，准确鉴定病原到种、变种、甚至专化型对后续研究的开展显得尤为重要。防治药剂的筛选以明确的病原菌为依据。无论是实验室离体抑菌活性筛选还是活体盆栽药剂筛选，高致病性菌株的选择非常重要。通过对土传病害病原菌的鉴定，可以明确掌握病原菌73 中国农业科学院硕士学位论文第五章结论与讨论的形态学分类地位、系统发育关系以及致病力的强弱，为防治药剂的筛选工作建立庞大的菌种库，从而为实验室科研成果顺利转化为应用生产提供保障。设施栽培生态调控技术的研发以明确的病原菌为理论模型。生态调控技术针对设施栽培，利用环境的可调控性，通过调节温湿度等因素，使之不利于病害的发生，而使蔬菜健康生长。调控温湿度的理论依据则是致病菌的生理生化特性，如番茄晚疫病病原菌的最适侵染湿度大于85%，那么设施调控措施要保持降湿、避免结露；适度提高温度可以使病原菌孢子质膜破裂，引起病原菌死亡等。通过对不同病原菌生理生化方面的研究，建立不同病原菌对不同外界环境反应机制的理论模型，从而找到生态调控的关键技术。因此，做好土传病害病原菌的鉴定工作能为我国蔬菜安全生产和病害的综合调控奠定基础。74 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中国农业科学院硕士学位论文附录一附录一1、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumequiseti，菌株编号为HYC1410080201，ITS部分序列，NCBI登录号为KX583609：CTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCTATACGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCGCCCCGTAAAACGGGACGGCCCGCCCGAGGACCCCTAAACTCTGTTTTTAGTGGAACTTCTGAGTAAAACAAACAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCTCAGCTTGGTGTTGGGACTCGCGGTAACCCGCGTTCCCCAAATCGATTGGCGGTCACGTCGAGCTTCCATAGCGTAGTAATCATACACCTCGTTACTGGTAATCGTCGCGGCCACGCCGTAAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA2、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumequiseti，菌株编号为HYC1410080201，EF-1α部分序列，NCBI登录号为KX583610：AGACTCACCTTAACGTCGTCGTCATCGGCCACGTCGACTCTGGCAAGTCGACCACTGTGAGTACTACCCTCAATGACCTGCTTATCAGCAGTCATCAACCCCGCCATACGTGGTGGGGTAAATTCAACTTACACATTTGCTGACAAAATTGCATAGACCGGTCACTTGATCTACCAGTGCGGTGGTATCGACAAGCGAACCATCGAGAAGTTCGAGAAGGTTGGTTTCCATTTTCCTCGATCGCACGCCCTCTGCCCATCGATCCAGCACCCGAATCAGTCTCGACGACTGAACATGCGCCTGTTACCCCGCTCGAGTACAAAATTTTGCGGTTCAACCGTAATTTTTTGGTGGGGCTTATACCCCGCTACTCGAGTGACAGGCGCTTGCCCTCTTCCCACAAAATCACTTGCGCATCACGTGTCAATCAGTCACTAACCACTCGACAATAGGAAGCCGCCGAGCTCGGTAAGGGTTCCTTCAAGTACGCCTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGATATCGCTCTCTGGAAGTTCGAGACTCCTCGCTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTGTCACCACTTGCACTCATTACCTTCTCAGGCTAACATGTATTCCAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCATCAAGAACATGATCACTGGTACT3、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumequiseti，菌株编号为HYC1410080201，mtSSU部分序列，NCBI登录号为KX583611：AATGGCCTAACGGCTGAACTGGCAACTTGGAGAAGTGGCAAGTCTTCCAGTATGGGGAGCAAACAGCTATGGGTCAAGCCCGATACCTTTAAGAGAAGTCTTATTGTGAGGGCGAGTTGTAAAACACCATAGGGCTGGCCGTCCCATATGAAAAGATTTTATTAGAATTGAATGAAACTTTGTTTATATATTGATAATGACAGTATATATATCGTGTCTTGACTAATTGCGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGTAAGAGACTAGTGTTATTCATCTTAATTAGGTTTAAAGGGTACCCAGACGGTCA80 中国农业科学院硕士学位论文附录一GTATAGCTTATAAAATGTTAGTACCTGACTAGAGTTTTATGTAAGAGGGCAGTACTTGAGGAGGAGAGATGAAATTTCGTGATACCAAAGGGACTCTGTAAAGGCGAAGGCAGCCCTCTATGTAAAAACTGACGTTGAAGGACGAAGGCACAGAGAACAAACAGGATTAGATACCCAAGTAGTCTTTGCAGTAAATGATGAATGCCATAGGTTAGATAAAAAAATTTCTTAGAGGTCGTCCCCTCAGACAAAAAATGGTGCTATCATTTTACTTATTTTCTAAATAAGGTTTTTTTTTAACTATCTCGAGAAATTTTTTGTTTATCTGGTCTATAAATGAAAGTGTAAGCATTTCACCTCAAGAGTAATGTGGCAACGCAGGAACTGAAATCACTAGACCGTTTCTGACACCAGTAGTGAAGTATGTTATTTAATTCA4、花椰菜根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为HYC1410080102，ITS部分序列：AACCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTATACAACTCATCAACCCTGTGAACATACCTAAAACGTTGCTTCGGCGGGAACAGACGGCCCTGTAACAACGGGCCGCCCCCGCCAGAGGACCCCTAACTCTGTTTTTATAATGTTTTTCTGAGTAAACAAGCAAATAAATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTACAACCCTCAGGCCCCCGGGCCTGGCGTTGGGGATCGGCGGAAGCCCCCCTGTGGGCACACGCCGTCCCTCAAATACAGTGGCGGTCCCGCCGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGCTAACACCTCGCAACTGGAGAGCGGCGCGGCCATGCCGTAAAACACCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGAATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAT5、花椰菜根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为HYC1410080102，EF-1α部分序列：ATGGGTAAGGAAGACAAGACTCACCTCAACGTCGTCGTCATCGGCCACGTCGACTCTGGCAAGTCGACCACCGTAAGTCAAACCCTCATCGCGATCTGCTTATCTCGGGTCGTGGAACCCCGCCTGGCATCTCGGGCGGGGTATTCATCATTCACTTCATGCTGACAATCATCTACAGACCGGTCACTTGATCTACCAGTGCGGTGGTATCGACAAGCGAACCATCGAGAAGTTCGAGAAGGTTGGTGACATCTGCCCCCGATCGCGCCTTGATATTCCACATCGAATTCCCCGTCGAATTCCCTCCATCGCGATACGCTCTGCGCCCGCTTCTCCCGAGTCCCAAAATTTTTGCGGTCCGACCGTAATTTTTTTGGTGGGGCATTTACCCCGCCACTCGGGCGACGTTGGACAAAGCCCTGATCCCTGCACACAAAAACACCAAACCCTCTTGGCGCGCATCATCACGTGGTTCACGACAGACGCTAACCGGTCCAACAATAGGAAGCCGCTGAGCTCGGTAAGGGTTCCTTCAAGTACGCCTGGGTCCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGACATTGCCCTCTGGAAGTTCGAGACTCCCCGCTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTGCTGTCACCTCTCTCACACATGTCTCACCACTAACAATCAACAGACGCCCCCGGCCACCGTGACTTCATCAAGAACATGATCACTGGGTACTTCCA81 