DB34∕T 3474-2019 饲料中黄芩苷的测定 高效液相色谱法(安徽省)

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1、TCS65.120B46DB34ET山巳....l-.且，文徽省万标准DB34/T3474-2019饲料中黄苓昔的测定高效液相色谱法Determinationofbaicalininfeeds-Highperformanceliquidchromatography2019-12-25发布2020-01-25实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3474--2019目IJ1=1本标准按照四月1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:安徽安丰堂动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、东至县畜

2、牧兽医局、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所。本标准起草人:刘发全、f可宗来、周宏华、谢军池、明文庆、陈文帮、王群、丁常宏。DB34/T3474--2019饲料中黄苓昔的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中黄苓昔含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预泪合饲料中黄苓昔含量测定。本方法检测限为1.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，{叉所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB!T66

3、82分析实验室用水规格和试验方法GB!T14699.1饲料采样GB!T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的黄苓昔用甲醇水溶液超声提取，经离心、过滤后的试样溶液注入高效液相色语系统中进行分离，用紫外检测器检测，外标法计算黄苓昔的含量。4试剂和材料4.1除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为亲情水，包谱用水为去离子水，符合GB!T6682中一级用水规定。4.2甲醇:色谱纯。4.3乙睛:色谱纯。4.4甲醇水溶液50%(V十V)。4.5磷酸。4.6流动相A:磷酸溶液(0.025mol/U04.7流动相B:乙睛。4.8黄苓昔CAS号

4、21967-41-9，纯度三98.0%04.9黄苓昔标准溶液的制备4.9.1黄苓昔标准溶液贮备液:精确称取20mg黄苓昔标准品(精确至O.01mg)于200mL容量瓶中，用流动相(4.6)溶解，冷却，此溶液浓度为100μg/mL。置于40C冰箱中保存，有效期60天。4.9.2黄苓昔标准工作溶液:分别吸取贮备液(4.9.1)1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容，标准工作溶液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5f.lg/mL、10μg/mL、20f.lg/mL5仪器和设备DB34/T3474-

5、-20195.1高效液相色谱仪(配紫外检测器)。5.2分析天平:感量O.1mg、0.01mg。5.3离心机:呈3000r/mi口。5.4超声波仪。5.5分析筛:孔径。.42mmo5.6粉碎机。5.7微孔滤膜:孔径O.45μm尼龙滤膜。6试样的制备按GB!T14699.1的规定采样，选取有代表性饲料样品500g以上，四分法缩减至100g:按GB/T20195的规定制备样品，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1试样的提取7.1.1称取试样适量(配合饲料5.0g，浓缩饲料3.0g，预混合饲料1.0g)，精

6、确至0.001g，置于100mL磨口三角烧瓶中，准确加入甲醇溶液(4.4)50此，置于超声波仪(5.4)超声提取30mino7.1.2取试样提取液C7.1.1)20mL转移至高心管，3000r/min，离心10min，取高心上洁液2mL,用0.45川尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定，同时进行两份平行试验。7.2参考色谱条件7.2.1色谱柱Cl~型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径511m，或相当性能Cl~柱:7.2.2检测波长277nm:7.2.3流动相A:磷酸溶液(0.025mol/L)B:乙睛，梯度淋洗，见表1;7.2.

7、4流速1.0mL/min;7.2.5柱温:室温:7.2.6进样体积20μL。7.3测定黄苓昔标准工作溶液(4.9.2)和试液C7.1.2)分别进样得到色谱峰面积响应值，按表I进行高效液相色谱淋洗梯度洗脱，在线性范围内，用外标法校正，测定，以保留时间定性，峰面积定量。黄苓昔标准色谱图参见附录A中图A.1o表1流动相梯度淋洗表时间/minA:磷酸溶液/%B:乙睛/%O.0084.016.012.0084.016.016.0068.032.023.0068.032.027.0084.016.030.0084.016.02DB34/T3474

8、--20197.4结果的计算与表述7.4.1计算公式结果按式(1)计算:OyF-•H'''Fm.(1)式中:X试样中黄苓昔含量，单位为毫克每千克(mg/kg)C一一试液色谱峰对应的黄苓音浓度，单位为微克每毫升(μg/mL