犬吉氏巴贝斯虫病的流行病学特点和治疗效果分析

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分类号：S855.9学校代码：10712UDC：636.7研究生学号：2014054202密级：公开2018届在职攻读硕士学位研究生学位论文犬吉氏巴贝斯虫病的流行病学特点和治疗效果分析类型兽医硕士士方向临床兽医学学研究生陈冰洁洁指导教师李勤凡副教授授完成时间2018年5月月中国陕西杨凌 Classificationcode:S855.9Universitycode:10712UDC:636.7Postgraduatenumber:2014054202Confidentialitylevel:PublicThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2018ANALYSISOFTHEEPIDEMIOLOGICALCHARACTERISTICSANDTHERAPEUTICEFFECTOFCANINEBABESIAGIBSONIINFECTIONType:MasterofVeterinaryMedicineMajor:ClinicalVeterinaryMedicineNameofPostgraduate:ChenBingjieAdviser:AssociateProf.LiQinfanDateofsubmission:Nov.2018YanglingShanxiChina 犬吉氏巴贝斯虫病的流行病学特点和治疗效果分析摘要犬巴贝斯虫病，是以蜱为传播媒介的血液原虫病。除通过蜱虫叮咬传播外，还可通过输血、胎盘和与带虫犬打架等途径传播。临床主要表现贫血、黄疸、血红蛋白尿、发烧，严重者继发肝肾病，脾脏肿大，甚者死亡。近年来本病在西安市有爆发和流行的趋势，由于本病治疗周期长，易复发，费用高，并且有死亡风险，给宠物主人带来很多困扰。本论文调查西安市巴贝斯虫病的病原、临床症状、流行病学、诊断、治疗及预防，为临床犬巴贝斯虫病的研究提供参考。论文对2015年1月至12月在西安西北农林科大宠物医院就诊的83例犬巴贝斯虫病例进行分析。流行病学调查显示：本病发病时间为4月至12月，其中9-10月为高发期，占全年的60.2%（50/83）；高发年龄为1-5岁，占全部病例的67%。本病的发生与品种和性别无关。83例犬巴贝斯虫病均为吉氏巴贝斯虫病，该病主要通过血液涂片检查发现红细胞内的犬吉氏巴贝斯虫体来进行确诊。本病的治疗原则为：药物杀虫、对症治疗以及营养支持疗法，贫血严重的需先进行输血。83例首诊病例中56例有完整治疗记录，56例的治愈率91％（51/56），死亡率9%（5/56），复发率25％（14/56），一般在第一次治愈后1-2个月内复发，个别犬第2年复发。综上所述，犬巴贝斯虫病在西安地区流行的病原为吉氏巴贝斯虫，流行季节为春、夏、秋季。主要根据临床表现及实验室血涂片检查进行确诊，该病的药物杀虫选择三氮脒并结合对症治疗及营养支持疗法能达到很好的效果，巴贝斯虫病的预防主要是防止蜱虫的叮咬。关键词：犬；巴贝斯虫；诊断；治疗 ANALYSISOFTHEEPIDEMIOLOGICALCHARACTERISTICSANDTHERAPEUTICEFFECTOFCANINEBABESIAGIBSONIINFECTIONABSTRACTCanineBabesiasisisablood-borneprotozoaldiseasethatusesticksasavector.Inadditiontospreadingthroughticksbiting,itcanalsobetransmittedthroughbloodtransfusions,placentas,anddogstakenalongbabesiafighting.Themainclinicalmanifestationsareanemia,jaundice,hemoglobinuriaandfever,andsecondaryliverandkidneydisease,splenomegalyevendeathinseverecases.Inrecentyears,thisdiseasehasanoutbreakingandepidemictrendinXi'an.Becauseitiswithalongtreatmentcycle,easytorelapse,costly,andhastheriskofdeath,thisdiseasebringsalotofobsessionstopetowners.Thisarticleinvestigatedthepathogenic,clinicalsymptoms,epidemiology,diagnosis,treatmentandpreventionofCanineBabesiasisinXi'anwhichwouldprovidereferencesfortheresearchofclinicalCanineBabesia.Eighty-threedogcasesinfectedCanineBabesiasiswhichwerecollectedinthePetHospitalofNorthwestAgricultureandForestryUniversityinXi'anfromJanuarytoDecemberof2015wereanalyzedinthispaper.EpidemiologicalsurveyshowedthattheonsetofthisdiseasewasfromApriltoDecemberofthesameyear.Highincidenceperiodswere9-10monthsandthecasesduringthisperiodaccountedfor60.2%(50/83)ofthewholeyear.Thehighincidenceageswere1-5yearsold,andthecasesofthisagegroupaccountedfor67%ofallcases.Theoccurrenceofthisdiseasehadnothingtodowithvarietiesandgenders.Eighty-threeCanineBabesiasiscaseswereallCanineBabesiaGibsoni.ThedefinitediagnosisofthisdiseasewasmademainlythroughexaminingbloodsmearstofindCanineBabesiaGibsoniparasiteswithintheredbloodcells.Thetreatmentprinciplesofthisdiseaseweredruginsecticide,symptomatictreatmentandnutritionalsupporttherapy,andbloodtransfusionwasneededfirstlyforthesevereanemia.Thereare56caseshadcompletetreatmentrecordsamong83firstdiagnosiscases,amongwhichthecureratewas91%(51/56)andthemortalityratewas9%(5/56),aswellastherecurrenceratewas25%(14/56).Therecurrenceappearedgenerallywithin1to2monthsafterthefirstcureandsomedogsrecurredinthenextyear.Insummary,thepathogenofCanineBabesiasisraginginXi'anwas BabesiaGibsoniandtheepidemicseasonswerespring,summerandautumn.Thedefinitediagnosiswasmademainlyaccordingtoclinicalmanifestationsandtheexaminationoflaboratorybloodsmears.Triamidinewasselectedasthedruginsecticideofthisdisease,whichcombinedwithsymptomatictreatmentandnutritionalsupporttherapycouldachievegoodeffects.ThepreventionofCanineBabesiasiswasmainlytopreventticksbiting.KEYWORDS:Canine,Babesia,diagnosis,treatment 