中国农业科学院硕士学位论文附录一6、花椰菜根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为HYC1410080102，mtSSU部分序列：CAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATGGCCTAACGGCTGAACTGGCAACTTGGAGAAGTGGCAAGTCTCATAGGATGGGCTGGTGCTACCCCCATTTCTATAAGATTGTATTAGGGTTGAATGAAGCTTTGTTTATATATTGATAATGACAGTATATATATCGTGTCTTGACTAATTGCGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGTAAGAGACTAGTGTTATTCATCTTAATTAGGTTTAAAGGGTACCCAGACGGTCAATATAGCTTCTAAAATGTTAGTACTTGACTAGAGTTTTATGTAAGAGGGCAGTACTTGAGGAGGAGAGATGAAATTCCGTGATACCAAAGGGACTCTGTAAAGGCGAAGGCAGCCCTCTATGTAAAAACTGACGTTGAAGGACGAAGGCACAGAGAACAAACAGGATTAGATACCCAAGTAGTCTTTGCAGTAAATGATGAATGCCATAGGTCAGATTAATGTAGATGAGGGACTAGACATTAAACGTTATTTGGTCTATAAATGAAAGTGTAAGCATTCCACCTCAAGAGTAATGTGGCAACGCAGGAACTGAAATCACTAGACCGTTTCTGACACCAGTAGTGAAGTATGTTATTTAATTCA7、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumproliferatum，菌株编号为HYC1410080401，ITS部分序列：ACCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGTTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGCCCTTGCGGCAAGCCGGCCCCGAAATCTAGTGGCGGTCTCGCTGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGTAAAACCCTCGCAACTGGTACGCGGCGCGGCCAAGCCGTTAAACCCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAT8、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumproliferatum，菌株编号为HYC1410080401，EF-1α部分序列：TATGGGTAAGGAAGACAAGACTCACCTTAACGTCGTCGTCATCGGCCACGTCGACTCTGGCAAGTCGACCACTGTGAGTACTACCCTGGACGTTGAGCTTATCTGCCATCGTGATCCTGACCAAGATCTGGCGGGGTACATCTTGGAAGACAACATGCTGACATCGCTTCACAGACCGGTCACTTGATCTACCAGTGCGGTGGTATCGACAAGCGAACCATCGAGAAGTTCGAGAAGGTTAGTCACTTTCCCTTCGATCGCGCGTCCTCTGCCCACCGATTTCACTTGCGATTCGAAACGTGCCTGCTACCCCGCTCGAGACCAAAAATTTTGCGATATGACCGTAATTTTTTTGGTGGGGCATTTACCCCGCCACTCGAGCGATGGGCGCGTTTTTGCCCTTTCCTGTCCACAACCTCAATGAGCGCATTGTCACGTGTCAAGCAGCGACTAACCATTCGACAATAGGAAGCCGCTGAGCTCGGTAAGGGTTCCTTCAAGTACGCCTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGATATTGCTCTCTGGAAGTTCGAGACTCCTCGCTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTGTCGCTCATACCTCATCCTACTTCCTCATACTAACACATCATTCAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCATCAAGAACATGATCA82 中国农业科学院硕士学位论文附录一9、花椰菜枯萎病病原菌—Fusariumproliferatum，菌株编号为HYC1410080401，mtSSU部分序列：TCAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATGGCCTAACGGCTGAACTGGCAACTTGGAGAAGTGGCAAGTCTTCCAGTATGGGGAGCAAAACAGCTATGGGTCAAGTCTGATATCTTTAGGAGGGGCGAAGCTCCTCTTATTGTGAGGGCGAGTTATATAACACCATAGGACTGGCCGTCCCATATGAAAAGATTATATTAGAATTGAATGAAGCTTTGTTTATATATTGATAATGACAGTATATATATCGTGTCTTGACTAATTGCGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGTAAGAGACTAGTGTTATTCATCTTAATTAGGTTTAAAGGGTACCCAGACGGTCAATATAGCTTATAAAATGTTAGTACTTGACTAGAGTTTTATGTAAGAGGGCAGTACTTGAGGAGGAGAGATGAAATTTCGTGATACCAAAGGGACTCTGTAAAGGCGAAGGCAGCCCTCTATGTAAAAACTGACGTTGAAGGACGAAGGCACAGAGAACAAACAGGATTAGATACCCAAGTAGTCTTTGCAGTAAATGATGAATGCCATAGGTTAGATGGGTTGGCTCGTCTAGTTGAGTTAGTTTAGCAAACTAATGATCTAGACGAGCCCACCGTATATTTGGTCTATAAATGAAAGTGTAAGCATTTCACCTCAAGAGTAATGTGGCAACGCAGGAACTGAAATCACTAGACCGTCTACACCGATGATTT10、茄子根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为QZ15051822，ITS部分序列，NCBI登录号为KX981059：CCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTATACAACTCATCAACCCTGTGAACATACCTAAAACGTTGCTTCGGCGGGAACAGACGGCCCTGTAACAACGGGCCGCCCCCGCCAGAGGACCCCTAACTCTGTTTTTATAATGTTTTTCTGAGTAAACAAGCAAATAAATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTACAACCCTCAGGCCCCCGGGCCTGGCGTTGGGGATCGGCGGAAGCCCCCTGTGGGCACACGCCGTCCCTCAAATACAGTGGCGGTCCCGCCGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGCTAACACCTCGCAACTGGAGAGCGGCGCGGCCATGCCGTAAAACACCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGAATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAG11、茄子根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为QZ15051822，EF-1α部分序列，NCBI登录号为KX981060：GACTCTGGCAAGTCGACCACCGTAAGTCAAACCCTCATCGCGATCTGCTTATCTCGGGTCGTGGAACCCCGCCTGGCATCTCGGGCGGGGTATTCATCATTCACTTCATGCTGACAATCATCTACAGACCGGTCACTTGATCTACCAGTGCGGTGGTATCGACAAGCGAACCATCGAGAAGTTCGAGAAGGTTGGTGACATCTCCCCCGATCGCGCCTTGCTATTCCACATCGAATTCCCCGTCGAATTCCCTCCCTCGCGATACGCTCTGCGCCCGCTTCTCCCGAGTCCCAAAATTTTTGCGGTCCGACCGTAATTTTTTTTGGTGGGGCATTTACCCCGCCACTCGGGCGACGTTGGACAAAG83 中国农业科学院硕士学位论文附录一CCCTGATCCCTGCACACAAAAACACCAAATCCTCTTGGCGCGCATCATCACGTGGTTCACGACAGACGCTAACCGGTCCAACAATAGGAAGCCGCTGAGCTCGGTAAGGGTTCCTTCAAGTACGCCTGGGTCCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGACATTGCCCTCTGGAAGTTCGAGACTCCCCGCTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTGCTGTCACCTCTCTCACACATGTCTCACCACTAACAATCAACAGACGCCCCCGGCCACCGTGACTTC12、茄子根腐病病原菌—Fusariumsolani，菌株编号为QZ15051822，mtSSU部分序列，NCBI登录号为KX981061：GAATATTGGTCAATGGCCTAACGGCTGAACTGGCAACTTGGAGAAGTGGCAAGTCTCATAGGATGGGCTGGTGCTACCCCCATTTCTATAAGATTGTATTAGGGTTGAATGAAGCTTTGTTTATATATTGATAATGACAGTATATATATCGTGTCTTGACTAATTGCGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGTAAGAGACTAGTGTTATTCATCTTAATTAGGTTTAAAGGGTACCCAGACGGTCAATATAGCTTCTAAAATGTTAGTACTTGACTAGAGTTTTATGTAAGAGGGCAGTACTTGAGGAGGAGAGATGAAATTCCGTGATACCAAAGGGACTCTGTAAAGGCGAAGGCAGCCCTCTATGTAAAAACTGACGTTGAAGGACGAAGGCACAGAGAACAAACAGGATTAGATACCCAAGTAGTCTTTGCAGTAAATGATGAATGCCATAGGTCAGATTAATGTAGATGAGGGACTAGACATTAAACGTTATTTGGTCTATAAATGAAAGTGTAAGCATTCCACCTCAAGAGTAATGTGGCAACGCAGGAACTGAAATCACTAGACCGTTTCTGACACCAGTAGTGAAGTATGTTATTTAATTC13、甘蓝根腐病病原菌—Fusariumtabacinum（Plectosphaerellacucumerina），菌株编号为GL11101616，ITS部分序列，NCBI登录号为KT596812：CAGGTCTGTAGGGGTAACCTGCGGAGGGATCATTACTGAGTACTACACTCTCTACCCTTTGTGAACTATTATACCTGTTGCTTCGGCGGCGCCCGCAAGGGTGCCCGCCGGTCTCATCAGAATCTCTGTTTTCGAACCCGACGATAATTCTGAGTGTTCTTAGCGAACTGTCAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGCTCCAGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACGCGATATGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATGGCGCCTTCCAGTATCCTGGGAGGCATGCCTGTCCGAGCGTCGTTTCAACCCTCGAGCCCCTGTGGCCCGGCGTTGGGGATCTGCCACGGCAGGCCCCTAAAACCAGTGGCGGACCCGAAGGGCCCTCTCCTTTGCGCAGTAGCATTCGCCTCGCATCGGGAGTCCTCGGCGTCCTGCCTCTAAACCCCCCACAAGCCCGCTTCGGCGGCACCAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGGCCGGAGGAA14、甘蓝根腐病病原菌—Fusariumtabacinum（Plectosphaerellacucumerina），菌株编号为GL11101616，28SribosomalDNAgene部分序列，NCBI登录号为KT596813：CCATAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCCTTCGGGGTCCGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGCGTCGGGTACGGGTCCCTACCGAGTTCCCTGGAACGGGACGCCATAGAGGGTGAGAGCCCCGT84 