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分类号：学校代号：密级：学号：紅而采囔犬謦碛士摩位伦夂江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化申请人徐小国指导教师何后军教授校外指导教师叶俟华研究员学位种类普医硕士专业领域所在院(所动物科学技术学院论文提交日期年月 独创性声明本人声明,所呈交的学位论文,是在指导教师指导下,通过我的努力取得的成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果,也不包含在江西农业大学或其它教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名日期论文使用授权的说明本人完全了解江西农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即学校有权送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密,在—年后解密可适用本授权书。口不保秘,本学位论文属于不保密。请在方框内打“十’学位论文作者亲笔签名指导教师亲笔签名 目录目录第一章文献综述断鮮餽灌肝■餓■浦好職髓細她剖检变化组织病变錢職灭活疫苗号轉、活基因工程缺失疫苗亚单位疫苗麵棘载体重组疫苗猪伪狂犬病检测方法中和试验酶联免疫吸附试验免疫荧光试验聚合酶链反应(国内外猪伪狂犬病净化现状伪狂犬病根除计划必要条件国外现状美国猪伪狂犬病净化荷兰猪伪狂犬病净化英国猪伪狂犬病净化 9.2.4法国猪伪狂犬病净化国内猪伪狂犬病净化第二章种猪场猪伪狂犬病野毒感染血清学调查材料和方法调查猪场待检血清检测试剂主要器材检测步骤结果判定觀分析与讨论第三章种猪场猪伪狂犬病净化净化种猪场猪伪狂犬疫苗检测试剂和主要仪器主要器材检测方法净化方案免疫方案监测方案生物安全防控措施方案结果与分析净化检测结果与分析第一次净化检测结果第二次净化检测结果第三次净化检测结果第四次净化检测结果报第四章全文结论参考文献作者简介 摘要摘要当前,猪伪狂犬病是影响我国生猪产业可持续发展的主要疫病之一,给生猪产业造成了巨大的经济损失,我省部分猪场猪伪狂犬病危害也不容忽视,很有必要从源头控制猪伪狂犬病,对种猪场实施猪伪狂犬病净化可有效从源头控制种猪野毒感染,以致扩散病毒。本文借鉴国内外猪伪狂犬病净化根除计划的成功经验,结合我省实际,釆取“免疫—监测—淘汰”的技术路线,对全省种猪场实施猪伪狂犬病净化工作。利用—检测方法对种规模化猪场的种猪群、仔猪群进行伪狂犬病鉴别监测,对阳性猪只进行淘汰。年,在全省家种规模化猪场开展了伪狂犬病野毒感染情况调查,调查结果显示,我省规模化种猪场幵展伪狂犬病净化工作是可行的。—年,本论文选择了家种猪场进行伪狂犬病净化试验。研究结果发现：、、、和种猪场通过一系列控制和净化措施的实施,种猪群伪狂犬病野毒感染率明显下降,如种猪场通过对种猪群实施猪伪狂犬病净化,种猪群猪伪狂犬病阳性率由降到,种猪群猪伪狂犬病基本达到净化目标,其它个种猪场种猪群伪狂犬病野基本达到了净化。通过对家种猪场净化效果可知,种猪群伪狂犬病野毒感染阳性率在以内的种猪场幵展伪狂犬病净化效果明显。关键词：猪伪狂犬病；规模化猪场；净化 AbstractABSTRACTCurrent,swinepseudorabiessustainabledevelopmentofChina'spigindustryoneofthemainepidemic,provincepartoftheporcinepseudorabieshazardscannotbeignored,itisnecessarytoimplementationofthepigfarmfromthesourceoftheswinepseudorabies,swinepseudorabiespurificationfromthesourcecontrolviralinfectioninpigswild,resultinginproliferationofthevirus.Thepurificationprogramtoeradicatepseudorabiesfromabroadsuccessoftheprogramexperience,combinedwithourprovince,totake"immunity-monitoring-outof*thetechnicalline,theprovince'spigfarmontheimplementationofpseudorabiespurificationwork,gpl一,,,,,, 