目录第一章巴贝斯虫病的研究进展..............................................................................................11.1病原介绍..................................................................................................................11.2病原形态..................................................................................................................11.3生活史......................................................................................................................21.3.1蜱虫的生活史................................................................................................21.3.2巴贝斯虫在蜱内的发育................................................................................21.4流行病学..................................................................................................................31.5致病作用及病理变化..............................................................................................51.6临床症状..................................................................................................................61.7诊断方法..................................................................................................................61.8治疗方法..................................................................................................................81.9预防........................................................................................................................10第二章83例犬吉氏巴贝斯虫病的流行特点与治疗效果分析...........................................112.1材料........................................................................................................................112.1.1病例资料的收集..........................................................................................112.1.2主要仪器设备..............................................................................................112.1.3主要药物......................................................................................................112.2方法........................................................................................................................112.2.1问诊及临床症状观察..................................................................................112.2.2实验室检查..................................................................................................122.2.3诊断..............................................................................................................122.2.4治疗..............................................................................................................122.3结果........................................................................................................................132.3.1临床症状......................................................................................................132.3.2流行病学......................................................................................................132.3.3实验室检查结果..........................................................................................142.3.4诊断结果......................................................................................................182.3.5治疗结果......................................................................................................182.3.6治疗效果观察..............................................................................................192.4讨论........................................................................................................................202.5结论........................................................................................................................21参考文献..................................................................................................................................22 致谢......................................................................................................................................26附录..........................................................................................................................................27作者简介..................................................................................................................................33 第一章巴贝斯虫病的研究进展1.1病原介绍巴贝斯虫病，是由寄生于红细胞内的巴贝斯虫所引起的一种原虫病。