中国农业科学院硕士学位论文附录一CTGGTAGGATACCCAGCCCATGTGACGCTCCCTCGACGAGTCGAGTAGTTTGGGAATGCTGCTCTAACGGGAGGTATACTCCTTCCAAAGCTAAATACCGGCTGGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCACTTTGAAAAGAGAGTCAAACAGCACGTGAAATTGTTAAAAGGGAAGCACTCGCTACCAGACTTGGGTTTGGCGGTTCAACCGGGGCCACGCCCCGGGGCATTCCGCCAGCTCAGGCCAGCATCAGCTTTCCGTCGGGGGCAAAGACGTCGGGAATGTGGCTCCCCCTCGGGGGAGTGTTATAGCCCGGCGTGTCATACCCTTCGGGGGGCTGAGGTACGCGCTTCTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTAGCTAGTGACCCGTCTTGAACGCGCGGGACCG15、豆芽炭疽病病原菌—Colletotrichumacutatum，菌株编号为DY16011401，ITS部分序列，NCBI登录号为KX436091：TTCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACTGAGTTACCGCTCTATAACCCTTTGTGAACATACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCAGGGGAAGCCTCTCGCGGGCCTCCCCTCCCGGCGCCGGCCCCCACCACGGGGACGGGGCGCCCGCCGGAGGAAACCAAACTCTATTTACACGACGTCTCTTCTGAGTGGCACAAGCAAATAATTAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCTCGCCAGCATTCTGGCGAGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCACCGCTTGGTTTTGGGGCCCCACGGCACACGTGGGCCCTTAAAGGTAGTGGCGGACCCTCCCGGAGCCTCCTTTGCGTAGTAACTAACGTCTCGCACTGGGATTCGGAGGGACTCTTGCCGTAAAACCCCCAAATTTTTTACAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAG16、豆芽炭疽病病原菌—Colletotrichumacutatum，菌株编号为DY16011401，ITS部分序列，NCBI登录号为KX436092：TGCCTGCGGAGGGATCATTACTGAGTTACCGCTCTATAACCCTTTGTGAACATACCTAACCGTTGCTTCGGCGGGCAGGGGAAGCCTCTCGCGGGCCTCCCCTCCCGGCGCCGGCCCCCACCACGGGGACGGGGCGCCCGCCGGAGGAAACCAAACTCTATTTACACGACGTCTCTTCTGAGTGGCACAAGCAAATAATTAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCTCGCCAGCATTCTGGCGAGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCACCGCTTGGTTTTGGGGCCCCACGGCACACGTGGGCCCTTAAAGGTAGTGGCGGACCCTCCCGGAGCCTCCTTTGCGTAGTAACTAACGTCTCGCACTGGGATTCGGAGGGACTCTTGCCGTAAAACCCCCAAATTTTTTACAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA85 中国农业科学院硕士学位论文附录一17、甜瓜漆腐病病原菌—Myrotheciumroridum，菌株编号为TG1504270202，ITS部分序列，NCBI登录号为KX421205：TTCCTCCCGGCTATCGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGATCCGAGGTCAACTTTCAGAAGTGGGGTGTTTTACGGCATGGCCACCGCCGAGCTCCAATGCGAGTTGTGCTACTACGCAGAGGGGGACTACAGCGAGACCGCCACTGAATTTCGGGGCCGGCAGGCGCGGGGACCGTCCCGGAGGACAGCCCCGGCCCACGCCGATCCCCAACGCCAGGCACTGGGGGCCTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTTATTCATTTGTTTATGTGTCACTCAGAGGAGAAAACCACTAAAGACATAAGAGTTTGGGTTCTCCGGCGGGCGCCTGGTTCCGTTGCCCGAAGGCGCCGGGGCGGTCCCGCCGAAGCAACGATAGGTAAGGTTCACAAAGGGTTTGGGAGTTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCAGGTCACCCCCTACGGAA18、甜瓜漆腐病病原菌—Myrotheciumroridum，菌株编号为TG1504270202，TEF1部分序列，NCBI登录号为KX421205：TCAAGAACATGATTACTGGTACTTCCCAGGCCGACTGCGCCATTCTCATCATTGCCGCCGGTACTGGTGAGTTCGAGGCTGGTATCTCCAAGGATGGCCAGACCCGTGAGCACGCCCTGCTCGCCTACACCCTGGGTGTCCGACAGCTCATTGTCGCCATCAACAAGATGGACACCACCCAGTGGTCCGAGGCCCGTTTCCAGGAGATCATCAAGGAGACCTCCAACTTCATCAAGAAGGTCGGCTACAACCCCAAGACCGTTGCCTTCGTCCCCATCTCCGGCTTCAACGGCGACAACATGCTTGAGGCCTCCTCCAACTGCCCCTGGTACAAGGGCTGGGAGAAGGAGACCAAGGCTGGCAAGTCCACCGGCAAGACCCTCCTCGAGGCCATTGACGCCATCGAGCCCCCCAAGCGTCCCACAGACAAGCCCCTCCGTCTTCCCCTCCAGGATGTCTACAAGATCGGTGGTATCGGCACAGTTCCCGTCGGCCGTATCGAGACTGGTGTCCTGAAGCCCGGCATGGTTGTTACCTTCGCCCCCTCCAACGTCACCACTGAAGTCAAGTCCGTTGAGATGCACCACGAGCAGCTGCCCGAGGGTGTCCCCGGTGACAACGTTGGTTTCAACGTCAAGAACGTCTCCGTCAAGGAGATTCGCCGTGGCAACGTCGCTGGTGACACCAAGAACGACCCCCCCATGGGTGCCGCTTCTTTCCAGGCCCAGGTCATTGTCCTCAACCACCCTGGCCAGGTCGGTGCTGGTTACGCCCCCGTCCTTGACTGCCACACTGCCCACATTGCCTGCAAGTTCGCCGAGATCCAGGAGAAGATCGACCGCCGTACCGGCAAGTCTGTCGAGTCCAACCCCAAGTTCATCAAGTCTGGTGACTCCGCCATCATCAAGCTGGTCCCCTCCAAGCCCATGTGTGTTGAGGCTTTCACCGACTACCCTCCCCTGGGCCGTTTCGCCGTCCGTGACATGCGTCA86 中国农业科学院硕士学位论文附录二附录二1、燕麦镰孢FusisporiumavenaceumFr.学名：FusisporiumavenaceumFr.,Syst.mycol.(Lundae)3(2):444,1832.异名：Fusariumavenaceum(Fr.)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:713,1886.Fusariumavenaceum(Fr.)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:713,1886,f.avenaceum.Fusariumavenaceumf.fabae(T.F.Yu)W.Yamam.,Sci.Rep.HyogoUniv.Agric.,Ser.Agr.Biol.2(1):60,1955.Fusariumavenaceumf.fabalisX.Y.Ruan,Y.M.Jiang,W.Luo&J.H.Wang,Actaphytopath.sin.12(no.2):32,1982.Fusariumavenaceumf.fabarumX.Y.Ruan,Y.M.Jiang,W.Luo&J.H.Wang,Actaphytopath.sin.12(no.2):32,1982.Fusariumavenaceum(Fr.)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:713,1886,subsp.avenaceum.Fusariumavenaceumsubsp.volutum(Wollenw.)Raillo,FungioftheGenusFusarium:188,1950.Fusariumavenaceum(Fr.)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:713(1886)var.avenaceum.Fusariumavenaceumvar.fabaeT.F.Yu,Phytopathology34:392,1944.Fusariumavenaceumvar.herbarum(Corda)Bilaĭ,Fusarii(Biologijaisistematika):95-99,1955.Fusariumavenaceumvar.pallensWollenw.,Fusariaautographicadelineate2:no.575,1924.Fusariumavenaceumvar.volutum(Wollenw.)Wollenw.&Reinking,DieFusarien:56,1935.Fusariumgraminumvar.herbarum(Corda)Wollenw.,Fusariaautographicadelineate3:no.941,1930.Fusariumherbarum(Corda)Fr.,Summaveg.Scand.,SectioPost.(Stockholm):472,1849.Fusariumherbarumvar.avenaceum(Fr.