第一章文献综述第一章文献综述猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(引起的一种急性传染病⑴。临床症状主要表现为发热、下痢、呕吐、呼吸困难以及神经症状,母猪流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍〗,。同时伪狂犬病毒(也是引起猪呼吸系统疫病综合征的重要原发性病原之一伪狂犬病除能引起猪、牛、绵羊、犬和猫等家畜动物的感染,同时多种野生动物也易感。依据动物疫病对养殖业和人体危害健康程度,我国将猪伪狂犬病列为二类动物疫病。病原学伪狂犬病(,又名奥耶斯基氏病(’、传染性延髓麻療和奇痒病。年首先在美国发现,年博士证实该病由病毒引起。年和确定该病病原为抱疫病毒。伪狂犬病病毒(属于疱疫病毒科,甲型疱疫病毒亚科,水疱病毒属,猪疱瘆病毒型。伪狂犬病病毒(基因组为线状双链,大小约,含量高达。病毒粒子呈椭圆或圆形,二十面体立体对称,直径约—。有囊膜和纤突,纤突长。伪狂犬病病毒(基因组由个阅读框组成,可编码种蛋白。现已发现伪狂犬病病毒种糖蛋白,根据抱疫病毒糖蛋白的命名法统一命名为,,,,,,,,和’。在病毒与宿主的相互作用中,病毒的糖蛋白起着重要作用。此外,胸苷激酶、核苷酸还原酶、蛋白激酶、碱性核酸外切酶和脱氧尿苷三碟酸激酶’等几种酶也与病毒的毒力密切相关,其中是最主要的毒力基因。伪狂犬病病毒(对外界环境的抵抗力较强,在物体表面和液体中可存活天,在为时保持稳定。一般消毒药对猪伪狂犬病病毒均有效,对乙醚等脂溶剂、紫外线和甲酸都很敏感【。该病毒在外界抵抗力较强,在猪场内的外环境可存活个月,在肉中可存活天以上。在干燥条件下,特别是在阳光直射下,病毒很快失活。伪狂犬病病毒(只有一种血清型,但毒株间在毒力、致病性性等方面存在差异。在设定的不同温度下,猪伪狂犬病病毒能与小鼠红细胞发生凝集反应,但与 江西省规模化种猪场种诸伪狂犬病净化膝鼠、猪、家禽等动物红细胞不发生凝集反应,猪血清中的抗体与中和抗体效价呈显著的相关性。该病毒具有泛嗜性,能在多种组织培养细胞内增殖,如猪、兔肾细胞、牛睾丸细胞、羊膜细胞、猴的细胞和仓鼠的细胞等传代细胞上增殖,但以兔肾和猪肾细胞最为敏感。流行病学伪狂犬病(流行范围广,呈世界分布。世纪年代左右,猪伪狂犬病在东欧等国家广泛流行,但猪群感染该病毒后临床症状表现温和,未导致母猪群大量流产以及仔猪群大量死亡现象,给生猪产业未造成巨大经济损失。然而在世纪—年代,由于强毒株的出现,猪场爆发此病的数量显著增加,症状明显加剧,而各种日龄的猪均可感染。日本、韩国、英国、美国、法国、越南、泰国等发达及发展中国家都有猪伪狂犬病发病报道,国内在年首次有猪伪狂犬病发病报道,截至年,据不完全统计,伪狂犬病已在我国北京、上海、广西、江西、湖北、湖南、安徽、香港和台湾在内的个省、市(区)发生和流行。猪伪狂犬病发生一般无明显季节性,但以冬、春季节发病较多。当前以散发为主,个别猪场因免疫、防疫等控制手段不到位可爆发流行。猪是伪狂犬病病毒(的主要主,除各种日龄的猪都易感染外,在自然条件下,可引起牛、羊等家畜和野生动物发病。现已证实猪、牛、羊、狗、兔、狐狸、猫、大鼠等种动物可被感染。人类对该病具有抵抗性。该病重要传染源为带毒猪、病猪以及带毒鼠类,康复猪和隐性感染猪可带毒排毒。传播方式主要为垂直传播和水平传播。伪狂犬病病毒(垂直传播对胎儿是致命的,该病毒也可以通过空气传播,感染健康猪群。被污染的饲料、乳汁、饮水、生产器械等被猪只误食,病毒可经消化道感染健康猪只。本病还可经呼吸道粘膜、破损的皮肤和配种等发生感染。妊娠母猪感染本病可经胎盘侵害胎儿；成年猪感染后多耐过,不发病呈隐性感染,长期带毒排毒；公猪精液也是一种带毒排毒媒介。