巴贝斯虫在全世界广泛分布，可引起多种哺乳动物发病，如牛、犬、猫、人等。19世纪末，VictorBabes首次在牛上发现巴贝斯虫，随后在羊和犬上发现巴贝斯虫（Uilenberg2006;Roncalli2001）。巴贝斯虫属于原生动物亚界、顶器门孢子虫纲、真球虫目、梨形虫亚目、巴贝斯虫科、巴贝斯虫属的一类单细胞虫体（陈萍和毕可东2003）。犬巴贝斯虫病是由多种巴贝斯虫引起的蜱媒性血液原虫病。以前，按虫体在红细胞内的形态，将犬巴贝斯虫大致分为“大”巴贝斯虫和“小”巴贝斯虫。体积较大（2.5-5.0μm）的为“大”巴贝斯虫为，体积较小（1.0-2.5μm）的为“小”巴贝斯虫（武浩2012）。后来根据第一和第二内转录间隔区（ITS1，ITS2）位点、热休克蛋白70（HSP70）、核糖体RNA小亚基基因（18SrDNA）和细胞色素B等分子生物学方法的研究，发现更多的巴贝斯虫可感染犬，且表现不同的临床症状。已发现的巴贝斯虫包括韦氏巴贝斯虫（Babesiavogeli）、罗氏巴贝斯虫（Babesiarossi）、犬巴贝斯虫（Babesiacanis）、吉氏巴贝斯虫、泰勒原虫（microti样梨形虫）、类田鼠巴贝斯虫，还有一种未命名的大巴贝斯虫（梁永春和张恩义2010；汪恭富2007）。1.2病原形态犬巴贝斯虫病在世界范围内广泛分布。近二十年来，陕西、浙江、河南、江苏、安徽、山东、湖北、辽宁、青海等地均有犬巴贝斯虫病的报道（张国士2012；金兰梅2005；刘跃生2002；范国英2001；姜莉莉2011；马利青2012）。本病在我国江苏、河南、湖北等部分地区呈地方流行，我国报道的巴贝斯虫病病原为吉氏巴贝斯虫。红细胞内的吉氏巴贝斯虫会呈现出多种形态，主要以圆点状、指环状和小杆状为主，也可见到单个和成对的小梨籽状。该病发病初期虫体呈圆点状，圆点状虫体的直径为0.5-1.5µm，整个细胞大部分被细胞核占据，几乎看不到胞浆；胞浆的数量会随着病情的发展逐渐增多，细胞核偏向一侧，细胞整体变大；最终巴贝斯虫体的细胞核会消失，只能观察到胞浆部分，虫体呈无着色空泡样。指环状虫体的染色质着色较深，呈紫红色，位于虫体的边缘，而虫体的胞浆部分基本不着色，虫体的直径为1.5-2.5µm；小杆状虫体的中央着色较浅，而两端着色较深，虫体宽长分别为1.5µm和2.08µm。一个红细胞内可寄生1-16个虫体，但以1-2个为主（权中会和魏莉2012）。犬巴贝斯虫属于“大”巴贝斯虫，大小为5.0×2.5-3.0µm，有梨籽形、椭圆形、圆1 形及不规则形状。典型的形态为成对的梨籽形，尖端以锐角相连，每个虫体内有染色质团块。虫体经瑞-姬氏染色后，染色质呈紫红色，胞浆呈淡蓝色。发病初期虫体以单个为主，随后双梨籽形虫体所占比例逐渐增加。韦氏巴贝斯虫体大多数呈圆形、卵圆形和梨籽形，其形态较犬巴贝斯虫小。有研究者认为韦氏巴贝斯虫可能是犬巴贝斯虫的变种，但这一结论是否有效还未得到证实（朱兴全2006）。1.3生活史1.3.1蜱虫的生活史犬巴贝斯虫病的中间宿主是多种蜱。据报道，已发现的蜱包括：长角血蜱、李氏血蜱、镰形扇头蜱、血红扇头蜱、网纹革蜱、安氏革蜱和边缘璃眼蜱（何英2003）。蜱虫的发育过程包括卵、幼虫、若虫和成虫。雌虫受精后吸食动物血液，吸饱后从宿主体表脱落，等待产卵，产卵后随即死亡。2-4周后虫卵孵出幼虫，1-4周后幼虫蜕变为若虫，若虫期需吸食宿主血液，吸饱血后离开宿主，1-4周后发育为成虫。蜱可分为硬蜱和软蜱。硬蜱的若虫期为1个月，从卵发育为成虫需要2个月到3年，时间不等，硬蜱的寿命一般为1-10个月。软蜱的若虫期1-6个月，发育为成虫需6个月到2年，软蜱成虫寿命5-6年甚至数十年（汪明2003）。1.3.2巴贝斯虫在蜱内的发育当动物被携带有巴贝斯的蜱虫叮咬后，蜱虫唾液腺内含有感染性的子孢子会随着唾液进入到动物体内，寄生于红细胞内破坏细胞引起溶血（杨万莲2004）。巴贝斯虫在红细胞内进行裂殖生殖和二分裂生殖，通常情况下1个红细胞内可见1-2个裂殖子，少数情况下1个红细胞内可达十几个裂殖子。当蜱吸食了含虫血液后，巴贝斯虫在蜱的肠上皮细胞内进行有性繁殖，之后穿过肠壁进入血淋巴。巴贝斯虫的生活史包括经卵传播和期间传播。1.3.2.1经卵传播巴贝斯虫随雌蜱吸血进入蜱体内进行发育及繁殖，进入蜱虫卵巢，经过蜱虫卵传给卵的后代，之后随着蜱的幼虫、若虫、成虫，进行传播。巴贝斯虫可以随着蜱虫的传代长期存在蜱虫体内，即使这些蜱虫从未在感染有巴贝斯虫的动物身上吸过血。1.3.2.2期间传播幼蜱或若蜱吸食了含有巴贝斯虫的动物血液后，可将虫传播给蜱的下一个发育阶段-若蜱或成蜱。它是在蜱的一个发育阶段进行传播的。泰勒虫就是通过这种方式进行传播的。1984年，Mehlhorn和Schein通过体外培养、试验室传播试验、电镜观察，发现巴贝斯虫具有孢子虫生活史的3个阶段：a.分裂生殖此阶段为虫体在动物体内的无性繁殖阶段，巴贝斯虫的子孢子随蜱虫唾液进入动物体内，随后进入红细胞内，以二分裂2 法或出芽方式进行分裂生殖，产生裂殖子。b.配子生殖为蜱肠内的有性繁殖阶段，巴贝斯虫随蜱虫唾液进入蜱肠管内，大部分虫体死亡，小部分虫体发育为配子（Milleretal.2004）。巴贝斯虫由两个形态相似但电子密度不同的辅肋体配对形成合子（Mehlhornetal.1980）。c.孢子生殖为蜱虫唾液腺和其它器官内的无性繁殖阶段的巴贝斯虫的动合子，侵入蜱的血淋巴细胞、肠上皮、肌纤维等器官内反复分裂生殖，形成更多的动合子，待子蜱发育成熟和采食时就开始发生孢子生殖过程。子蜱吸血24h内，动合子进入蜱虫唾液腺内转变为多种形态的孢子体，反复进行孢子生殖形成成千上万个对动物有感染性的子孢子（Mehlhornetal.1984）。犬巴贝斯虫的增殖与传播见图1-1。引自《Infectiondiseasesofthedogandcat》Adaptedfrom"Infectiondiseasesofthedogandcat"图1-1犬巴贝斯虫的增殖与传播Fig.1-1TheproliferationandspreadofCanineBabesiasis1.4流行病学关于犬巴贝斯虫病的世界分布见表1-1（引自《犬吉氏巴贝斯虫重组表达抗原检测3 技术的建立及其在流行病学调查上的应用》杨其清2013年）。在亚洲感染的巴贝斯虫病原为吉氏巴贝斯虫和韦氏巴贝斯虫。在我国境内，包括陕西、青海、浙江、河南、江苏、安徽、山东、湖北、辽宁等地区均有犬巴贝斯虫感染病例的报道。近年来，本病在我国呈现流行性，多在春季开始发现，冬季消失（侯加法2002），只要有蜱虫孳生的地方，都有可能感染此病。表1-1巴贝斯虫的分布、虫媒及红细胞内形态Table1-1ThedistributionofBabesia,thevectorandtheredbloodcellmorphology.巴贝斯种类虫媒地理分布大小细胞内形态BabesiaspeciesInsectvectorGeographicalDistributionSize(µm)Intracellularmorphology吉氏巴贝斯虫长角血蜱、东南亚、美国、南美、澳1×3通常单个Gibbongibsoni血红扇头蜱大利亚、欧洲犬巴贝斯虫革蜱属、欧洲2×5通常成对Babesiacanis血红扇头蜱罗氏巴贝斯虫一种血蜱南非、尼日利亚、苏丹2×5通常成对Babesiarossi韦氏巴贝斯虫非洲、亚洲、欧洲、美洲、血红扇头蜱2.5×4.5单个或成对Babesiavogeli澳大利亚未命名的大巴成对粒形变形虫未知美国东部2×6贝斯虫样六角形硬泰勒虫属蜱、血红扇西班牙、克罗地亚、北美1×2.5通常单个Babesiamicroti头蜱康拉德巴贝斯环形、四联、变形虫Babesia血红扇头蜱美国（加州）0.3×3虫样conradae蜱是巴贝斯虫的终末宿主，也是传播媒介，因此犬巴贝斯虫病的区域分布和发病季节与蜱的区域分布和活动季节密切相关。蜱虫的活动时间是春、夏、秋季，冬季休眠，所以在流行区域内巴贝斯虫的发病月份为4-11月（何士根2013）。巴贝斯虫病的发生与动物的性别及年龄无相关性，任何年龄的犬只要感染巴贝斯虫，均可发病（李大庭2008）。据报道，近年来犬的巴贝斯虫病在警犬、斗犬、种犬繁殖基地及经常在草地和外出活动的犬上发病率呈明显上升趋势（林霞2006；张磊2011）。巴贝斯虫病的发生除经蜱咬传播外，还可通过输血（Stegemanetal.2003）、咬伤、唾液、摄入带虫的血液及经胎盘垂直传播。摄入带虫血液是因为供血犬红细胞内携带巴贝斯虫体，输注给受血犬而造成的医源性感染（Inokumaetal.2004）。胎盘垂直传播是，母犬经过胎盘将其红细胞中的巴贝斯虫垂直传播给它的下一代，使胎儿在出生时就感染此病，成为巴贝斯虫的携带者（Solanoetal.2011）。曾报道，在母犬感染巴贝斯虫的情况下产生的后代在出生后7-47d后便出现临床症状，兽医临床观察发现：该病临床痊4 愈后的母犬一年内若再发情、交配、妊娠，巴贝斯虫体也有可能通过胎盘不同程度地垂直传播给仔犬。因此，只要感染过巴贝斯虫病的母犬一旦受孕分娩，都有可能将此病垂直传播给新生幼犬（董君艳2001）。1.5致病作用及病理变化携带巴贝斯虫的蜱叮咬犬后，巴贝斯虫进入犬血液中，在红细胞内复制引起红细胞破裂，产生血管内和血管外溶血。