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineate3:no.899,1930.Fusariumherbarum(Corda)Fr.,Summaveg.Scand.,SectioPost.(Stockholm):472,1849,var.herbarum.Fusariumherbarumvar.volutumWollenw.,Fusariaautographicadelineate3:no.893,1930.Fusariumroseumvar.avenaceum(Fr.)W.C.Snyder&H.N.Hansen.SelenosporiumherbarumCorda,Icon.fung.(Prague)3:34,1839.87 中国农业科学院硕士学位论文附录二有性型：GibberellaavenaceaR.J.Cook,Phytopathology57:735,1967.2、同生镰孢FusariumcommuneK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg学名：FusariumcommuneK.Skovg.,O’Donnell&Nirenberg,inSkovgaard,Rosendahl,O'Donnell&Nirenberg,Mycologia95(4):632,2003.3、木贼镰孢Fusariumequiseti(Corda)Sacc.学名：Fusariumequiseti(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:707,1886.基原异名：SelenosporiumequisetiCorda,Icon.fung.(Prague)2:7,1838.异名：FusariumbullatumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:198-201,1915.Fusariumequiseti(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:707,1886,f.equiseti.Fusariumequiseti(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:707,1886,subsp.equiseti.Fusariumequisetivar.bullatum(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineate3:916,1930.Fusariumequisetivar.crissumWollenw.,Fusariaautographicadelineate3:921,1930.Fusariumequiseti(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:707,1886,var.equiseti.Fusariumequisetivar.intermediumSaccas,Agronomíatrop.10:49,1955.FusariumfalcatumAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:175-184,1910.FusariumfalcatumAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:175-184,1910,var.falcatum.Fusariumfalcatumvar.fuscumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:138,1915.FusariumgibbosumAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:190,1910.Fusariumgibbosumvar.bullatum(Sherb.)Bilaĭ,Mikrobiol.Zh.49(6):6,1987.FusariumgibbosumAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:190,1910,var.gibbosum.Fusariumroseumvar.gibbosum(Appel&Wollenw.)Messiaen&R.Cass.,inTivoli,Agronomie8(3):220,1988.Fusariumroseumvar.gibbosum(Appel&Wollenw.)Messiaen&R.Cass.,Ann.Inst.Rech.Agron.,Ser.C.(Ann.Epiphyt.)19:435,1968.Fusariumvasinfectumvar.pisiSchikora,Arb.k.biol.Aust.f.Ladu-u-Forstwirth5:157-188,1906.有性型：GibberellaintricansWollenw.,Fusariaautographicadelineate3:no.810,1930.88 中国农业科学院硕士学位论文附录二4、茄病镰孢Fusariumsolani(Mart.)Sacc.学名：Fusariumsolani(Mart.)Sacc.,Michelia2(no.7):296,1881.基原异名：FusisporiumsolaniMart.,DieKartoffel-EpidemiederletztenJahreoderdieStockfäuleundRäudederKartoffeln(Munich)3:Fig..25-30,1842.异名：Cucurbitariahaematococca(Berk.&Broome)Kuntze,Revis.gen.pl.(Leipzig)3(2):461,1898.Dialonectriahaematococca(Berk.&Broome)Cooke,Grevillea12(no.64):110,1884.FusariumaduncisporumWeimer&Harter,JournalofAgriculturalResearch32:312,1926.FusariumeumartiiC.W.Carp.,J.Agric.Res.,Washington5:204,1915.FusariumjavanicumKoord.,Verh.K.Akad.Wet.,tweedesect.13(4):247,1907.Fusariumjavanicumvar.radicicolaWollenw.,Z.ParasitKde3:286,1931.FusariummartiiAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:83,1910.FusariummartiiAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:83,1910,f.martii.Fusariummartiivar.caucasicumRaillo,FungioftheGenusFusarium:227,1950.FusariummartiiAppel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:83,1910,var.martii.Fusariummartiivar.minusSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:249,1915.Fusariummartiivar.phaseoliBurkh.,26:1003-1033,1919.Fusariummartiivar.pisiF.R.Jones,J.Agric.Res.,Washington26:459,1923.Fusariummartiivar.virideSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:247,1915.Fusariumphaseoli(Burkh.)T.Aoki&O'Donnell,inAoki,O'Donnell,Homma&Lattanzi,Mycologia95(4):671,2003.Fusariumsolani(Mart.)Appel&Wollenw.,ArbeitenKaiserl.Biol.Anst.Ld.-u.Forstw.8:64-78,1910.Fusariumsolanif.albiziaeBagchee[as'albizziae'],IndianForester80:250,1954.Fusariumsolanif.batatasT.T.McClure,Phytopathology41:75,1951.Fusariumsolanif.cucurbitaeW.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.28:740,1941.Fusariumsolanif.dalbergiaeW.L.GordonexB.K.Bakshi&S.Singhter,IndianForestRecords,NewSeries,Mycology2(5):75,1959.89 中国农业科学院硕士学位论文附录二Fusariumsolanif.eumartii(C.W.Carp.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.28:740,1941.Fusariumsolanif.hibisciRibeiroetal.,AppuntiPatol.Veg.1(1):11,1971.Fusariumsolanif.keratitisY.N.Ming&T.F.Yu,Actamicrobiol.sin.12:180,1966.Fusariumsolanif.lupiniWeimer,J.Agric.Res.,Washington68:451,1944.Fusariumsolanif.moriSawada,SpecialPublicationCollegeofAgriculture,NationalTaiwanUniversity8:222,1959.Fusariumsolanif.nicotianaePrasad&Patel,Curr.Sci.21(1):18,1952.Fusariumsolanif.phaseoli(Burkh.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.28:740,1941.Fusariumsolanif.piperisF.C.Albuq.,Bull.Soc.Zool.France5:19,1961.Fusariumsolanif.pisi(F.R.Jones)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.28:740,1941.Fusariumsolanif.radicicola(Wollenw.