SN∕T 5437-2022 出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法

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ICS67.050CCSC53中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5437—2022出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法Determinationofdiphenhydramineresidueinfoodstuffsofanimaloriginforexport—LC-MS/MSmethod2022-03-14发布2022-10-01实施中华人民共和国海关总署发布

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2前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国合肥海关技术中心、中华人民共和国青岛海关、中华人民共和国天津海关。本文件主要起草人:吕亚宁、韩芳、郑平、王萍、张利刚、宋伟、丁磊、周典兵、盛旋。Ⅰ

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4SN/T5437—2022出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了出口动物源食品中苯海拉明残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾、猪肠和牛奶等动物源性食品中苯海拉明残留量的定量测定和确证。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法提要试样中的苯海拉明用三氯乙酸-乙腈溶液提取,提取液经强阳离子交换固相萃取柱净化,液相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法定量。5试剂和材料除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。5.1乙腈:色谱纯。5.2甲醇:色谱纯。5.3甲酸:色谱纯。5.4正己烷:色谱纯。5.5三氯乙酸。5.6氨水:含量为25%~28%。5.7苯海拉明标准物质:C17H22ClNO,CAS号.147-24-0,纯度大于等于99%。/mL。5.8氘代苯海拉明标准溶液:C17H18D3NO,CAS号.170082-18-5,100μg5.91%三氯乙酸溶液:称取10g三氯乙酸(4.5),用水溶解,定容至1000mL,混匀。5.101%三氯乙酸-乙腈溶液(3+7,体积比):量取300mL1%三氯乙酸溶液(4.9)和700mL乙腈(5.1),混匀,现用现配。5.1120%氨水甲醇溶液:量取20mL氨水(5.6)和80mL甲醇(5.2),混匀。1

5SN/T5437—20225.120.1%甲酸溶液:量取1.0mL甲酸(5.3),用水定容至1000mL,混匀。5.130.1%甲酸-乙腈溶液(95+5,体积比):量取5mL乙腈(5.1),用0.1%甲酸溶液(5.12)定容至100mL。5.14苯海拉明标准储备液:准确称取适量盐酸苯海拉明标准品(5.7),用少量水溶解后,再用乙腈(5.1)定容,配制成浓度为100mg/L的标准储备液,于0℃~4℃冷藏避光保存,有效期6个月。5.15苯海拉明标准中间液:准确吸取苯海拉明标准储备液(5.14)1mL于100mL容量瓶中,用乙腈(5.1)定容至刻度,配制成浓度为1mg/L的标准中间液,于0℃~4℃冷藏避光保存,保存期3个月。5.16苯海拉明-D3内标工作液:准确吸取苯海拉明-D3标准溶液(5.8)0.5mL于100mL容量瓶中,用乙腈(4.1)定容至刻度,配制成浓度为500/L的内标工作液,于0μg℃~4℃冷藏避光保存,保存期3个月。5.17标准工作溶液:准确吸取一定量苯海拉明标准中间液(5.15)和苯海拉明-D3内标工作液(5.16),用0.1%甲酸溶液-乙腈溶液(5.13)配制成浓度分别为1/L、2/L、5/L、10/L、μgμgμgμg/L的系列标准工作液(苯海拉明-D的内标浓度为10/L),于050μg3μg℃~4℃冷藏避光保存,保存期1个月。5.18CNWBONDSCX固相萃取柱:苯磺酸型强阳离子交换柱,500mg,6mL,或相当者。使用前依次用5mL甲醇、5mL水和5mL1%三氯乙酸溶液-乙腈溶液(5.10)活化,保持柱体湿润。。5.19微孔滤膜:通用型,0.22μm6仪器和设备6.1液相色谱-质谱/质谱仪,配电喷雾离子源(ESI)。6.2分析天平:感量分别为0.0001g和0.01g。6.3组织捣碎机。6.4均质器:转速不低于10000r/min。6.5超声波振荡器。/6.6冷冻离心机:转速不低于8000rmin。6.7固相萃取装置。6.8氮吹仪。6.9涡旋混合器6.10pH计。6.11离心管:聚乙烯,具塞,50mL。6.12比色管:25mL。7试样的制备和保存7.1猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和猪肠取有代表性样品约500g,用组织捣碎机充分捣碎,均分成两份,分别装入洁净的容器内,密封并标明标记。如非立即进行前处理,于-18℃下冷冻保存。7.2牛奶取有代表性样品约500g,充分混匀,均分成两份,分别装入洁净容器,密封并标明标记,于0℃~4℃冷藏保存。2