巴贝斯虫感染的严重程度与虫体的感染数量、宿主的年龄、免疫状况及并发症有关。巴贝斯虫感染引起的病理变化是由溶血性贫血和全身性炎症反应综合症引起的。溶血性贫血，为巴贝斯虫感染的主要临床表现。溶血对机体的损伤很严重，由于虫体在红细胞内繁殖，引起红细胞的溶解，使红细胞的破坏速度加快而导致循环红细胞寿命缩短，同时存在血管内溶血和血管外溶血。血管外溶血与脾脏和肝脏巨嗜细胞破坏和吞噬受损的红细胞有关（夏兆飞2007）。染虫红细胞与非染虫红细胞之间发生抗原抗体反应产生大量的凝集，使循环池内的红细胞和血红蛋白量降低，血液稀薄。除此之外还有其它机制会引起红细胞的破坏，如红细胞表面抗原被抗体结合激活补体系统（Adachietal.1994;Adachietal.1995;Carlietal.2009），血清溶血性因子的释放（Onishietal.1990），红细胞被氧化。溶血最终导致剧烈的血红蛋白血、血红蛋白尿、胆红素尿及胆红素血症。犬的溶血性贫血可分为以下七种情况，免疫介导性溶血性贫血、海因茨小体性贫血、犬血巴尔通体病、犬巴贝斯虫病、丙酮酸激酶缺乏症（PK）、磷酸果糖激酶缺乏症（PFK）、机械性溶血。有些犬在感染巴贝斯虫的过程中，会继发免疫介导性溶血性贫血（魏莉和童德文2015）。是由于被抗体包被的红细胞与补体结合，或者被脾脏和肝脏内的巨噬细胞清除，造成溶血。血液中会出现大量的球形红细胞及新生红细胞，且直接抗球蛋白试验阳性。试验发现脾脏对巴贝斯虫的控制起着重要作用，因此在犬脾脏切除后，巴贝斯虫病的发展更为迅速且更难控制（Vercammenetal.1995），然而有些犬在巴贝斯虫的治疗过程中往往会引起免疫介导性溶血性贫血的发生，这会加速病情的恶化。血小板减少，巴贝斯虫病的发生总是伴随着血小板的降低，这可能与抗血小板抗体的出现相关，抗血小板抗体通过单核细胞吞噬作用破坏外周血液中的血小板；也可能与抗巨核细胞抗体相关，抗巨核细胞抗体可减少血小板的生成；还可能与脾脏机能亢进相关，大量的血小板被“扣押”在脾脏，这就是出现脾脏肿大的原因；还可能与溶血和血管损伤引起的凝血性消耗相关（吴玉苹2006）。有些感染巴贝斯虫的犬会引起免疫介导性血小板减少症。感染巴贝斯虫的犬会因溶血造成组织缺氧（Jiaetal.2007），而引起一系列的临床综合征。其中受缺氧损伤严重的组织器官是肾脏，中枢神经等（李文益2012）。血清中肌酐和尿素氮的升高表明肾脏功能的受损，这是由于肾小管坏死和肾小球滤过率降低5 导致肾脏缺氧和血红蛋白尿（Lobettietal.1996）。能导致肾脏缺氧的原因包括：贫血、毛细血管阻塞、低血压造成的肾血管收缩。试验发现，患病犬的肾组织学检查发现肾小管上皮细胞水肿，空泡化，甚至坏死脱离，这些病理变化都符合缺氧损伤（Maithaetal.2007）；贫血严重的患犬，血液稀薄，血管通透性增加，会出现肺水肿，呼吸困难，这可能是呼吸窘迫综合症（ARDS）；犬巴贝斯虫病时常出现肝酶升高和黄疸，这与红细胞的大量溶解形成高胆红素相关，但不是唯一原因，还与肝脏缺氧相关（Wozniaketal.1997），肝脏可见非化脓性门静脉肝炎、中央小叶肝炎、小静脉纤维化、枯否细胞、红细胞吞噬现象、CD3+、淋巴细胞管的出现，这些变化都符合缺氧表现；由于红细胞被大量破坏，血红蛋白含量降低，动物各组织器官供养不足，正常的氧化-还原反应被破坏，全身代谢障碍，酸碱平衡紊乱，组织缺氧引起的代谢性酸中毒和换气过度引起的呼吸性碱中毒；虫体本身的代谢产物和毒素可作用于中枢视神经系统，造成机体体温调节障碍和植物神经机能紊乱，动物出现体温升高，严重者出现昏迷（Lewis1979）。以上病变都会随着动物机体抵抗力的降低，动物体温的持续上升和虫体数量的增多而加重。巴贝斯虫的发病机制很复杂，动物发病时，机体各系统组织器官发生不同程度形态和功能的变化，从而引起巴贝斯虫特征性的病理变化和临床症状。1.6临床症状据相关调查统计，犬感染巴贝斯虫后3-21d开始出现临床症状，因此该病的潜伏期为数天到数周不等。部分病犬就诊时体表可发现蜱虫。被虫体感染后的犬根据虫体感染数量和机体抵抗力，可表现出从轻微至严重的临床症状。慢性感染期病犬，初期表现精神沉郁、食欲减退、喜卧，中期表现发热、黄疸、尿呈亮黄色至茶色，后期表现血红蛋白血、血红蛋白尿、黏膜苍白、支气管炎，出血性紫斑和肌肉疼痛；亚急性感染期犬，体温升高达41-42℃，可视黏膜发绀或黄染、脉搏加快、呼吸困难，有些患犬可触及到肿大的脾脏，凝血功能障碍，神经机能紊乱，食欲废绝，严重时动物不能站立（徐黎2016；范莉2008）。急性期病犬，前期无任何异常临床症状，在发病1-2d内死亡，此情况比较少见；多数犬会出现并发症，这与溶血程度相关，包括严重肾脏衰竭、肝病、重度血小板减少症、代谢性酸中毒、代谢紊乱、中枢神经和肌肉受损，贫血严重时可出现呼吸窘迫综合症。处于亚临床症状时期的犬虽然暂时不会出现任何症状，但当机体发生应激，脾脏切除后或糖皮质激素治疗后，发病的概率会大大增加（Suzuki2007）。1.7诊断方法临床上确诊巴贝斯虫病，首先要确定是否在流行季节；犬近期是否有外出和在草地活动的情况；是否发现被蜱虫叮咬；是否有咬架史；若为出生不久的幼犬发病，确定其上一代是否有巴贝斯虫病史。以上情况若有发生，结合贫血、黄疸、血红蛋白尿等临床6 特征，综合实验室检查，即可确诊。实验室检查包括以下几种：血涂片检查，血涂片染色镜检法是临床上诊断巴贝斯虫病最快速，直接有效的诊断方法，能清晰直观的观察到红细胞内虫体。血涂片镜检法，是用不加抗凝剂的新鲜血液进行推片、风干、染色，油镜观察（1000倍）。瑞-吉氏染色是临床上应用最多的染色方法，但也有研究证明福德氏染色对巴贝斯虫的诊断比瑞-吉氏染色有更多优势（范萍萍2016）。为提高虫体检出率，一般采取毛细血管（耳尖、趾间）的血液，因为虫体积聚于毛细血管壁上。淡黄层制作血涂片也可增加检出率，因为有些种类的巴贝斯虫倾向寄生于网织红细胞。血涂片的制备方法：用新鲜血液（不加抗凝剂）制作血涂片→自然风干→进行瑞-吉氏染色→染色5-7min后冲洗，制备好的血涂片用1000倍油镜镜检。犬吉氏巴贝斯虫在显微镜下呈现多种形态，一般在虫体边缘可观察到嗜碱性紫点，虫体有圆点状、戒指形、小杆形、梨籽状和空泡状。虫体多位于红细胞边缘或偏中央，一个红细胞内可寄生1-16个虫体，以寄生1-2个虫体多见（华修国1994）。巴贝斯虫病犬的血涂片除能观察到虫体外，红细胞也有其形态特征。表现出溶血性贫血的象征。可见大量新生红细胞，网织红细胞和有核红细胞，呈多染性，个体增大。红细胞大小不等，淡染区增大，血红蛋白含量降低。由于虫体对红细胞的破坏，使红细胞最终破裂，有时可观察到红细胞碎片。在中度至重度临床期，血涂片检查法是可靠的，但在隐性感染期和慢性病例及亚临床期时，由于红细胞内虫体数量较少，仅通过显微镜检查难以确诊，所以对于这类情况，建议采用分子生物学方法进行诊断。分子生物学方法中最被推荐的是PCR法。PCR法检测的敏感度高、特异性强，只要能在血液中检测到巴贝斯虫相关DNA片段即可，并可鉴别巴贝斯虫的种类（Matjilaetal.2004;Jefferies2007），但PCR检测需要花费较多时间进行样品分析，且需要专业的实验室，一般临床很难进行。血清学检测只要能检测到相关抗体，便可提示机体以往和现在存在的感染；间接荧光抗体检测（IFAT），也常被用于巴贝斯虫的诊断；ELISA检测法常被用作研究和流行病学调查（Taboadaetal.1992;Yamaneetal.1993）。血常规检查最显著的变化为：红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）及红细胞压积（HCT）严重程度降低；红细胞平均体积（MCV）和红细胞分布宽度（RDW）增大；血小板（PLT)和血小板压积（PCT）降低；白细胞不同程度增高。血液生化检查主要包括：肝脏功能和肾脏功能的检查，由于本病造成大量的溶血，总胆红素（TBIL）出现大幅度升高。血液稀薄，胶体渗透压下降，白蛋白（ALB）降低。病情严重造成肝肾受损者，BUN、CRE、AST、ALT、ALP都会出现不同程度的升高，ALP为肝脏特异性酶，升高往往能证实肝细胞的受损（侯强红2015）。血气检查，由于动物机体酸碱平衡紊乱，造成血液pH值变化，呼吸窘迫综合症造成血氧分压（PaO-2）降低，二氧化碳分压（PaCO2），碳酸氢根（HCO3）也出现一系列变化。7 尿液检查，感染巴贝斯虫的病犬尿液呈现亮黄色、红色、棕色或茶色。由于尿液中血红蛋白和其他成分含量增多，使尿比重增加，可由正常的1.015-1.045增加到1.80，尿液中其他的化学成分很难用比色法检测，因为这些指标会受到尿色的干扰。用尿沉渣镜检法鉴别红尿的性质，将红尿离心，上清液仍为红色，且沉渣中未发现红细胞及其它细胞，则说明此尿为血红蛋白尿或肌红蛋白尿。肌红蛋白尿和血红蛋白尿的鉴别主要通过硫酸铵法，方法是向尿液中加入硫酸铵，若产生血红蛋白沉淀，此时隐血反应为阴性则此尿为血红蛋白尿。X射线检查时通常对动物进行正位和左侧位投射，可发现肿大的脾脏，这可能是红细胞的大量崩解和致敏红细胞在脾脏内淤积造成的（孙永泰2006）。1.8治疗方法巴贝斯虫病的总体治疗原则为：药物杀虫，对症治疗及营养支持疗法。由于虫体会造成红细胞的大量破坏，引起溶血、贫血和一系列并发症，所以治疗该病的关键在于减少溶血，改善贫血，对症治疗相应的并发症。