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.28:740,1941.Fusariumsolanif.robiniaeMatuo&Y.Sakurai,Ann.phytopath.Soc.Japan30:35,1965.Fusariumsolanif.viridiflavumY.N.Ming&T.F.Yu,Actamicrobiol.sin.10:415,1964.Fusariumsolanif.xanthoxyliY.Sakurai&Matuo,Ann.phytopath.Soc.Japan26:117,1961.Fusariumsolanivar.aduncisporum(Weimer&Harter)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata3:no.1035,1930.Fusariumsolanivar.cyanumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:253,1915.Fusariumsolanivar.eumartii(C.W.Carp.)Wollenw.,Z.ParasitKde3:452,1931.Fusariumsolanivar.javanicum(Koord.)Q.M.Ye,ActaAgric.Univ.Zhejiang12(6):380,2000.Fusariumsolanivar.martii(Appel&Wollenw.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata3:no.1034,1930.Fusariumsolanivar.mediumWollenw.,Fusariaautographicadelineata3:no.1032,1930.Fusariumsolanivar.minusWollenw.,DieFusarien:134,1935.Fusariumsolanivar.striatum(Sherb.)Wollenw.,Z.ParasitKde3:451,1931.Fusariumsolanivar.subfuscumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:254,1915.FusariumstriatumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgricultural90 中国农业科学院硕士学位论文附录二ExperimentalStation6:255,1915.Haematonectriahaematococca(Berk.&Broome)Samuels&Rossman,inRossman,Samuels,Rogerson&Lowen,Stud.Mycol.42:135,1999.Haematonectriahaematococca(Berk.&Broome)Samuels&Nirenberg,inRossman,Samuels,Rogerson&Lowen,Stud.Mycol.42:135,1999,var.haematococca.Hypomycescancri(Rutgers)Wollenw.,J.Agric.Res.,Washington2:271,1914.Hypomyceshaematococcus(Berk.&Broome)Wollenw.,Angew.Bot.8:191,1926.Hypomyceshaematococcusvar.breviconusWollenw.,Fusariaautographicadelineata3:no.828,1930.Hypomyceshaematococcusvar.cancri(Rutgers)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata3:no.829,1930.Hypomyceshaematococcus(Berk.&Broome)Wollenw.,Angew.Bot.8:191,1926,var.haematococcus.NectriacancriRutgers,Ann.Jard.Bot.Buitenzorg,suppl.12:59,1913.Nectriacancrif.aurantiiAv.-Saccá,RevtaAgric.,Piracicaba16:150,1941.NectriacancriRutgers,Ann.Jard.Bot.Buitenzorg,suppl.12:59,1913,f.cancri.NectriahaematococcaBerk.&Broome,J.Linn.Soc.,Bot.14(no.74):116,1873.[1875]Nectriahaematococcavar.brevicona(Wollenw.)Gerlach,Fusarium:Diseases,Biology,andTaxonomy(Philadelphia):422,1981.5、尖孢镰孢FusariumoxysporumSchltdl.学名：FusariumoxysporumSchltdl.,Fl.berol.,Berlin2:139,1824.异名：CylindrophoraalbedinisKill.&Maire,Bull.Soc.Hist.nat.Afr.N.21:89-101,1930.Fusariumalbedinis(Kill.&Maire)Malençon,C.r.hebd.Séanc.Acad.Sci.,Paris198:1259-1261,1934.FusariumalbidoviolaceumDasz.[as'albido-violaceum'],Bull.Soc.bot.Genève,2sér.4:293,1912.FusariumangustumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation,n.6:203,1915.FusariumapiiP.E.Nelson&Sherb.,inNelson,Coons&Cochran,Tech.Bull.Mich.Agric.Exp.Sta.155:42,1937.FusariumapiiP.E.Nelson&Sherb.,Tech.Bull.Mich.Agric.Exp.Sta.155:42,1937.var.apiiFusariumapiivar.pallidumP.E.Nelson&Sherb.,inNelson,Coons&Cochran,TechnicalBulletinoftheMichiganAgricultureExperimentStation155:42,1937.Fusariumasclerotium(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata1:no.364,91 中国农业科学院硕士学位论文附录二1916.FusariumasparagiBriard,Revuemycol.,Toulouse12:142,1890.FusariumaurantiacumCorda,inSturm,Deutschl.Fl.,3Abt.(PilzeDeutschl.)2:19,1829.FusariumbatatasWollenw.[as'batatae'],JournalofAgriculturalResearch2:268,1914.FusariumbatatasWollenw.,JournalofAgriculturalResearch2:268,1914,var.batatas.Fusariumbatatasvar.vanillaeTucker[as'batatatis'],JournalofAgriculturalResearch35(12):1121,1927.FusariumblasticolaRostr.[as'blasticolum'],Gartner-Tidende:122,1895.FusariumbulbigenumCooke&Massee,Grevillea16,no.78:49,1887.Fusariumbulbigenumf.aechmeaeSauthoff&Gerlach,Gartenwelt57:389-390,1957.FusariumbulbigenumCooke&Massee,Grevillea16(no.78):49,1887)f.aulbigenum.Fusariumbulbigenumvar.apii,(P.E.Nelson&Sherb.)Raillo,FungioftheGenusFusarium:251,1950.Fusariumbulbigenumvar.batatasWollenw.,Z.ParasitKde3:414,1931.Fusariumbulbigenumvar.blasticola,(Rostr.)Wollenw.,Z.ParasitKde3:412,1931.FusariumbulbigenumCooke&Massee,Grevillea16,no.78:49,1887,var.bulbigenum.Fusariumbulbigenumvar.coffeaeÁlv.García,R.C.Congr.Bot.Palermo29:8,1945.Fusariumbulbigenumvar.cucumisRaillo,FungioftheGenusFusarium:252,1950.Fusariumbulbigenumvar.lycopersici(Sacc.)Wollenw.&Reinking,Fusariaautographicadelineata3:nos996-997,1930.Fusariumbulbigenumvar.nelumbicolaY.Nisik.&KyotoWatan.[as'nelumbicolum'],Ber.OharaInst.Landw.Forsch.Kurashiki10:3,1953.Fusariumbulbigenumvar.niveum(E.F.Sm.)Wollenw.,DieFusarien:117,1931.Fusariumbulbigenumvar.pisi(Linford)Raillo,FungioftheGenusFusarium:250,1950.Fusariumbulbigenumvar.tracheiphilum(E.F.Sm.)Wollenw.,Z.ParasitKde3:413,1931.FusariumcarthamiKlis.&HoustonFusariumcepaeHanzawa,Mykol.Zentbl.5:5,1914.FusariumconglutinansWollenw.,Phytopathology3(1):30,1913.FusariumconglutinansWollenw.,Phytopathology3(1):30,1913,f.conglutinans.92 中国农业科学院硕士学位论文附录二Fusariumconglutinansvar.betaeD.Stewart,Phytopathology19:59,1931.Fusariumconglutinansvar.callistephiBeach,ReportMich.Acad.Sci.29:281-308,1918.Fusariumconglutinansvar.citrinumWollenw.,Z.ParasitKde3:407,1931.FusariumconglutinansWollenw.,Phytopathology3(1):30,1913.var.conglutinans.Fusariumconglutinansvar.majusWollenw.,Fusariaautographicadelineata3:981,1930.FusariumcubenseE.F.Sm.,Science,N.Y.31:754,1910.FusariumcubenseE.F.Sm.,Science,N.Y.31:754,1910.var.cubense.Fusariumcubensevar.inodoratumE.W.Brandes,Phytopathology9:339-389,1919.FusariumcucumerinumBerk.&Broome,Ann.Mag.nat.Hist.,Ser.417:141,1876.FusariumdianthiPrill.