发病机理生猪自然感染情况下,猪伪狂犬病病毒通过鼻道与口腔进行传播。之后便在扁桃体、咽點膜增殖,再通过喚神经、三叉神经和吞咽神经的神经鞘淋巴到达脊髓和脑。病毒亦可由鼻耳咽點膜经呼吸道侵入肺泡。血液中病毒呈间歇性出现,滴度低,难于测出,但病毒可经血液到达全身各部位。病畜在病毒血症之后,呈现各种不同程度的 第一章文献综述神经综合征,主要表现为皮肤的感觉过敏特别是牛和羊,发生不可耐受的发痒。脑脊髓发炎后,可引起神经特别是舌、咽神经的麻搏。如病程较长,还可能继发呼吸、消化器官的病变。风险因子根据国内外专家学者的研究,影响猪伪狂犬病流行风险因子有很多,了解猪伪狂犬病流行相关的危险因素,有利于提出切合实际的猪伪狂犬病防控措施,制订一套详实的猪伪狂犬病净化计划。影响猪伪狂犬病流行的主要风险因子有：猪群饲养密度,种猪的‘来源,免疫接种,是否开展了监测一淘汰制度,词舍类型；种猪群中有肥育猪出现,及肥育猪的数量等。临床症状潜伏期天,短者小时,长者达天。临床症状主要表现为呼吸道和神经症状,其严重程度随年龄增长有很大差异’。哺乳仔猪曰龄以内哺乳仔猪临床症状主要表现为发热、下痢、呕吐、厌食、眼球上翻、精神不振以及神经症状。日龄左右仔猪临床症状主要表现为体温升高、呼吸困难、食欲不振、被毛粗乱等,病死率可达。病程天,最长天左右,发病以后表现为耳朵、腹下、后躯等部位有紫斑日龄以内仔猪发病率和死亡率常高达,断奶仔猪病死率〗。架子猪日龄以上的架子猪临床症状主要表现为便秘、咳嗽,一般恢复。部分病猪也会出现共济失调、振颤以及神经症状等。母猪后备母猪无明显临床症状；空怀母猪主要为返情、屡配不孕或不发情；怀等母猪临床症状主要为流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等。种公猪睾丸肿胀或萎缩,精液品质下降,种用功能降低或丧失。病理变化剖检变化 江西省规模化种猪场种诸伪狂犬病净化感染发病生猪无特征性病变,可见临床解剖症状为肾状针尖状出现。临床上若发生神经症状时,解剖症状肉眼可见脑膜充血,脑脊髓液增多,肺充血、水肿,实质脏器有灰白色坏死病灶。若发生母猪流产时,临床解剖肉眼可见流产胎儿脑出血点、皮肤出血点,肝、脾出现坏死灶。组织病变中枢神经系统弥漫性非化脓性脑膜炎,肺泡隔核小叶质增宽,淋巴和单核细胞浸润,淋巴结和脾的淋巴细胞内有核包涵体。疫苗研究‘灭活疫苗灭活疫苗主要优点体现为安全性高、不易散毒以及潜伏感染等问题。灭活疫苗是将野毒株用、、等细胞进行细胞培养,用灭活剂处理后加入佐剂制成灭活疫苗。但灭活疫苗不能将内源性蛋白抗原提呈给免疫系统,因而不能诱导细胞毒细胞反应(因此灭活疫苗的免疫效果一般较差。弱毒活苗弱毒活苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞或适应鸡胚,反复传代而获得的疫苗。目前使用最多的是株、布加勒斯特株和株,其中目前应用较为广泛。株是年由匈牙利学者分离,经过鸡胚细胞传代致弱的一个疫苗株。株是将株通过鸡胚成纤维细胞继代培养代以上获得的疫苗株。基因工程缺失疫苗伪狂犬病毒(基因缺失主要包括对与毒力相关的基因如、、等基因的缺失以降低病毒毒力,对糖蛋白如、、等基因的缺失以引入选择标记或阻止感染性病毒的产生。等于年利用株,通过缺失片断中的基因启动子上游的部分重复序列和基因序列的构建出缺失疫苗株。亚单位疫苗亚单位疫苗是病毒的结构蛋白,据目前发现的糖蛋白中的、、均能使机体产生中和抗体,这些抗体无论是在体内、体外,还是在有无补体存在的情况下都 第一章文献综述有中和的能力。等用非离子去污剂处理病毒粒子和感染细胞得到蛋白,将此蛋白配以不完全弗氏佐剂免疫猪,可使猪免疫致死量的攻击。核酸疫苗目前已构建了、基因的表达载体,其在真核细胞中得到了很好的表达,并用其注射动物进行免疫,初步结果表明,这些表达质粒均可激发出高水平的抗体。等用含、、基因的疫苗免疫猪,含基因的疫苗能诱导最强的细胞介导免疫应答,包括细胞毒性细胞应答；而含基因的疫苗却能诱导最强的中和抗体应答。载体重组疫苗等把基因置于启动子控制下,将其整合于基因缺失突变株的位点,构建了表达的、双基因缺失重组病毒。等将牛抱瘆病毒型和基因整合于、双缺失突变株的位点进行表达,研究发现：、双基因缺失的病毒丧失的毒力因和基因的整合而恢复。