轻度感染病例，仅需药物杀虫，中度至重度感染病例除药物杀虫外还需针对并发症进行治疗，贫血严重病例需先进行输血，然后杀虫。在我国目前还未研制出预防巴贝斯虫病的疫苗，因此该病的控制主要依靠抗巴贝斯虫的药物。每个种类的巴贝斯虫都有对其敏感的抗巴贝斯虫药物。研究表明，大巴贝斯虫治疗更彻底，可根治，而小巴贝斯虫常常出现慢性携带的情况，治疗不彻底。目前临床应用较多的治疗巴贝斯虫的药物有贝尼尔、台盼蓝、咪唑苯脲、阿托伐醌、克林霉素等。贝尼尔，主要成分为三氮脒，常用于治疗犬巴贝斯虫和吉氏巴贝斯虫。贝尼尔被认为是临床上最有效的杀巴贝斯虫药物，它的杀虫作用取决于其对巴贝斯虫需氧糖酵解和核蛋白变性作用。使用时应肌肉注射，剂量为3~5mg/kg，推荐剂量为3.5mg/kg，它的安全范围小，若超出使用剂量容易发生毒性反应，损伤肝肾。使用治疗量时也常常引起注射部位疼痛，频频排尿，肌肉震颤，呕吐等，连续使用时应谨慎。非洲兽医临床工作人员发现，贝尼尔的治疗往往出现抗药性，并且容易复发。台盼蓝，又名锥虫兰，常被用于罗氏巴贝斯虫的治疗。它可阻断虫体进入红细胞内，使用时用灭菌生理盐水配制成1%溶液，按10mg/kg的剂量，静脉注射给药。台盼蓝的副作用小，但若重复给药，可造成组织刺激，甚者尿液出现淡蓝色。咪唑苯脲，又名咪多卡（双脒苯脲）。此药自1969年，schmidt等发现对鼠和骆氏巴贝斯虫有效，随后证明对牛、羊、马，犬的巴贝斯虫具有较好的治疗和预防作用。它直接作用于虫体，干扰虫体糖代谢，抑制DNA的合成，其毒性、剂量、安全范围，疗效都比贝尼尔和硫酸喹啉脲好，并且具有预防作用。使用时经皮下注射，每公斤体重6mg，每天注射两次（薛礼刚1990）。8 阿托伐醌，为辅酶Q的同系物，常被用于吉氏巴贝斯虫病的治疗，对犬巴贝斯虫无效。也可用于人卡氏肺炎的AIDS（获得性免疫缺乏综合征）病人的治疗。试验证明，本品与阿奇霉素联合使用具有良好的治疗效果，且不易产生耐药性，不易复发，治疗更彻底。阿托伐醌的使用剂量为13.3mg/kg，口服3次/d，连用10d。阿奇霉素使用剂量为10mg/kg，口服1次/d，连用10d（吴家俊和周金林2013）。克林霉素，具有抗细菌，抗疟的作用。试验证明此药在与奎宁联合使用的情况下对犬吉氏巴贝斯虫病有较好的治疗作用，与多西环素联合使用对犬巴贝斯虫病有较好的疗效。使用剂量为：克林霉素25~50mg/kg，2次/d，连用10d；多西环素10mg/kg，2次/d，连用7~10d。临床研究证明，使用克林霉素和多西环素可改善患犬的耐药和复发。对症治疗主要包括以下几个方面：该病的发生往往伴随着白细胞的升高，因此抗菌消炎防止继发感染是必不可少的，可选用的药物有强安林（氨苄西林钠）、头孢曲松钠，654-2（山崀宕碱）；对于继发免疫介导性溶血性贫血的情况，可使用糖皮质激素泼尼松和地塞米松（邱杰2010），若情况得不到改善，可使用类固醇和环磷酰胺；解除酸中毒可使用10%碳酸氢钠；输液可纠正电解质紊乱，改善脱水，预防红细胞在血管的淤积，防止溶血对肾脏造成的负担；由于红细胞大量破坏形成的胆红素都要通过肝脏进行排泄，增加了肝脏负担，使肝细胞受损，丹诺士和奥普乐可保护肝脏，修复受损的肝细胞；血浆和白蛋白的使用可增加血液胶体渗透压，改善因血液稀薄造成的水肿；该病的发生通常都伴随着钙的降低，为改善低钙血症，临床医师会选择静脉输入葡萄糖酸钙，钙的输入速度一定要慢。营养支持疗法对于巴贝斯虫病的控制起到了非常积极的作用。补充能量可选用Vc、B1、B6、肌苷、肝泰乐、辅酶A、ATP等，同时应给动物喂食高能量，高蛋白易消化的食物，来补充患病期间的消耗和食欲的不佳；改善贫血促进红细胞生成可选用维生素B12、促红细胞生成素、富血力和补血肝精口服液。输血能迅速补充血容量，增加机体供氧能力，增强抗病力，对巴贝斯虫病的治疗起到重要的作用。红细胞压积是考虑是否输血的重要依据，然而没有一个需要输血的红细胞压积临界值标准，而需要结合动物的临床症状、感染虫体的数量、贫血的严重程度及引起的并发症进行综合考量（Boh2006）。当患病动物出现呼吸困难、心率加快、行走摇晃、不能站立、昏迷、黏膜苍白，休克等情况，临床医师要立即对患犬进行输血，在输血前首先对供血犬进行血液寄生虫及其他传染病的筛查，以免发生医源性的感染，其次对供血犬和受血犬进行交叉配血试验，只有在不发生凝集的情况下才能进行输血。巴贝斯虫病在治疗过程中有带虫免疫现象。临床研究发现，即使巴贝斯虫的临床症状消失，但镜检还能发现少量或偶尔可见虫体。当患病动物体内原有的巴贝斯虫被杀伤，其数量显著下降，维持在一个较低的水平，临床症状消失，此时患犬处于带虫状态，患犬体内的巴贝斯虫不能被完全清除。当动物机体抵抗力降低时，虫体会再次繁殖，又会引起一系列的临床症状。9 1.9预防蜱是巴贝斯虫病流行传播的重要媒介，因此，控制动物体表及环境中蜱虫的数量对巴贝斯虫病的预防起到了至关重要的作用。蜱的活动有明显的季节性，一般在春秋及夏季较活跃，冬季休眠，待到来年会再次爆发（张君涛2010）。因此，在流行季节应做好动物所在周围环境及小区草地的防蜱灭蜱工作。目前用于灭蜱的方法有两种：一种是化学药物灭蜱，主要有：除虫菊酯类杀虫剂、有机磷类杀虫剂、双甲脒、咪唑苯脲和吡虫啉等；另一种方法是直接捕捉，当在动物体表发现蜱虫时将其拔掉，拔之前先用酒精将其麻痹，待其头部放松时垂直皮肤将其拔出，应避免蜱虫的假头断入皮肤内，造成炎症反应。在流行区域，定期为犬滴加外用防蜱灭蜱的药物，这样既可防止蜱虫附着于动物体表，即使已经附着也可在24-48h内将其杀灭。在临床中使用最多的为滴剂、喷剂和项圈。经常使用的商品化滴剂是福来恩，化学成分主要为非泼罗尼，在流行季节蜱虫活跃期，每月滴加一次，在蜱虫非活跃期一个季度滴加一次，可有效防止蜱虫附着于动物体表；使用喷剂时，要使动物头部、耳廓、腹部、四肢、尾部被毛渗透，其它部位只喷湿被毛表面，其成分主要为除虫菊酯类；项圈灭蜱，是在动物的项圈上加入除虫菊酯类，植物提取物及伊维菌素类杀虫剂，附着于动物体表的蜱虫在1-2d内死亡脱落。喷剂和项圈的灭蜱效果良好，但在使用时一定要给动物佩戴伊丽莎白脖圈，防止因舔食造成药物中毒。对于巴贝斯虫病的非虫媒传播（垂直传播、输血传播、犬与犬的打斗）也应引起重视。既然巴贝斯虫可垂直传播，那么在配种前应检测母犬是否巴贝斯虫阳性，一旦发现母犬带虫，则不建议进行繁殖配种，以防止垂直传播的发生。因为此病可通过犬与犬打斗传播，所以要阻止犬打斗，对有打斗史的犬要进行病原检测，特别对于斗犬更应加强监管。为避免输血传播，在每次输血前都要对供血犬进行巴贝斯虫病的筛查。虽然目前国内还未研制出预防巴贝斯虫病的疫苗，但在北半球的欧洲一些国家已有商品化疫苗。巴贝斯虫疫苗可诱导动物机体产生抗此病的免疫力，控制临床症状，降低寄生虫血症，缩短病程（Fernandes2009;Wardrop2005;Moreau1989）。10 第二章83例犬吉氏巴贝斯虫病的流行特点与治疗效果分析犬巴贝斯虫病是由犬巴贝斯虫寄生于红细胞内引起的，主要通过蜱进行传播，非蜱传播包括垂直传播、输血、犬与犬打斗。其临床症状主要表现为发热、黄疸、血红蛋白血和血红蛋白尿。吉氏巴贝斯虫病最显著的特征是血小板减少和贫血。目前，在我国境内多个省市地区均有犬巴贝斯虫病的报道，该病在我国呈现流行性，在温热潮湿的春、夏、秋季都会发病，有蜱滋生的地方都会引起该病的流行传播。在治疗方面，贝尼尔被认为是临床上最有效的杀巴贝斯虫的药物，但临床研究发现，即使在正常的使用范围内，也会发生一定的毒性反应，甚至死亡，增加治疗难度（龚大春2007）。因此，了解该病的致病作用及病理变化，对巴贝斯虫病的治疗和预防工作能起到重要的指导作用。本研究对西安西北农林科大宠物医院2015年1-12月共83例犬吉氏巴贝斯虫病的临床症状、流行特点、实验室检查及治疗效果等进行了调查分析。2.1材料2.1.1病例资料的收集本研究中的83例犬吉氏巴贝斯虫病病例均来自西安西北农林科大宠物医院，收集时间自2015年1月至2015年12月期间所有犬吉氏巴贝斯虫病的病例（见附录1）。2.1.2主要仪器设备日本西森美康全自动血液分析仪（XT-2000i）；日本富士全自动干式生化分析仪（FUJIDRI-CHEM4000ie）；显微镜（NiKon50i）。2.1.3主要药物比利时焦虫针：250mg/支，主要成分为三氮脒，灭菌生理盐水稀释后肌肉或皮下注射，剂量为10mg/kg；血虫清片：50mg/片，口服5mg/kg；头孢曲松钠：静脉注射1g/支；氨苄西林钠：静脉注射0.5g/支；维生素B6：1ml:50mg；维生素B12：1ml:0.5mg；辅酶A：100IU；肌苷：2ml:100mg；葡萄糖酸钙：10ml:1g；碳酸氢钠：10ml:0.5g；犬促红素注射液：1000IU；右旋糖酐铁：2ml:0.2g。2.2方法2.2.1问诊及临床症状观察问诊是通过主人的描述，对病情有初步的认识和了解。通过问诊了解既往病史、起病原因、发病经过及治疗过程。询问主人患犬以往是否感染过巴贝斯虫；起病原因，主要了解患犬近期是否外出旅行及是否在草地活动；发病经过主要包括患犬近期的精神状况、饮食情况、体重变化、尿液颜色及粪便情况等，询问患犬是否经过治疗以及病情的11 变化。临床症状观察的内容包括：检查动物体表是否有蜱虫，特别在头面部、耳缘、颈部及四肢内侧；测量体温、心率、呼吸、体重；观察可视黏膜颜色，包括眼结膜和牙龈；触诊动物内脏器官，主要包括脾脏及肝肾脏大小。