&Delacr.,C.r.hebd.Séanc.Acad.Sci.,Paris129:744-745,1899.FusariumeucalyptiCooke&Harkn.,Grevillea9(no.52):128,1881.Fusariumlagenariae(Schwein.)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:724,1886.Fusariumlateritiumf.ciceris(Padwick)Erwin[as'ciceri'],Phytopathology48:500,1958.FusariumliniBolley,ProceedingsoftheAnnualMeetingoftheSocietyforthePromotionofAgriculturalScience22:42,1901.FusariumlutulatumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:209,1915.Fusariumlutulatumvar.zonatumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:214,1915.Fusariumlycopersici(Sacc.)Wollenw.,Phytopathology3,1):29,1913.FusariumlycopersiciSacc.,Michelia2,no.7:296,1881.FusariumlycopersiciBruschi,Mem.Inst.OswaldoCruz21:298,1912.Fusariummerismoidesf.ciceris(Padwick)Subram.[as'ciceri'],Hyphomycetes,NewDelhi):686,1971.FusariumniveumE.F.Sm.,Amer.Assoc.Advanc.Sci.43:289,1894.FusariumorthocerasAppel&Wollenw.,ArbeitenausderBiologischenAbteilungfürLand-undForstwirtschaftamKaiserlichenGesundheitsamte8:152,1910.Fusariumorthocerasvar.albidoviolaceum(Dasz.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata1:no.361,1916.Fusariumorthocerasvar.apii(P.E.Nelson&Sherb.)Wollenw.&Reinking,DieFusarien:112,1935.Fusariumorthocerasvar.betae(D.Stewart)Padwick,IndianJ.agric.Sci.10:282,1940.93 中国农业科学院硕士学位论文附录二Fusariumorthocerasvar.callistephi(Beach)Padwick,IndianJ.agric.Sci.10:283,1940.Fusariumorthocerasvar.cicerisPadwick[as'ciceri'],IndianJ.agric.Sci.10:283,1940.Fusariumorthocerasvar.conglutinans(Wollenw.)Padwick,IndianJ.agric.Sci.10:282,1940.Fusariumorthocerasvar.gladioliL.McCulloch,Phytopathology34:280,1944.Fusariumorthocerasvar.lathyriV.P.Bhide&Uppal,Phytopathology38:565,1948.Fusariumorthocerasvar.lentisVasudeva&Sriniv.,IndianPhytopath.5:28,1953.Fusariumorthocerasvar.longius(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata1:no.363,1916.FusariumorthocerasAppel&Wollenw.,ArbeitenausderBiologischenAbteilungfürLand-undForstwirtschaftamKaiserlichenGesundheitsamte8:152,1910.var.orthoceras.Fusariumorthocerasvar.pisiLinford,Res.Bull.agric.Exp.StnUniv.Wis.85:11,1928.Fusariumorthocerasvar.riciniWollenw.,FloraScotica,edn26:144-148,1940.Fusariumorthocerasvar.triseptatumWollenw.,J.Agric.Res.,Washington2:264,1914.Fusariumoxysporumf.aechmeaeSauthoff,1957.Fusariumoxysporumf.apii(P.E.Nelson&Sherb.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.barbatiW.C.Snyder,Phytopathology31:1056,1941.Fusariumoxysporumf.batatas(Wollenw.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.betae(D.Stewart)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.callistephi(Beach)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.cassiaeG.M.Armstr.&J.K.Armstr.,1966.Fusariumoxysporumf.cepae(Hanzawa)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.cicerisMatuo&K.Satô,Trans.Mycol.Soc.Japan3:125,1962.Fusariumoxysporumf.conglutinans(Wollenw.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.cubense(E.F.Sm.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.94 中国农业科学院硕士学位论文附录二27:66,1940.Fusariumoxysporumf.cucumerinumJ.H.Owen,Phytopathology46:156,1956.Fusariumoxysporumf.cyclaminisGerlach,Phytopath.Z.22:141,1954.Fusariumoxysporumf.delphiniiLaskaris,Phytopathology34:916,1949.Fusariumoxysporumf.dianthi(Prill.&Delacr.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.eucalypti(Cooke&Harkn.)Arya&G.L.Jain,Phytopathology52:641,1962.Fusariumoxysporumf.fabaeT.F.Yu&C.T.Fang,Phytopathology38:590,1948.Fusariumoxysporumf.gladioli(Massey)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.gladioliToovey,AnnualReportoftheAgric.Department,Nigeria:56,1949.Fusariumoxysporumf.hebesR.D.Raabe[as'hebae'],Phytopathology47,9):532,1957.Fusariumoxysporumf.hyalinaBrunaud,Act.Soc.linn.Bordeaux44(4):259,1890.Fusariumoxysporumf.lini(Bolley)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.lupiniW.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.lycopersici(Sacc.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.matthioliK.F.Baker,Phytopathology38:402,1948.Fusariumoxysporumf.medicaginis(Weimer)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.melongenaeMatus&K.Ishig.,Ann.phytopath.Soc.Japan23:192,1958.Fusariumoxysporumf.melonisW.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.narcissiW.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.nicotianae(J.Johnson)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.niveum(E.F.Sm.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.FusariumoxysporumSchltdl.,Fl.berol.(Berlin)2:139,1824,f.oxysporum.Fusariumoxysporumf.passifloraeW.L.Gordon,inPurss,QueenslandJ.agric.Anim.Sci.11:79,1954.95 中国农业科学院硕士学位论文附录二Fusariumoxysporumf.perniciosum(Hepting)Toole,Phytopathology31:599,1941.Fusariumoxysporumf.phaseoliJ.B.Kendr.&W.C.Snyder,Phytopathology32:1013,1942.Fusariumoxysporumf.pini(Hartig)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.pisi(Linford)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.psidiiPrasad,P.R.Mehta&Lal,Nature,Lond.169:754,1952.Fusariumoxysporumf.radicis-lupiniWeimer,J.Agric.Res.,Washington68:448,1944.Fusariumoxysporumf.raphaniJ.B.Kendr.