猪伪狂犬病检测方法中和试验微量血清中和试验或血清中和试验(,作为病毒检测的金标准,是世界上多数国家检测的法定方法之一。中和试验存在特异性强、敏感弱等优点或缺点,若能增加抗原与血清反应时间,可存进其敏感性提高。酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(具有快速、简便的优点,将其作为诊断猪伪狂犬病的首选血清学方法美国也将作为种的法定检测方法之一。等(首次创建了采用方法检测抗体。鉴别疫苗毒株和自然感染野毒方法可分为、和。目前,由于敏感性高,经济价值优势明显,国内猪场开展猪伪狂犬病实施净化检测,大多采用检测方法。方法敏感性高、特异性强,而且简便、快速、重复性好,适于大量样品的检测,是目前最好的鉴别诊断方法免疫突光试验 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化目前,猪伪狂犬病免疫突光试验是用来诊断、监测该病常用方法之一,具有快速、简便等优点,可对样品进行大批量进行检测。根据对不同病料检测结果统计,检出率最高为扁桃体、淋巴结,其次是大脑、脾和脊髓。聚合酶链反应(等率先建立了检测的方法。该方法可从发病动物脏器组织、分泌物种扩增的基因,从而对猪伪狂犬病进行确诊。检测方法存在快速、特异性强、敏感性高等优点,并能进行大批量样品的检测,同时还可对净化猪场猪群进行活体检测,比较好的适用于临诊诊断。‘国内外猪伪狂犬病净化现状伪狂犬病根除计划必要条件伪狂犬病病毒根除计划的必要条件由两个因素组成,一是要有基因缺失疫苗；二是要有鉴别诊断的血清学检测方法；两个因素缺一不可,两个相互配合,伪狂犬病根除计划方可实施。当前国内外根除伪狂犬病基本步骤为：一是对母猪群、育肥猪群进行基因缺失灭活苗免疫,以降低或控制猪群病毒数量和猪群发病；二是根据血清学鉴定诊断结果,对感染猪只进行淘汰,同时对发病猪群进行强制扑杀；三是控制猪群野毒感染,建立健康猪群,逐步达到根除及净化目的。国外现状世纪年代左右,美国、欧盟等发达国家陆续制定和启动了猪伪狂犬病的控制和根除计划,部分国家已取得了非常了的成效。目前猪伪狂犬病净化成功的国家有美国、英国、荷兰等国家。美国猪伪狂犬病净化美国自年幵始实施猪伪狂犬病进行根除计划,整个计划共分为五个部分,第一部分为先期准备阶段。制定猪伪狂犬病根除计划和工作部署；第二部分为猪伪狂犬病普查阶段。了解全国猪伪狂犬病野毒感染情况。第三部分为处理阶段。对阳性感染猪只进行强制扑灭,感染率控制在以下。第四部分为监控阶段,对猪场进行严密监控,保证年内不出现新的感染猪群。第五部分为建立未免疫无猪伪狂犬病阶段。年美国通过该项计划成功在猪场根除了猪伪狂犬病。荷兰猪伪狂犬病净化 第一章文献综述荷兰于年开始了实施伪狂犬的国家清除计划。该项计划分为六个阶段实施。①第一阶段为猪场净化。制定严格的免疫、监测、淘汰净化计划并组织实施；②第二阶段为地区净化。区域免疫,限制猪只流动,；③第三阶段为全国范围内净化；④第四阶段为巩固阶段。对种猪、仔猪、育肥猪进行猪伪狂犬病疫苗强制免疫,并在全国开展伪狂犬病血清学监测,母猪野毒感染阳性率低于后进入下一阶段；⑤第五阶段为持续免疫阶段。继续第四阶段计划,在全国范围内对种猪、仔猪、育肥猪进行猪伪狂犬病疫苗强制免疫,同时开展血清监测,对阳性猪及时淘汰；⑥第六阶段为无伪狂犬病阶段,对阴性猪场开展定期持续监测,评价猪场伪狂犬病净化成效。对持续监测阴性猪场,将停止免疫程序。英国猪伪狂犬病净化英国于年猪伪狂犬病根除计划可分为两个阶段。第一阶段主要幵展伪狂犬病野毒感染抗体血清学调查,掌握猪场猪伪狂犬病阳性感染情况,确定阳性感染猪场；第二阶段为在全国范围内开展猪伪狂犬病根除计划,重点对母猪群和公猪群实施监测,发现阳性猪进行扑杀。现己宣布在全国范围内消灭了伪狂犬病。法国猪伪狂犬病净化法国于年实施猪伪狂犬病根除计划,该计划与英国猪伪狂犬病根除计划有些类似,共同点在于在全国范围内实施猪伪狂犬病根除计划时,首先开展猪伪狂犬病野毒感染抗体血清学调査,已确定伪狂犬病的分布和感染率,其后在实施以监测一扑杀为主的猪伪狂犬病根除计划,不同点在于法国根据不同地区感染率的高低采取不同的根除方案,感染率低的地区采取不免疫扑杀方案,感染率高的地区采取免疫一监测一扑杀的根除方案。