2.2.2实验室检查血细胞计数：病犬静脉采血后注入EDTA-K2抗凝管中充分混匀，应用Sysmex1800IV全自动血细胞分析仪进行血常规检测。主要监测WBC（白细胞）、RBC（红细胞）、HGB（血红蛋白）、HCT（红细胞压积）、MCV（红细胞平均体积）、MCH（平均血红蛋白量）、MCHC（平均血红蛋白浓度）和PLT（血小板）的变化。虫体检查：患犬静脉采血后用新鲜血液或用EDTA-K2抗凝后的血制作血涂片，自然风干后用瑞时-吉姆萨染液染色。应用NikonECLIPSE50i显微镜，用1000倍油镜观察。主要观察病原在红细胞内的形态，感染程度和治疗期间虫体数量的变化，以及治疗期间红细胞形态的变化。生化检查：病犬静脉采血后注入肝素钠抗凝管中充分混匀离心后，应用FUJIFILM4000ie全自动干式生化分析仪进行血液生化检查，主要包括肝脏和肾脏功能检查。主要涉及的指标有：BUN、CRE、Ca、ALT、AST、ALP和TBIL。2.2.3诊断该病主要根据临床症状，结合血液涂片检查发现红细胞内的犬吉氏巴贝斯虫体即可确诊。2.2.4治疗该病的治疗宗旨为：杀虫药物的使用、对症治疗和营养支持疗法，严重贫血时，首先对患病犬进行输血治疗，以及时缓解贫血症状。2.2.4.1药物杀虫治疗该病的杀虫药物选择比利时焦虫针，即三氮脒，剂量为10mg/kg，通过肌肉或皮下注射，一个疗程7d，分别在，第1d、第3d、第7d各注射1次。一个疗程后进行复测，主要包括：血液常规检查、肝肾功能检查和巴贝斯虫数量统计。当患犬虫体数维持在较低数量时，为避免三氮脒造成的肝肾损伤，可口服盐酸多西环素，每日5-10mg/kg，最多时可连续服用15d。2.2.4.2对症治疗和支持疗法抗菌消炎可选用氨苄西林钠、头孢曲松钠、阿奇霉素及地塞米松等；解除酸中毒可用碳酸氢钠；抗贫血、促进红细胞生成可选用维生素B12、促红细胞生成素、右旋糖酐铁、补血肝精；保肝、促进肝细胞生长选用肝泰乐、肌苷、白蛋白；根据机体脱水程度补充液体，可用生理盐水、5％葡萄糖注射液、复方氯化钠、糖盐水等；解毒、补充能12 量可选用VC、VB1、VB6、辅酶A、ATP等；为提高动物钙含量，可静脉注射葡萄糖酸钙。2.2.4.3输血治疗在临床上没有一个特定的红细胞压积临界值作为输血的标准，而是根据患犬的临床症状和虫体的感染数量及引起的并发症综合考虑。输血前首先对供血犬和受血犬进行交叉配血试验，只有结果为阴性时才能进行输血。为防止输血过程中发生过敏反应，一般会在输血前30min肌注解毒敏或盐酸苯海拉明。在83例病例中，有56例有完整治疗记录，其中未经过输血的16例占29％（16/56）；经过输血治疗的占71％（40/56）。患犬输血后精神即刻好转，有饮食欲。2.3结果2.3.1临床症状患犬经常因饮食欲下降，精神沉郁，不愿意活动前来就诊。主诉所有患犬有进山或在草地活动的情况，仅7.2%（6/83）的患犬主人检查患犬身上发现蜱虫；体温升高，61.4%（51/83）的患犬体温>39.2℃；25.3%（21/83）贫血严重的犬出现心率加快，呼吸急促甚至喘息的症状。多数患犬粪便软呈黑色。所有患犬的尿液呈深黄色或褐色，可视黏膜变淡或苍白，有1例（1.2%）继发免疫介导性贫血的患犬出现脾脏肿大，1例（1.2%）贫血严重的患犬出现肺水肿、咳嗽，甚至腹水，极度消瘦。统计结果见附录2。2.3.2流行病学2.3.2.1发病月份本研究所统计的巴贝斯虫病例均来自西安西北农林科大宠物医院，自2015年1月至2015年12月期间前来就诊的病例，共83例，且感染的巴贝斯虫病原从形态学上诊断均为吉氏巴贝斯虫。统计结果显示，1月、2月和3月均无前来就诊的病例，而从4月到12月期间陆续有巴贝斯虫感染病例，因此，本病的流行时间在春、夏、秋季，这也符合其中间宿主“蜱”的活动季节，所以也证实了犬巴贝斯虫病的分布和发病季节与蜱的分布和活动季节密切相关这一说法。其发病月份统计结果见图2-1，由图可知，本病的发病时间为当年4月至12月，其中9-10月为高发期，该期间病例占全年的60.2%（50/83），4月份发病占3.6%（3/83），5月占9.6%（8/83），6月占6.0%（5/83），7月占4.8%（4/83），8月和11月均占7.3%（6/83），12月占1.2%（1/83），1-3月未见发病。13 图2-183例犬吉氏巴贝斯虫病发病月份分布情况Fig.2-1OnsetdistributionofthemonthofCanineBabesiaGibsoniin83cases2.3.2.2发病年龄及性别、品种分布83例犬巴贝斯虫病的发病年龄分布情况见表2-1，由表2-1可知，该病的高发年龄为1-5岁，该期间病例比例高达67％（56/83）；其次是6-10岁，占18％（15/83）；7-12月占10％（9/83）；3-6月占2.4％（2/83）；超过10岁的犬占1.2％（1/83），而小于3月龄的犬没有发生。这可能与青年犬常被带去草丛活动而老龄和幼龄犬不常常外出活动有关。附录1病例统计结果显示，雌犬发病率占30.2%（25/83），雄犬发病率占69.8%（58/83），并且，任何品种的犬均可感染此病，吉氏巴贝斯虫病的感染没有种属特意性，其中泰迪的发病率最高，达34.9%（29/83），这可能是因为西安地区饲养泰迪的数量较多引起的。表2-183例犬巴贝斯虫病发病年龄分布Table2-1Agedistributionof83casesofBabesiosisincanine年龄＜3月3-6月7-12月1-5岁6-10岁>10岁Age＜33to67to121to5years6to10＞10yearsmonthsmonthsmonthsyears病例量（个）02956151Casesize2.3.3实验室检查结果2.3.3.1血常规检查结果血常规检查主要包括红细胞，白细胞和血小板。而评估红细胞的指标主要包括红细胞数量（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT），红细胞数量检查结果见附14 录2。当动物感染巴贝斯虫发生贫血时，RBC、HGB、HCT都会降低。HCT是红细胞与全血的百分比，它最能直观反应机体贫血的严重程度。红细胞平均体积（MCV）是在HCT和RBC测定之后计算所得，计算公式为：MCV（fL）=（血细胞比容/红细胞数）×1015。因为巴贝斯虫病属于再生性血管内溶血性贫血，所以在外周血中会出现大量幼稚且体积较大的新生红细胞，造成MCV的升高。平均血红蛋白浓度（MCHC）是MCH和MCV的计算所得，计算公式为：MCHC（g/L）=血红蛋白/血细胞比容。因为巴贝斯虫感染引起的贫血属于低色素大红细胞贫血，所以MCHC一般都会有不同程度的降低。红细胞分布宽度，代表着红细胞大小不异的程度，因巴贝斯虫感染造成大量体积较大的新生红细胞被释放进入外周血，造成红细胞分布宽度增大（周济众2016）。在83个样品中，严重贫血（HCT<15%）的病例占38.5%（32/83），中度贫血（30%>HCT>15%）的占33.7%（28/83），轻度贫血（HCT>30%）的占27.8%（23/83）。发病初期白细胞数量（WBC）正常，随着病情的发展白细胞数量逐渐增高，病情好转的患犬白细胞逐渐降低，直至正常。应该注意的一点是，因为在进行白细胞计数时，血球仪会将新生的有核红细胞当成白细胞计入到白细胞，而造成白细胞的假性升高和红细胞的假性降低，所以确诊为巴贝斯虫的病例都应该制作血涂片，进行白细胞的分类，将有核红细胞单独计数，以排除对白细胞计数的干扰。巴贝斯虫病的感染常常造成血小板（PLT）的减少，其发病机制尚不明确，可能与脾脏机能亢进有关，大量的血小板被“扣押”在脾脏，还可能与溶血造成的凝血性消耗相关（周济众2016）。83例样本中100%出现了PLT的降低，血常规检查结果见表2-2。表2-2病犬的血常规检查Table2-2Caninesbloodtests患病犬正常值SickcaninesNormalvalue白细胞/（×109·L-1）6.49~22.876~7红细胞/（×1012·L-1）0.55~6.155.5~8.5血红蛋白/（g·L-1）13.2~78.2120~180红细胞压积/%7~40.837~55血小板/（×109·L-1）4~65150~5002.3.3.2血涂片检查结果采取动物静脉血后制作血涂片，自然风干后用自配的瑞-吉氏染液进行染色，在1000倍油镜下观察，红细胞内可见圆点状、指环状、小杆状及空泡状虫体。染虫红细胞内大多可见1-2个虫体，少数情况下可看到两个以上的虫体。除了能观察到虫体外，血涂片还可发现红细胞大小不等，出现球形红细胞，并可见大量新生有核红细胞和网织红细胞。83个样本的血涂片检查均为吉氏巴贝斯虫，由附录2统计可见，患犬血涂片中，<5个吉氏巴贝斯虫/视野的比例占34.9%（29/83）；5-10个虫体/视野的占31.3%（26/83）；15 11-20个虫体/视野的占20.5%（17/83）；>20个虫体/视野占13.3%（11/83），感染病例中有两例为特重度感染，每个视野中虫体数量超过40个。轻度感染的犬一般症状较轻，恢复较快；重度感染的犬一般病程较长，恢复较慢，且易诱发自身免疫介导性溶血性贫血及肾脏衰竭和/或肝脏病变。