&W.C.Snyder,Phytopathology32:1033,1942.Fusariumoxysporumf.rhoisW.C.Snyder&Hepting,J.Agric.Res.,Washington78:374,1949.Fusariumoxysporumf.spinaciae(Sherb.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.tabernaemontanaeA.Pande&V.G.Rao,Biovigyanam16(1):58,1990.Fusariumoxysporumf.tracheiphilum(E.F.Sm.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.tuberosiW.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.udum(E.J.Butler)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumf.vasinfectum(G.F.Atk.)W.C.Snyder&H.N.Hansen,Am.J.Bot.27:66,1940.Fusariumoxysporumsubsp.lycopersiciSacc.,Syll.fung.(Abellini)4:705,1886.FusariumoxysporumSchltdl.,Fl.berol.(Berlin)2:139,1824,subsp.oxysporum.Fusariumoxysporumvar.albedinis(Kill.&Maire)Malençon,RevueMycol.,Paris15(suppl.colon.):45-60,1950.Fusariumoxysporumvar.asclerotiumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:222,1915.Fusariumoxysporumvar.aurantiacum(Corda)Rabenh.,Deutschl.Krypt.-Fl.,Leipzig1:51,1844.Fusariumoxysporumvar.callistephiRaillo,FungioftheGenusFusarium:253,1950.Fusariumoxysporumvar.cepae(Hanzawa)Raillo,FungioftheGenusFusarium:96 中国农业科学院硕士学位论文附录二253,1950.Fusariumoxysporumvar.cubense(E.F.Sm.)Wollenw.,DieFusarien:119,1935.Fusariumoxysporumvar.curcurbitacearumRabenh.Fusariumoxysporumvar.dianthi(Prill.&Delacr.)Raillo,FungioftheGenusFusarium:255,1950.Fusariumoxysporumvar.gladioliMassey,Phytopathology16:511,1926.Fusariumoxysporumvar.herbemontisTochetto,Revtaagron.,PortoAlegre17:82-89,1954.Fusariumoxysporumvar.lathyriV.P.Bhide&Uppal,Phytopathology38:560-567,1948.Fusariumoxysporumvar.longiusSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:223,1915.Fusariumoxysporumvar.lycopersiciSacc.,Syll.fung.,Abellini4:705,1886.Fusariumoxysporumvar.medicaginisWeimer,JournalofAgriculturalResearch37:425,1928.Fusariumoxysporumvar.meniscoideumBugnic.,Encyclop.Mycol.11:111,1939.Fusariumoxysporumvar.nicotianaeJ.Johnson,J.Agric.Res.,Washington20:515-535,1921.Fusariumoxysporumvar.nicotianaeSherb.Fusariumoxysporumvar.opuntiarumPettinari,AnnaliSper.agr.,N.S.5:1419,1951.Fusariumoxysporumvar.orthoceras(Appel&Wollenw.)Bilaĭ,Mikrobiol.Zh.49,6:7,1987.FusariumoxysporumSchltdl.,Fl.berol.(Berlin)2:139,1824,var.oxysporum.Fusariumoxysporumvar.pisi(C.J.J.Hall)Raillo,FungioftheGenusFusarium:254,1950.Fusariumoxysporumvar.resupinatumSherb.,MemoirsoftheCornellUniversityAgriculturalExperimentalStation6:226,1915.Fusariumoxysporumvar.solaniRaillo,FungioftheGenusFusarium:254,1950.Fusariumoxysporumvar.trifolii(Jacz.)Raillo[as'trifoli'],FungioftheGenusFusarium:255,1950.FusariumperniciosumHepting,Circular.U.S.Dept.Agric.535:7,1939.Fusariumredolensf.spinaciae(Sherb.)Subram.,Hyphomycetes(NewDelhi):690,1971.FusariumspinaciaeSherb.,Phytopathology13:205-209,1923.FusariumtracheiphilumE.F.Sm.,1899.FusariumtrifoliiJacz.,1912.FusariumvasinfectumG.F.Atk.,Bull.AlabamaAgriculturalExperimentStation41:97 中国农业科学院硕士学位论文附录二28,1892.FusariumvasinfectumG.F.Atk.,Bull.AlabamaAgriculturalExperimentStation41:28,1892.f.vasinfectum.Fusariumvasinfectumvar.crotalariaeKulk.,IndianJ.agric.Sci.4:994,1934.Fusariumvasinfectumvar.egyptiacumFahmy[as'aegyptiacum'],Phytopathology17:749-767,1927.Fusariumvasinfectumvar.inodoratumWollenw.,Phytopathology3(1):29,1913.Fusariumvasinfectumvar.lutulatum(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata3:1019,1930.Fusariumvasinfectumvar.perniciosum(Hepting)Carrera,Monatsh.Landw.13,3:483,1955.Fusariumvasinfectumvar.pisiC.J.J.Hall,Ber.dt.bot.Ges.21:2-5,1903.Fusariumvasinfectumvar.sesamiZaprom.,Pflanzenschutz-Vers.Sta.Taschkent:1-36,1926.FusariumvasinfectumG.F.Atk.,Bull.AlabamaAgriculturalExperimentStation41:28,1892,var.vasinfectum.Fusariumvasinfectumvar.zonatum(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata3:1020,1930.Fusariumzonatum(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata1:no.392,1916.Fusariumzonatum(Sherb.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineata1:no.392,1916.f.zonatum.FusidiumudumE.J.Butler,MemoirsoftheDept.Agric.India,Bot.Ser.2(9):35,1910.FusisporiumlagenariaeSchwein.,Trans.Am.phil.Soc.,NewSeries4(2):275,1832.Fusomablasticola,Rostr.Sacc.&Traverso,Syll.fung.(Abellini)20:1241,1911.FusomapiniR.Hartig.LehrbuchderPflanzenkrankheiten,FürBotaniker,Forstleute,LandwirtheundGärtner(Berlin):116,1900.6、层出镰孢Fusariumproliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg.学名：Fusariumproliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg,Mitt.biol.BundAust.Land.-u.Forstw.169:38,1982.基原异名：CephalosporiumproliferatumMatsush.,MicrofungioftheSolomonIslandsandPapua-NewGuinea(Osaka):11,1971.异名：Fusariumproliferatum(Matsush.)Nirenberg,Mitt.biol.BundAust.Land.-u.Forstw.169:38,1976.Fusariumproliferatumvar.minusNirenberg,Mitt.biol.BundAust.Land.-u.Forstw.98 中国农业科学院硕士学位论文附录二169:43,1976.Fusariumproliferatum(Matsush.)NirenbergexGerlach&Nirenberg,Mitt.biol.BundAust.Land.-u.Forstw.169:38,1982,var.proliferatum.7、三线镰孢Fusariumtricinctum(Corda)Sacc.学名：Fusariumtricinctum(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:700,1886.基原异名：SelenosporiumtricinctumCorda,Icon.fung.(Prague)2:7,Fig..33,1838.