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1、农业环境科学学报2006,25(5):1281-1284JournalofAgro-EnvironmentScience牛血清乙酰胆碱脂酶的分离纯化裴瑞瑞1，黄永春1,2，何丽丽3，傅学起1（1.南开大学环境科学与工程学院，天津300071；2.农业部环境保护科研监测所，天津300191；3.天津理工大学生化学院，天津300191）摘要：以牛血清为原材料，采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶柱和DEAE-纤维素DE23柱层析对牛血清中的乙酰胆碱酯酶进行分离纯化。结果表明，经以上三步分离纯化后，可获得电泳纯的乙酰胆碱酯酶，最终收集的酶液经聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳鉴定后
2、，仅出现一条谱带；对SephadexG-100凝胶和SephadexG-75凝胶分离纯化乙酰胆碱脂酶的效果进行了比较,发现两者对乙酰胆碱酯酶的分离效果相差不大。关键词：牛血清；提纯；胆碱酯酶中图分类号：Q55文献标识码：A文章编号：1672-2043(2006)05-1281-04PurificationofAcetylcholinesterase（AChE）fromBovineSerumPEIRui-rui1,HUANGYong-chun1,2,HELi-li3,FUXue-qi1(1.CollegeofEnvironmentalScienceandEngineering,Nanka
3、iUniversity,Tianjin300071,China;2.Agro-EnvironmentalProtectionInsti-tute,Tianjin300191,China;3.SchoolofBiologyandChemistry,TianjinUniversityofTechnology,Tianjin300191,China)Abstract:Acetylcholinesterasewaspurifiedfrombovineserum.Ammoniumwasaddedtobovineserumtoform25%saturatedsolutionwhichwasstor
4、edinfridgeat4℃overnight,thentheprecipitationwasdiscarded.Ammoniumwasaddedtothesupernatanttogettheconcentrationof35%saturation.Aftercentrifugationat6000r·min-1for15minat4℃precipitatewascollectedanddissolvedinbufferA(100mMphos-phate(pH8.0)).Ammoniumwasaddedtothesupernatanttoincreasetheconcentratio
5、nto45%and60%saturationrespectivelyinthesamewayabove.TheenzymesolutionfrompreviousstepwasloadedontoSephadexG-100column(1.6cm×50cm)andDEAE-celluloseDE23chromatographycolumn(1.0cm×40cm).Afterthethreepurificationsteps,thefinalpurifiedAChEwasidentifiedtobehomogeneousbypolyacrylamidegelelectrophoresis
6、.TherewaslittledifferencebetweenthepurifiedeffectbetweenSephadexG-100gelandSephadexG-75gel.Keywords:bovineserum;purification;acetylcholinesterase有机磷、氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶特性,其中一些酶是解毒酶,能够催化水解农药,也有（AChE）有强烈的抑制作用，主要是它们能够与AChE一些酯酶能够作为AChE的替代靶标,起到保护的活性部位快速不可逆地结合，使酶失活，从而引起[3]。所以实验中用粗酶液作为AChE酶源AChE的作用中毒[1]。利用
7、这一特性，国内外常用乙酰胆碱酯酶抑制来测定AChE的动力学特性和抗抑制性所得的结果,技术快速检测此类农药的残留[2]。该酶广泛存在于各不能真实地反映出底物与酶以及毒剂与酶的作用关种动物组织中，如脑、红血球、鱼肉组织和动物血清系,如果能用分离纯化后的酶液作为酶源,则能避免这中，但从动物组织中提取的粗酶液中除了含有AChE些问题,因此有必要加强对生物中AChE分离和纯化外,还有其他多种酶类存在,会显著影响到酶的动力学的研究。本实验以来源广泛的牛血清