红细胞内吉氏巴贝斯虫的形态见图2-2、图2-3、图2-4、图2-5。图2-2瑞-吉氏染色1000倍油镜下观察的结果，可见一个红细胞内有十几个圆点状虫体（a）和指环状虫体（b）Figure2-2Swiss-Kyrgyzstanstained1000timestheresultsofobservationundertheoilmicroscope,Aredbloodcellcanbeseenadozendot-likeparasites(a)andringparasites(b)图2-3瑞-吉氏染色1000倍油镜下观察，可见两头着色的杆状虫体（c）并表现出红细胞大小不等，可见球形红细胞（d）Fig.2-3Observingunder1000timesoftheSwiss-Kyrgyzstanstainedoilmicroscope,thetwocoloredrod-shapedparasites(c)withdifferentsizesofredbloodcellandsphericalredbloodcells(d)canbeseen16 图2-4瑞-吉氏染色1000倍油镜下观察，可见空泡状虫体（e），这为经治疗后的血涂片，红细胞内呈现焦虫脱落像，虫体细胞核消失只见胞浆部分，呈现无着色的空泡Fig.2-4Observingunder1000timesoftheSwiss-Kyrgyzstanstainedoilmicroscope,emptybubble-shapedparasites(e)canbeseen,whichisbloodsmearaftertreatmentthatshowsCokewormofflikewithinredbloodcells,insectcellnucleidisappearingandonlythecytoplasmleft,andnocoloredvacuolesappeared图2-5瑞-吉氏染色1000倍油镜下观察，可见蓝红色未成熟的多染性红细胞（f），血涂片中有一个有核红细胞（g）Fig.2-5Observingunder1000timesoftheSwiss-Kyrgyzstanstainedoilmicroscope,blue-redimmaturepolychromaticerythrocytes(f)andanucleatedredbloodcells(g)amongbloodsmearcanbeseen17 2.3.3.3血液生化检查结果血液生化检测结果显示：患病犬都伴随着总胆红素（TBIL）不同程度的升高及钙（Ca）的降低；轻度感染的患犬各生化指标变化都不明显，但有些重度感染的患犬会出现谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）的升高。83个样本中，TBIL都有不同程度的升高，其中18%（15/83）的病犬TBIL超过机器测量最大范围，这主要是破坏红细胞造成溶血导致的，大量TBIL的生成超过了肝脏的代谢范围，此为肝前性的高胆红素血症。肝脏功能检查主要包括ALT，AST和ALP，19.3%（16/83）的患犬AST和ALT同时升高，28.9%（24/83）的患犬ALP升高。肝酶的升高主要是由于肝脏缺氧和大量胆红素的形成增加了肝脏负担。ALT是犬猫肝脏特异性指标，当动物肝脏受损时此酶会升高。虽然横纹肌中也会含有ALT，但是横纹肌损伤时ALT值增加不会超过正常范围3倍的，而肝脏受损时ALT会超过正常值3倍以上。AST不是肝脏特异性酶，其存在于动物肌肉、肝脏、心肌，也有少部分存在于红细胞内，所以AST的升高，部分原因可能是溶血造成的（周桂兰2015）。据本次统计，83个样本中有21.7%（18/83）的病例出现BUN和CRE的升高，BUN和CRE是肾脏功能的指标，严重巴贝斯虫感染常常并发肾脏衰竭，这可能是肾脏缺氧和血红蛋白尿导致的肾小管坏死和损伤造成的（Camachoetal.2004;Camachoetal.2005）。2.3.4诊断结果本病的确诊主要依据既往病史和现病史，临床症状和实验室检查进行确定。当动物有在草地和进山等外出活动，并且临床表现黏膜苍白、体温升高、精神沉郁和血红蛋白尿；血涂片检查发现红细胞内的吉氏巴贝斯虫体；血常规检查出现贫血和血小板降低等即可确诊。2.3.5治疗结果2.3.5.1输血治疗结果本次调查的83个患病犬中，有56例有完整治疗记录，其中接受输血治疗的占71%（40/56），未接受输血的占29%（16/56）（见附录1）。输血的37例病犬输血后精神明显好转，食欲增加，这说明输血对本病的治疗起到了最直接有效的补充血容量缓解临床症状的作用。本次统计发现，当动物的HCT<20%时就会进行输血治疗，输血前要进行交叉配血凝集试验，结果为阴性时才能输血，统计结果显示，即使输血前进行了配血试验也没能避免一例犬发生了迟发性溶血导致死亡。输血量从21ml/kg-43ml/kg不等，这主要是根据动物贫血程度和临床表现决定的，建议输血时一次量输够，避免反复少量的输血，以降低溶血的发生。18 2.3.5.2驱虫治疗本次调查的56例有完整记录的病例，治疗吉氏巴贝斯虫的药物都选择比利时焦虫针结合抗生素，并对症治疗，对于虫体量较低的顽固性病例，口服盐酸多西环素有理想效果。2.3.5.3治疗结果分析大部分病例在一个疗程（7d）后虫体数量减少，临床症状消失，少数病例会复发。56例记录完整病例中，除3例主人放弃治疗外，死亡犬5例，治愈率91％（51/56），其中1例因诱发免疫介导性溶血死亡，2例因继发肝肾功能衰竭死亡，1例因发生迟发性过敏反应死亡，1例因在它院耽误病情错过最佳治疗时间死亡。据统计，该病一般在临床治愈后1-2个月内复发，最短复发时间为一周，也有个别病例第2年复发，复发率为25%（14/56）。2.3.6治疗效果观察在治疗该病的过程中，通常治疗一周（一个疗程）后需复查血常规指标，了解病情变化调整治疗方案，随后每周复查一次，持续四周（个别特殊病例需每天检查）。图2-6、图2-7、图2-8、图2-9分别为治疗过程中每周红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板的变化曲线。图2-6白细胞变化曲线图2-7红细胞变化曲线Fig.2-6WBCcurveFig.2-7RBCcurve19 图2-8血红蛋白变化曲线图2-9血小板变化曲线Fig.2-8HGBcurveFig.2-9PLTcurve由图可知，血红蛋白，红细胞和血小板数量会随着治疗的持续不断上升，接近正常。而白细胞呈现先升高再降低的趋势。只有少数感染严重的病例，各项指标持续下降甚至死亡。2.4讨论本次统计该病的高发年龄为青壮年时期，而幼龄和老龄犬发病率较低或者不发病。83个样本中，1-5岁龄56例占67.5%，6-10岁龄15例占18.1%，7-12月龄9例占10.8%，3-6月龄2例占2.4%，>10岁龄1例占1.2%，<3月龄的未见发病。分析其原因可能是老龄犬和幼犬外出活动较少，而随着旅游业的发展，青年犬被带进山或在草地活动的机会增加，接触蜱虫的概率相应增加所致，并且该病的高发月份在春、夏、秋季，该期间为蜱的活动季节，外界环境温度适宜，并且处于犬的发情期，因此青年犬外出活动会增加。所以，在流行区内蜱虫活动季节应减少犬的外出活动，防止蜱虫叮咬，做好体外驱虫工作（陈海南2015）。该病也会垂直传播，即使母犬处于无临床症状带虫期，所生仔犬也会感染此病。本次调查的83个样本经诊断均为吉氏巴贝斯虫，未见其它类型的小巴贝斯虫和犬巴贝斯，韦氏巴贝斯等大巴贝斯虫，这与国内报道的情况相同。本病在临床确诊的主要依据为血涂片染色镜检发现虫体，但血涂片检查法受化验人员的人为影响因素较大，包括推片技巧、染色方法、染色时间、染料质量及化验人员的专业水平等方面。对于隐性感染未在临床表现期的患犬，DNA探针和PCR技术的敏感性高特异性好，但在临床还未广泛使用，对于此阶段的患犬应多次检测，以便早发现早治疗（贺卫华2010）。对处于临床表现期的动物，使用第一滴血和淡黄层血涂片的检测能提高检出率。不可忽视吉氏巴贝斯虫病的并发症。由于虫体对红细胞的破坏引起的血管内和血管20 外的溶血，导致TBIL的增多，增加肝脏代谢负担，引起肝功能障碍，加之机体供血不足，全身代谢障碍和酸碱失衡，引发实质器官如肾脏、心肌、肝脏的病变。本统计中35%（20/56）的犬继发不同程度的肝肾病，其中2例因继发严重的肝肾衰竭死亡。因此在治疗过程中应紧密检测动物状况，早做预防，防止并发症造成不良后果。犬巴贝斯虫有带虫免疫现象，经过统计发现治疗不彻底的犬，临床症状虽然消失，但镜检还有少量虫体存在。经过治疗的犬虽临床症状消失，但一旦机体抵抗力降低或受外界刺激，又会复发（陈启军1993）。统计发现，一般在第一次临床治愈后1-2月后复发，复发率为25%，因此在第一次临床治愈后叮嘱主人注意观察动物的黏膜和尿液颜色，若黏膜颜色变淡或尿液变黄甚至血红蛋白尿，应立即就诊。让动物保持安静，注意休息不能做剧烈运动，避免因劳累造成机体抵抗力降低。最后，要告知宠物主人，一旦爱犬出现贫血、黄疸、血红蛋白尿（茶色）时，特别是在4-12月蜱虫活跃的季节。此时宠主应抓住早期最佳治疗时期，及时去诊疗机构早做诊断，在虫体大量繁殖之前用杀虫药能达到更好的治疗效果。2.5结论通过本次调查西安市西北农林科大宠物医院的83例犬巴贝斯虫病病例。