实施根除计划后,年法国猪伪狂犬病野毒感染血清学阳性率由年的降至。国内猪伪狂犬病净化我国猪伪狂犬病净化,与发达国家相比,起步较晚,在全国范围内还未进行猪伪狂犬病净化计划,但不少科研院校、养殖企业对伪狂犬病净化做了一些研究和探讨,并在部分猪场成功清除了猪伪狂犬病。我国尘岛台湾自年开始实施伪狂犬病根除计划,根除计划主要内容为免疫—监测—扑杀,首先对猪群进行免疫,其次是对猪群进行持续监测,发现阳性猪进行扑杀,引进猪只必需隔离观察周,伪狂犬病野毒感染抗体血清学阴性才可入群。 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化通过根除计划的实施,台湾猪群猪伪狂犬病野毒感染阳性率明显下降,目前大部分猪群猪伪狂犬病己根除。华中农业大学在“九五”期间,利用伪狂犬病毒基因缺失苗、鉴别诊断等综合防控技术,在部分猪场实施了猪伪狂犬病净化根除计划。广东农业科学院通过免疫、监测、淘汰(扑杀)、严格落实生物安全措施等综合防控技术,利用该项防控技术,通过年时间,成功将广东某猪场伪狂犬病净化。。黑龙江省于—年开展了种猪场有关疫病净化技术研究的科研项目研究,对家种猪场进行猪伪狂犬病净化工作。主要内容为：首先进行血清学摸底调‘查,确定猪伪狂犬病野毒感染阳性率,其次是对种猪场种猪进行全群监测,对阳性猪只进行淘汰处理,净化计划实施一年后,种猪场猪伪狂犬病野毒感染阳性率由原来下降至。 第二章种猪场诸伪狂犬病野毒感染血清学调查第二章种猪场猪伪狂犬病野毒感染血清学调查为全面实施原种种猪场、一级种猪扩繁场和供精站猪伪狂犬病净化工作,掌握我省种猪场猪伪狂犬病野毒感染状况和流行态势。年,在全省种猪场范围内幵展了种猪猪伪狂犬病野毒感染情况基线调查,随机对家种猪场开展了猪伪狂犬病野毒感染感染情况调查。材料和方法调查猪场随机选择了吉安市、上饶市、抚州市、南昌市、九江市、赣州市、新余市和鹰潭市个设区市家种猪场,个种猪场编号分别为、、、、、、、、、、、、、、、、、、、。待检血清共份血清,均免疫注射猪伪狂犬病基因缺失苗。检测试剂猪伪狂犬病—检测试剂盒,经销商为北京爱德士元亨生物科技有限公司。试剂盒包含酶联反应板、酶标二抗、终止液、洗漆液、标准阴、阳性血清等。主要器材酶标仪、自动洗板机、移液器等。检测步骤在抗原包被板加入稀释液,然后加入待检血清或阴阳性对照；室温孵育小时；洗板次,最后一次拍干；加入酶标二抗,然后孵育分钟。同。加入底物溶液,避光孵育分钟。加入终止液,酶标仪上测各孔值。阴性对照平均值减去阳性对照平均值必须大于或等于试验方可成立。结果判定 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化根据检测试剂判定标准：值切样品判为阳性；样品应重新测定；值〉,样品判为阴性。结果根据检测结果,随机对家种猪场采集的份血清进行检测,份阳性,阳性率。个种猪场中,有个种猪场检测出了阳性,种猪场阳性率为种猪群阳性率在之间,家阳性种猪场分别为、、、、、、、、阳性率分别为、、、、、、、、,另外家种猪场未检测出阳性样品(见表。表个种猪场猪伪狂犬病毒感染情况猪场名称检测数量份阳性数量(份阳性率(％合计分析与讨论本次调查旨在掌握我省种猪场种猪猪伪狂犬病感染情况,为科学防控和净化猪伪狂犬病做出科学评估,为业务主管领导决策提供技术支撑。本次对个种猪场猪伪狂犬病血清学调查主要采用—检测方法对免疫猪群进行血清学调查, 第二章种猪场猪伪狂犬病野毒感染血清学调查检测种猪场种猪伪狂犬病野毒感染情况,此法简便、快速、灵敏性高、特异性高等优点,是养殖业开展伪狂犬病净化控制计划主要检测方法。根据检测结果显示,各猪场之间的阳性感染率存在一定差别,证实我省种猪场存在不同程度的猪伪犬病毒感染,危害程度各不相同,但总体水平较好,这与许多研究人员应用方法检测不同地区的猪伪狂犬野毒抗体阳性率偏高有所不同〖。种猪场实施猪伪狂犬病净化工作,可明显改善种猪生产性能,提高仔猪存活率,提高种猪场生产效益和社会效益。根据本次摸底调查,我省种猪场种猪伪狂犬病平均阳性率为,为下步实施种猪场伪狂犬病净化工作提供了科学依据,大部分种猪场可以直接进行猪伪狂犬病净化,个别猪场应采取分步净化,如、、等种猪场。 