异名：FusariumcitriformeJamal.,Valt.Maatalousk.Julk.123:11,1943.Fusariumsporotrichiellavar.tricinctum(Corda)Bilaĭ,Mikrobiol.Zh.49(6):7,1987.Fusariumsporotrichiellavar.tricinctum(Corda)Bilaĭ,Yadovityegribynazernekhlebnykhzlakov(Poisonousfungioncerealseed),Kiev:87,1953.Fusariumsporotrichioidesvar.tricinctum(Corda)Raillo,FungioftheGenusFusarium:197,1950.Fusariumtricinctum(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:700,1886,f.tricinctum.Fusariumtricinctum(Corda)Sacc.,Syll.fung.(Abellini)4:700,1886,var.tricinctum.有性型：GibberellatricinctaEl-Gholl,McRitchie,Schoult.&Ridings,Can.J.Bot.56(18):2206,1978.8、锐顶镰孢FusariumacuminatumEllis&Everh.学名：FusariumacuminatumEllis&Everh.,Proc.Acad.nat.Sci.Philad.47:441,1895.异名：FusariumacuminatumEllis&Everh.,Proc.Acad.nat.Sci.Philad.47:441,1895,subsp.acuminatum.FusariumcaudatumWollenw.,J.Agric.Res.,Washington2:262,1914.Fusariumequisetivar.caudatum(Wollenw.)Joffe,Mycopath.Mycol.appl.53(1-4):220,1974.Fusariumgibbosumvar.acuminatum(Ellis&Everh.)Bilaĭ,Mikrobiol.Zh.49(6):6,1987.FusariumscirpiLambotte&Fautrey,Revuemycol.,Toulouse16(no.63):111,1894.FusariumscirpiLambotte&Fautrey,Revuemycol.,Toulouse16(no.63):111,1894,f.scirpi.Fusariumscirpisubsp.Acuminatum(Ellis&Everh.)Raillo,FungioftheGenusFusarium:177,1950.FusariumscirpiLambotte&Fautrey,Revuemycol.,Toulouse16(no.63):111,1894,subsp.scirpi.Fusariumscirpivar.acuminatum(Ellis&Everh.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineate3:nos930-933,1930.99 中国农业科学院硕士学位论文附录二Fusariumscirpivar.caudatum(Wollenw.)Wollenw.,Fusariaautographicadelineate3:934,935,1930.Fusariumscirpivar.commaWollenw.,Fusariaautographicadelineate3:922,1930.Fusariumscirpivar.copactumWollenw.,1931.Fusariumscirpivar.nigrantumF.T.Benn.,Ann.appl.Biol.19:21-26,1932.Fusariumscirpivar.pallensF.T.Benn.,Ann.appl.Biol.19:21-26,1932.FusariumscirpiLambotte&Fautrey,Revuemycol.,Toulouse16(no.63):111,1894,var.scirpi.GibberellaacuminateC.Booth,TheGenusFusarium:161,1971.Microceraacuminate(Ellis&Everh.)Höhn.,Sber.Akad.Wiss.Wien,Math.-naturw.Kl.,Abt.1128:729,1919.有性型：GibberellaacuminateWollenw.,Centbl.Bakt.ParasitKde,Abt.II106:190,1943.9、尖孢刺盘孢ColletotrichumacutatumJ.H.Simmonds学名：ColletotrichumacutatumJ.H.Simmonds,QueenslandJ.agric.Anim.Sci.25:178A,1968.异名：ColletotrichumacutatumJ.H.Simmonds,QueenslandJ.agric.Anim.Sci.22:458,1965.ColletotrichumacutatumJ.H.Simmonds,QueenslandJ.agric.Anim.Sci.25:178A,1968,f.acutatum.Colletotrichumacutatumf.pineumArx,Gen.FungiSporul.Cult.,Edn3(Vaduz):222,1981.ColletotrichumacutatumJ.H.Simmonds,QueenslandJ.agric.Anim.Sci.25:178A,1968,var.acutatum.GlomerellaacutataGuerber&J.C.Correll,Mycologia93(1):225,2001.GlomerellaacutataGuerber&J.C.Correll,Mycologia93(1):225,2001,var.acutata.10、露湿漆斑菌MyrotheciumroridumTode学名：MyrotheciumroridumTode,Fung.mecklenb.sel.(Lüneburg)1:25,1790.异名：Dacrydiumroridum(Tode)Link,Mag.Gesell.naturf.Freunde,Berlin3(1-2):42,1809.有性型：Paramyrotheciumroridum(Tode)L.Lombard&Crous,inLombard,Houbraken,Decock,Samson,Meijer,Réblová,Groenewald&Crous,Persoonia36:211,2016.100 中国农业科学院硕士学位论文致谢致谢本论文是在李宝聚研究员的悉心指导和关怀下完成的。三年来，李老师以平易近人的风格、乐观向上的生活态度和严谨的治学态度为我树立了榜样。从论文选题、试验方案及论文的撰写和修改无不充满了导师给予的指导和帮助。在中国农业科学院3年多的学习当中，李老师不仅为我提供了实践的机会，让我有机会将学习到的理论知识在实践中沉淀和吸收，同时也让我学会了在工作和学习中认真的学习态度，严谨的科研精神。李老师治学严谨，思维缜密，知识渊博，这所有的一切都在潜移默化的感染着我，他的孜孜教诲已经成为我人生中不可多得的财富，对我以后的学习和生活有着极大的帮助。值此论文完成之际，向这3年来对我学术上要求严格、对我生活上悉心照顾的导师表示最衷心的感谢和崇高的敬意。特别感谢中国科学院微生物研究所的郭英兰研究员，郭老师在真菌分类知识和病原菌鉴定方面给予了悉心的指导，让我在理论知识和试验上都有了很大的提高，不仅在镰孢菌鉴定上给予莫大的帮助，郭老师严谨的科研作风和亲和的处事态度给我们树立了很好的榜样。感谢在试验的设计、内容的完成及论文撰写过程中给予帮助和指导的课题组的石延霞老师，谢学文老师及柴阿丽老师。感谢三年来对我的无私帮助和有益指导，在此，向四位老师致以最真诚的感谢！本研究得到“大宗蔬莱产业技术体系”设施蔬菜防控岗位（CARS-25），现代农业产业技术体系北京叶类蔬菜产业创新团队建设专项资金（BAIC07-2017）以及国家重点研发计划项目：“设施蔬菜化肥农药减施增效技术集成研究与示范”（2016YFD0201000）的资助。在研究过程中，得到菜病综防课题组的同学们的帮助和支持，感谢博士研究生孟祥龙、武军、朱发娣、袁丽芳，感谢郭梦妍、王莹莹、赵倩、郭现坤、晋知文、裴龙飞、贾令朋、吴兰萍、曹金强等师兄师姐的帮助，感谢宋加伟、郭润婷、张晓慧、闫文雪、王立雪、陈利达、郭威涛、揣红运、李静、夏淑杨等师弟师妹给予的关心和帮助。在此，向所有帮助过我的同学表示感谢！特别感谢我的父母及亲朋好友，是他们的理解、支持和鼓励使我在人生道路上不断的前进。感谢我的爱人田佳。感谢所有培养教育我的全体老师。感谢各位专家、教授在百忙之中评审本文。李盼亮2017年5月101 中国农业科学院硕士学位论文作者简介作者简介个人情况姓名：李盼亮性别：男民族：汉出生年月：1992.08.07籍贯：河北省藁城市专业：植物病理学政治面貌：中国共产党党员教育背景2014年9月-2017年6月中国农业科学院蔬菜花卉研究所2010年9月-2014年6月河北农业大学植物保护学院硕士期间获得荣誉2016年研究生院“优秀中国共产党党员”2015年研究生院“社会活动优秀奖”2014年-2016年“二等奖”学业奖学金三次硕士期间撰写和发表的文章1.Pan-LiangLi,Yan-XiaShi,Meng-YanGuo,Xue-WenXie,A-LiChai,Bao-JuLi*.FusariumwiltofcauliflowercausedbyFusariumequisetiinChina.CanadianJournalofPlantPathology,2017,39(1):77-82.2.Pan-LiangLi,A-LiChai,Yan-XiaShi,Xue-WenXie,Bao-JuLi*.FirstReportofRootRotCausedbyPlectosphaerellacucumerinaonCabbageinChina.Mycobiology,2017.(已接收,2017-5-3)3.Zhen-DongChen1,Pan-LiangLi1,A-LiChai,Wei-TaoGuo,Yan-XiaShi,Xue-WenXie,Bao-JuLi*.CrowncankercausedbyMyrotheciumroridumongreenhousemuskmelon(Cucumismelo)inChina.CropProtection,2017.(underreview)4.B.J.Li,P.L.Li,J.Li,A.L.Chai,Y.X.Shi,X.W.Xie.FirstReportofFusariumRootRotofSolanummelongenaCausedbyFusariumsolaniinChina.PlantDisaese,2017.(underreview)5.李盼亮,谢学文,王文桥,李宝聚*.由尖孢镰刀菌引起的西瓜苗期叶腐病的诊断与防治.中国蔬菜,2016,(8):83-84.6.李盼亮,谢学文,石延霞,李宝聚*.注意防治西北地区基质栽培蔬菜枯萎病.中国蔬菜,2016,(5):85-87.102 中国农业科学院硕士学位论文作者简介7.李盼亮,张自心,谢学文,柴阿丽,石延霞,李宝聚*.电生功能水对南瓜贮藏期果腐病的防效试验.长江蔬菜,2016,16:81-83.8.张自心,李盼亮,王莹莹,傅俊范,李宝聚*.由多主棒孢引起的黄瓜茎腐病的诊断与防治.中国蔬菜,2015,(10):82-84.9.陈振东,宋焕忠,秦健,李宝聚*,李盼亮.苦瓜枯萎病的发生与防治.中国蔬菜,2016,(7):87-89.103
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