发现该病的流行季节为春、夏、秋季，冬季不发病；潜伏期为3-21d；发病时间从4月至12月，高发月份在9-10月，该期间的发病率占所有病例的60.2%；该病的发生无性别和品种差异性。本次调查的所有病原均为吉氏巴贝斯虫，未见其它类型的虫体。该病的诊断主要通过患犬的临床表现：贫血，黄疸，血红蛋白血和血红蛋白尿；血常规检查患犬出现RBC，HGB，HCT，PLT等不同程度的降低；血涂片中发现巴贝斯虫体等来确诊。此次研究中的所有患犬对三氮脒的治疗效果较理想，治愈率为91%，但该病有带虫免疫现象，当动物抵抗力降低时易复发。复发时间为第一次临床治愈后的1-2个月，个别病例第2年复发，复发率为25%。预防蜱虫的叮咬是预防该病的关键，因此在流行季节及流行区域内应做好体外驱虫工作。21 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附录1犬巴贝斯虫病例统计结果是否输血时间病例量编号性别年龄品种复发时间是否治愈BloodTimeAmountNO.GenderAgeVarietyReTimeCuredtransfusion1雄4岁拉布拉多未复发-√2015年32雌5岁金毛未复发-放弃治疗4月3雌3岁雪纳瑞未复发+√4雄5.5岁史宾格——————5雄6岁京巴未复发+√6雌1.5岁博美——————2015年7雌3岁串犬未复发+√85月8雄2岁金毛未复发+√9雄1岁拉布拉多——————10雄3岁苏牧未复发+√11雄2岁串犬——-——12雄3岁雪纳瑞2月后-√13雄1.5岁串犬——————2015年514雌1岁泰迪1月后+√6月15雄6岁串犬未复发+√16雌2岁德牧——————17雄7月阿拉斯加——————2015年18雄7岁串犬——————47月19雌1岁萨摩未复发-√20雄2岁金毛15d+死亡21雄8月泰迪未复发+√22雌5岁贵宾1.5月+√2015年23雌3岁吉娃娃未复发+√68月24雌7月萨摩——————25雄3岁比特未复发+死亡26雄2岁秋田未复发+√27雄10岁北海道未复发+√28雌2.5岁泰迪未复发+√29雌2.5岁串犬未复发+√2015年30雄8岁比熊1.5月————269月31雄5月史宾格——————32雄2.6岁泰迪——————33雄3岁串犬未复发-放弃治疗34雌4.5岁泰迪未复发+√27 35雌4岁泰迪2月+√36雌8岁串犬未+√37雄3岁马犬未+√38雄3岁泰迪——————39雄9月苏牧未-√40雄1.5岁松狮未-死亡41雄7岁京巴未+√42雌6岁博美未-√43雄2岁秋田——————44雌3.5岁贵宾未+√45雄1.2岁泰迪3月+√46雄17月灵提——————47雄1.4岁阿拉斯加——————48雄1.5岁比熊未+√49雌2岁泰迪2月-√50雄6.3岁贵宾1月————51雄10月泰迪1.5月后-√52雄5岁哈士奇未-√53雄7月哈士奇未+死亡54雄2岁马犬——————55雄8月金毛——————56雄10岁贵宾未+√57雄8岁贵宾未+√58雄2岁柯基未+√59雄1.1岁泰迪未+√60雌1.5岁德牧——————61雄1岁泰迪——————62雄3月边牧——————63雄4岁金毛——————2015年2464雄7.5岁串犬——————10月65雌5.5岁金毛未+√66雌18月泰迪未+√67雄7岁泰迪50d后————68雌7岁泰迪1.5月后+√69雄18月拉布拉多37d后————70雄8月泰迪未+√71雄1.5岁串犬未-放弃治疗72雌8月泰迪未+√73雄12岁巴哥未+√74雄1.5岁比熊——————75雄3岁串犬未-√28 76雄5岁泰迪2月后+√77雄1.5岁泰迪未+√78雄1.8岁串犬未+√2015年79雌2.5岁串犬未-√611月80雄1岁泰迪未+死亡81雌5岁贵宾未+√82雄4岁萨摩未-√2015年183雄8岁串犬未-√12月注：“——”表示无记录“+”表示输血“-”表示未输血“√”表示治愈29 附录283例犬巴贝斯虫病的临床特征及检查结果编号黏膜苍血红蛋白尿体温食欲精神状每个视野下虫红细胞数No.白度程度BodyAppeti况体数（个）NumberofredMucosalHemoglobinutemperaturteMentalNumberofbloodcellspalenessrialevelestatusparasitesin（1012/L）()℃eachfield(number)1++39.1减退沉郁54.252++++++40.0废绝嗜睡>101.033+++++39.8废绝嗜睡101.654++38.9减退稍差偶见5.215+++++39.5废绝嗜睡121.646++++38.7减退沉郁偶见3.027++++++40.1废绝嗜睡偶见1.028++++++39.7废绝嗜睡>101.659+++++38.9减退沉郁203.1510++++39.5废绝沉郁3~52.7011++39.3减退沉郁24.4112+++39.1减退沉郁3~53.4013++39.0减退稍差2~35.2914++++++40.0废绝嗜睡200.9515++++++39.9废绝嗜睡200.9316++38.6减退沉郁0~15.0217++38.5减退稍差2~45.1618++38.9减退沉郁2~34.5019++39.1减退沉郁14.2620++++++39.8废绝嗜睡91.6521++++++39.6废绝很差250.5922++++++39.7废绝嗜睡5~81.1023++++++39.5废绝嗜睡52.324+++++39.2废绝嗜睡3~52.8625++++++40.1废绝嗜睡10~151.7026+++++39.8减退嗜睡5~102.627++38.5减退沉郁3~55.0128+++++39.3减退嗜睡15~202.7929++++++38.8废绝嗜睡15~202.4830++++++39.9废绝嗜睡32.1831--38.8良好良好偶见6.1532++++++39.6废绝嗜睡1~22.3233++++++40.1废绝嗜睡400.9330 34++++++39.5废绝嗜睡51.1935++++39.1减退沉郁2~32.6336++++++39.6废绝嗜睡202.0937++++39.7减退沉郁102.2138++++++39.8废绝嗜睡200.5539++++39.5减退沉郁53.0740++38.9良好良好偶见3.8941+++39.2减退沉郁82.3842++++38.8减退沉郁203.8543+++39.4减退沉郁203.5944++++++39.8废绝嗜睡71.9045++++++40.0废绝嗜睡20~301.0146++39.0减退沉郁54.5547++++39.5减退沉郁102.2448+++++39.4减退沉郁152.2049+++38.9减退沉郁103.9550++++++39.4废绝嗜睡301.9651++39.1减退沉郁103.3852+++38.6减退沉郁104.6353+++++39.3废绝嗜睡302.4654++++++39.6废绝嗜睡101.1455++++++39.8废绝嗜睡15~201.3656++++++39.7废绝嗜睡801.6857++++++40.0废绝嗜睡101.7058+++39.5减退沉郁53.0859++++++39.9废绝嗜睡81.2460+++39.0减退沉郁204.0661+++++39.8减退沉郁51.5862++38.7减退沉郁24.6663++39.1减退沉郁3~54.5764++39.2良好稍差2~55.6965+++++39.8减退沉郁6~81.7466+++++39.6废绝嗜睡81.9567++++++40.1废绝嗜睡10~151.0668++++++39.8废绝嗜睡101.7669++38.9减退沉郁偶见4.2370++++++39.5废绝嗜睡151.6471-+39.0良好稍差5~86.1272+++39.7减退沉郁0~32.7073+++++39.5减退沉郁5~61.4574++38.7减退沉郁1~24.5031 75+++39.7减退沉郁0~22.5476+++39.1减退沉郁53.6877++38.9减退沉郁54.1578++++++39.8废绝嗜睡151.7579-+39.2减退沉郁25.9280+++++39.5减退嗜睡41.3881++++++39.4废绝嗜睡251.3582++39.3减退沉郁45.6283+++39.5减退沉郁偶见2.32注：其中黏膜苍白度和血红蛋白尿程度，按照严重程度将其分为轻度、中度及重度，分别用“+、++和+++”表示32 作者简介陈冰洁，女，汉族，1989年出生于陕西渭南。2008年9月至2011年7月就读于杨凌职业技术学院。2011年7月至今在西北农林科大宠物医院工作，工作期间攻读西北农林科技大学自考本科和在职硕士。2012年获得西北农林科技大学自考本科学历证书。2014年10月在职考取西北农林科技大学动物医学院临床兽医，攻读兽医硕士，师从李勤凡老师。在研究生学习期间发表的文章有2篇。1.陈冰洁,李勤凡,权中会,等.83例犬吉氏巴贝斯虫病的流行病学特点与治疗效果分析[J].畜牧与兽医,2017,49(4):99-102.2.权中会,陈冰洁,郑博方,等.477例门诊犬寄生虫种类和感染情况的调查[J].动物医学进展,2016,37(11):118-122.33