江西省规糢化种猪场种猪伪狂犬病净化第三章种猪场猪伪狂犬病净化根据年对全省家种猪场和供精站猪伪狂犬病基线调查结果,我省种猪场伪狂犬病野毒感染平均阳性率低于,个种猪场抽检样品结果为阴性,从调查结果来看,在全省开展原种猪场、一级种猪扩繁场和供精站猪伪狂犬病净化工作是可行的。年,为切实做好种猪场伪狂犬病防控工作,从源头控制猪伪狂犬病的发生与流行,江西省畜牧兽医局率先在全国幵展了由兽医主管部门主导的原种猪场、一级种猪扩繁场和供精站伪狂犬病净化工作,制定了全省种猪场伪狂犬病净化方案,对种猪场和供精站实施了猪伪狂犬病净化系统工程,通过釆取严格的免疫、监测、淘汰等一系列综合防控措施,净化工作取得了一定成效,种猪场和供精站猪伪狂犬病阳性率呈逐年下降趋势,部分猪场已基本达到净化效果。本节选择了个种猪场,对其—年实施的猪伪狂犬病净化计划情况进行介绍。材料净化种猪场共个种猪场,编号分别为、、、和。种猪场基础母猪存栏量头；种基础猪场母猪存栏量头；种猪场基础母猪存栏量头；种猪场基础母猪存栏量头；种猪场基础母猪存栏量头。猪伪狂犬疫苗个种猪场全部使用猪伪狂犬病基因缺失苗。和种猪场使用的疫苗为勃林格公司生产的伪狂犬病(基因缺失苗,种猪场使用的疫苗为美国辉瑞公司生产的伪狂犬病基因缺失苗,和种猪场使用的疫苗为武汉科前公司生产的基因缺失苗。检测试剂和主要仪器猪伪狂犬病—检测试剂盒,经销商为北京爱德士元亨生物科技有限公司,含酶联反应板、酶标二抗、终止液、标准阴、阳性血清稀释液、底物溶液、等。主要器材酶标仪、自动洗板机以及各种规格移液器。 第三章种猪场猪伪狂犬病净化检测方法按检测试剂说明书进行。净化方案免疫方案种公母猪免疫程序。全群免疫,母猪每年免疫次,公猪每半年免疫一次。后备猪免疫程序。后备母猪配种前免疫接种次,两次间隙周。仔猪猪免疫程序。仔猪采取二次免疫法,首免：日龄以内滴鼻、第二次免疫：日龄左右再免疫接种次。监测方案野毒感染监测。种公母猪、后备公母猪全部采样检测,每年监测次,监测间隔在半年左右,监测时间分别为每年的月和月。样品的采样、保存和运输严格按照有关规程进行。猪场采样工作需在天时间内采集完毕,分离血清,及时送至检测单位,检测单位收到样品后,填写样品接收单,对样品进行分样,一°保存待检。阳性率大于时分批逐步淘汰；阳性率小于时一次性全部淘汰。检测中阳性公猪、阳性后备猪应立即淘汰。监测工作要做到“四个统一”,即统一检测标准、统一检测方法、统一检测试剂、统一操作规程,尽量减少因检测工作带来的误差,提高检测数据的准确性。连续两次对种公母猪(含后备公母猪)全面检测猪伪狂犬病野毒感染为阴性的猪场,改用抽检方法进行检测,种公母(含后备公母猪)猪按比例进行抽检,円左右种猪按比例进行抽检。引种监测。新引进种猪必需进行隔离观察天,入群前需进行猪伪狂犬病野毒感染抗体及免疫抗体检测,野毒感染抗体阴性及免疫抗体阳性的猪只才能并群。生物安全防控措施方案严格的防疫体系。必须确保生猪得到有效的防疫和隔离,避免接触到传染源而发生再次感染,同时种猪场(站)要对猪舍、栏圈定期消毒。实施早期断奶技术,降低或控制其他病原的早期感染,建立健康猪群。实施全进全出制度,生猪调入调出前后用不同的消毒药物彻底清洗消毒栏舍。 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化对生猪实施部分清群。首先对能出售的生猪销售清空,其次对疫病多而复杂的生猪进行清群或分场管理,对频临淘汰的生猪及早淘汰。对于上述清群后的猪舍进行清洗、消毒、空舍等处理。禁止在种猪场、生猪人工授精站内饲养其它动物,定期驱虫、灭鼠、灭蚊蝇,消灭疫病传播媒介。加强生猪的保健工作。净化措施会涉及频繁而且数量较多的转群,对转群前后生猪和产前产后母猪进行药物预防保健。结果与分析‘净化检测结果与分析第一次净化检测结果年月,按照种猪场猪伪狂犬病净化方案,对个猪场的种公母猪和后备公母猪进行了全部检测(检测结果见表。从检测结果看,个种猪场猪伪狂犬病野毒感染平均阳性率为,整体好于我省在年调查结果,更有利于对种猪场实施猪伪狂犬净化计划。、和种猪场种公母猪伪狂犬病野毒感染阳性率分别低于按照全省净化方案,对阳性种公母猪进行淘汰处理,共淘汰生猪头,并加强免疫和消毒。种猪场种公母猪阳性率为,高于的标准,对其种猪场实施分步净化措施,对后备种公母猪、种公猪检测出阳性的,立即淘汰,对生产胎以上、生产效益不佳等阳性母猪,立即淘汰,共淘汰生猪头。对未淘汰阳性母猪实施隔离饲养并逐步淘汰。表个种猪场第一次净化结果猪场名称种公母猪(含后备公母猪)存栏数检测数量阳性数阳性率(％合计第二次净化检测结果年月,对个猪场的种公、母猪,后备公、母猪实施了第二次净化检测 第三章种猪场猪伪狂犬病净化检测结果见表。从检测结果看,个种猪场猪伪狂犬病野毒感染平均阳性率为,与年月第一次净化检测结果相比,平均阳性率下降了个多百分点。从检测结果整体来看,个猪场种猪伪狂犬病野毒感染阳性率呈下降趋势,种猪场种猪伪狂犬病野毒感染阳性率在以下。、、和种猪场种公母猪伪狂犬病野毒感染阳性率分别为、、、按照全省净化方案,对阳性种公母猪进行淘汰处理,共淘汰生猪头。种猪场通过第一次净化后,种猪阳性率下降到,按照净化实施方案的要求,对种猪场阳性种猪实施全部淘汰措施,并经一步加强母猪的饲养管理、环境消毒等措施。表个种猪场第二次净化结果猪场名称种公母猪(含后备公母猪)存栏数检测数量阳性数阳性率(％合计第三次净化检测结果年月,对个种猪场种公母猪含后备公母猪实施了第三次净化检测,对种猪场种公母猪(含后备公母猪、日左右种猪实施净化抽检(检测结果见表和表。第三次净化检测结果与第一次、第二次检测结果相比,阳性率明显下降,、和三个种猪场种公母猪(含后备公母猪)阳性率为。种猪场阳性率也下降到以内。按照净化方案,对、和三个种猪场将实施抽检工作,对种猪场阳性种猪进行淘汰处理,并做好消毒等方面措施。表个种猪场第三次净化结果猪场名称种公母猪(含后备公母猪)存栏数检测数量阳性数阳性率(％合计 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化表种猪场净化抽检结果猪场名称畜群种类检测数量阳性数阳性率种公母猪仔猪合计第四次净化检测结果年月,对、、和等个种猪场种公母猪(后备公母)、日龄左右仔猪分别按照、比例进行抽检,对种猪场种公母猪(含后备母猪)实施全面检测(检测结果见表和表。根据表结果显示,通过四次对种公母猪的全面净化,种猪场种公母猪阳性率由下降到。种猪场两次抽检结果都为阴性,、和等个种猪场第一次抽检结果也为阴性,个种猪场均达到了较好净化效果。表种猪场第四次净化结果猪场名称■■检测数量阳性自阳性率合计表个种猪场净化抽检结果猪场名称畜群种类检测数量阳性数阳性率种公母猪仔猪种公母猪仔猪种公母猪仔猪种公母猪仔猪合计讨论个种猪群伪狂犬病净化实施效果非常明显,这与净化各项措施落实分不开。一是落实净化方案到位。各种猪场、业务主管部门、技术支撑单位严格按照全省 第三章种猪场猪伪狂犬病净化净化方案,实施种猪场净化工作；二是有成熟的疫苗和检测技术做后盾,可靠的实验室诊断方法,准确的检测结果才能准确地将阳性猪只找出并隔离；三是建立了严格的生物安全防控体系,防止病原的侵入。在、、和种猪场全面检测和抽样检测结果显示,种猪场种猪全面检测为阴性后,其后采取抽样检测方法是可行,通过对对其日龄种猪的定期野毒抗体监测,没有阳性猪只的存在说明其后代为阴性群。猪伪狂犬病净化成功的另一个关键点在于种猪场后备猪的引入。种猪场在引进后备种猪时,应严格按照隔离、检测有关措施,保证引进的每头后备猪均为阴性。只有保证后备猪只全为阴性,才能保证猪群的阴性。不同生产厂家疫苗,相同的净化方案,相同的检测技术,得到了相同的结果,充分说明各种猪场选择不同厂家基因缺失疫苗对净化效果不会有太大影响。种猪场伪狂犬病净化计划是提升我省种猪场种猪品质的重要手段,是从源头控制猪伪狂犬病的重要方法,有利于提高种猪场市场占有率和提升种猪场品牌效益,但该计划是一个系统工程,需多个部门配合经过多年时间才能做到,而我省还未建立多个部门联动机制,当前我省种猪场伪狂犬病净化工作还处于业务部门行为,还为上升到政府行为。种猪场伪狂犬病净化工作在我省还是一个新鲜产物,部分种猪场认识意识还不够,需广大畜牧兽医科技者、杂志等广泛宣传。在净化过程中,阳性猪只淘汰会给种猪场带来一定的经济损失,应建立种猪场阳性猪只淘汰补偿机制。当前我省还未制定种猪场猪伪狂犬病净化标准,净化效果评价体系尚未建立,应尽快制定我省种猪场猪伪狂犬病净化标准以及净化效果评价体系。 江西省规模化种猪场种猪伪狂犬病净化第四章全文结论、种猪场净化结果表明,通过“免疫—监测—淘汰”净化技术路线,连续对种猪场实施净化工作,种猪场猪伪狂犬病阳性率可控制在较低水平或达到净化。、严格生物安全防控措施是保证种猪场净化的必要保障,尤其是后备种猪的引进或留作种用,必需进行猪伪狂犬病野毒感染抗体和免疫抗体检测,野毒感染抗体为阴性和免疫抗体为阳性的后备猪方可留作种用。、种猪场猪伪狂犬病净化工作是一项系统工程,有其特殊性、连续性,涉及单位较多,需各部门通力合作。应保障种猪场猪伪狂犬病净化工作人员、经费、技术等。、通过对家原种猪场、一级种猪场实施猪伪狂犬病净化工作,走在全国前列,大力提升了我省种猪品牌,增加了种猪场的经济效益。 参考文献参考文献蔡宝祥等家畜传染病学第版北京：中国农业出版社,斯特劳,阿莱尔,蒙加林等猪病学(第版)赵德明,张仲秋,沈建中,译北京：中国农业大学出版社殷震,刘景华动物病毒学北京：科学出版社陆承平主编兽医微生物学(第版)北京：中国农业出版社,陈继明重大动物疫病监测指南北京：中国农业科学技术出版社杨庆芳,宁官保猪伪狂犬病的研究进展畜牧兽医科技信息何启盖,陈焕春猪伪狂犬病新的流行病学特征华中农业大学学报,,增刊崔尚金,卫秀余,等当前猪伪狂犬病国内流行情动物科学与动物医学马荣华仔猪伪狂犬病的诊治山东畜牧兽医李宏民,李克良猪伪狂犬病的流行病学和防制措施⑴兽医导刊覃庆玉,明发广西某地区猪伪狂犬病血清学调查动物医学进展,,,,,,—,,—,—程道祥猪伪狂犬病的感染、传播和流行福建畜牧兽医方六荣陈焕春应用微量中和试验进行伪狂犬病血清学调査中国畜禽传染病’：叉兴发伪狂犬病病毐糖蛋白基因的克隆、测序及茛核表达质粒的构建两北农林科技大学,哀庆忐李卓然猪伪狂犬病病毐的分离与鉴定中国畜禽传染病,牛建强,蓝天规模化猪场伪狂犬病的控制和净化中国畜牧兽医干革卜伪狂犬病病毐鄂株基闪的克隆和表达硕士论文中农业人学,, 参考文献：：—,：—,,,,—,,,,—倪娇周绪斌近期部分规模化猪场猪伪狂犬病野毒抗体监测情况的调查中国畜牧兽医杨毅,李文刚等猪伪狂犬病疫苗的研究进展江西农业学报,,刘健,徐龙涛,等猪伪狂犬病的控制和净化兽医导刊程晶,陈艳红,等年我国部分地规模化猪场血清流行病学调杳习中国动物传染病学报,邓舜洲,刘文峰,等江西省部分地区猪伪狂犬病血清学调汽中国动物检疫周绪斌,李聪,等年中国省市规模化猪场伪狂犬病野毒流行病学调杏与分析猪业科学,,陈艳红,郭鑫,等我国规模化猪场主要繁殖障碍性病毐病的血清学调杳中国兽医杂志,周绪斌秦云等二年规模化猪场伪狂犬病野毐血淸流行病学系统监测与分析猪业科学,,刘有吕金萍,等种猪群伪狂犬病野毐感染的监测中国兽药杂志,赵东升刘有吕,等近年来我国猪伪狂犬病的流行状况和分析今日养猪业, 作者简介作者简介徐小国,男,中共党员,年月日出生,祖籍江西省新建县。年考入江西农业大学动物科技学院动物医学专业学习,年月毕业后就职于江西省动物疫病预防控制中心(原江西省家畜防疫检疫站,年月任中心防疫科副科长,同年月任中心兽医诊断室副主任,年月任中心兽医诊断室主任。年毕业至今,一直从事动物疫病诊断、监测及流行病学调查工作,长期深入畜禽养殖户推广疫病防疫新技术,解决畜禽养殖户在养殖过程中遇到的疫病防控问题,同时对全省重大动物疫病及时进行排查及诊断,多次荣获省防治重大动物疫病先进个人、省农业厅抗洪救灾先进个人及优秀党员等荣誉。在江西畜牧兽医杂志、中兽医杂志发表论文多篇,参与了《动物防治员》、《宠物医师》和《动物检验工》编写工作。徐小国二—二年四月十曰 致谢致谢本论文是在导师何后军教授、明心中研究员、叶俊华研究员悉心指导下完成的,论文从选题、试验设计、调查研究工作的开展和论文的撰写、修改和定稿,每一环节都倾注了三位导师的心血,三位导师渊博的知识,严谨的治学态度、高尚的人格是我学习和努力的方向,我将永远铭记他们的教诲。在此谨向三位导师致以最诚挚的感谢和敬意！十分感谢江西农业大学动物科技学院、研究生处的领导、老师对我的关心和帮助！‘在学习和研究期间,还得到了单位领导、同事的关心和帮助,在此表示由衷的感谢！谨向所有关心过我,支持过我,帮助过我老师、同事、同学和朋友表示由衷的谢意！徐小国二—二年四月十日