6SN/T5437—20228测定步骤8.1提取与净化8.1.1猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和猪肠称取约2g试样(精确到0.01g)于50mL具塞离心管中,准确加入100μL苯海拉明-D3内标工作液(5.16)和20mL1%三氯乙酸-乙腈溶液(5.10),10000r/min均质提取1min,再超声提取15min,于转速8000r/min,温度4℃以下,离心10min。收集上清液于25mL比色管(5.12)中,用氨水(5.6)调节pH至5,加水定容至25mL,待净化。精确移取5的流速通过已活化的SCX固相萃取柱(5.18),待样液全mL提取液,以不超过1mL/min部通过后,依次用5mL水、5mL甲醇(5.2)淋洗小柱,弃去全部流出液,减压抽至近干。先后用6mL20%氨水甲醇溶液(5.11)和4mL乙腈(5.1)洗脱,收集全部洗脱液,于40℃下氮气吹干,准确加入1.0mL微孔滤膜(5.19),供液相色谱-质谱/质谱仪测定。0.1%甲酸-乙腈溶液(5.13)溶解残渣,过0.22μm8.1.2牛奶称取约2g试样(精确到0.01g)于50mL具塞离心管中,准确加入20μL苯海拉明-D3内标工作液(5.16)和15mL1%三氯乙酸-乙腈溶液(5.10),超声提取15min。提取液用氨水(5.6)调节pH至5,待净化。将全部提取液以不超过1的流速通过已活化的SCX固相萃取柱(5.18),待样液全部通过mL/min后,依次用5水、5mLmL甲醇(5.2)淋洗小柱,弃去全部流出液,减压抽至近干。先后用6mL20%氨水甲醇溶液(5.11)和4mL乙腈(5.1)洗脱,收集全部洗脱液,于40℃下氮气吹干,准确加入1.0mL微孔滤膜(5.19),供液相色谱-质谱/质谱仪测定。0.1%甲酸-乙腈溶液(5.13)溶解残渣,过0.22μm8.2测定8.2.1液相色谱条件液相色谱条件参考如下:,2.1a)液相色谱柱:C18柱,1.8μmmm×50mm(内径)或相当者;b)柱温:30℃;c)流速:0.3mL/min;d)流动相:A为0.1%甲酸水溶液,B为乙腈,流动相梯度洗脱程序见表1。。e)进样量:5μL表1流动相梯度洗脱程序时间/minA/%B/%0.0095.005.001.0095.005.002.0060.0040.004.0060.0040.004.0195.005.005.0095.005.003

7SN/T5437—20228.2.2质谱参考条件质谱参考条件如下:a)离子源:电喷雾离子源(ESI);b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测模式(MRM);d)雾化气、气帘气、辅助加热气和碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;喷雾电压、去簇电压、碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度,质谱参考参数参见附录A。8.2.3液相色谱-串联质谱测定8.2.3.1定性测定按照液相-质谱/质谱条件测定标准工作溶液和待测液。如果待测液中检测的质量色谱峰保留时间与标准品的保留时间偏差在±2.5%之内;定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表2的规定,且定性离子对的信噪比均≥3,则可判断样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对丰度/%>50>20~50>10~20≤10允许的相对偏差/%±20±25±30±508.2.3.2定量测定将标准工作溶液和待测液依次注入液相色谱-质谱/质谱仪中进行分析,标准工作溶液和待测液中苯海拉明和苯海拉明-D的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下,苯海拉明标准溶3液的多反应监测色谱图参见附录B。8.3空白试验除不称取试样外,按上述试样测定步骤进行。9结果计算和表述采用标准工作曲线定量,试样中苯海拉明的含量由液相色谱-质谱/质谱仪的数据处理软件或按公式(1)计算,计算结果需扣除空白值:C×V×f×1000X=…………………………(1)m×1000式中:X———试样中被测组分含量,单位为微克每千克(μg/kg);C———从标准工作曲线得到的样液中被测组分溶液浓度,单位为微克每升(μg/L);V———最终样液的定容体积,单位为毫升(mL);m———试样质量,单位为克(g);f———稀释倍数(牛奶等液体为1,其他为5)。注:结果保留3位有效数字。4

8SN/T5437—202210定量限和回收率10.1定量限猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和猪肠中苯海拉明的定量限为:5/kg。牛奶中苯海拉明的定量限μg为:1/kg。μg10.2回收率猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾、猪肠和牛奶中苯海拉明的添加水平和回收率数据参见附录C。5

9SN/T5437—2022附录A(资料性)质谱参考参数A.1质谱参考参数:a)扫描方式:ESI正离子模式;b)监测方式:多反应监测(MRM);c)干燥气温度:350℃;d)干燥气流速:8L/min;e)气帘气压力:275.8kPa;f)鞘气温度:350℃;g)鞘气流速:12L/min;h)毛细管电压:3000V;i)监测离子对、去簇电压和碰撞能量等见表A.1。表A.1苯海拉明的质谱参数定性离子对定量离子对驻留时间去簇电压碰撞电压化合物(m/z)(m/z)/ms/V/V256.0/167.16苯海拉明256.0/167.120060256.0/165.146苯海拉明-D/167.0259.2/167.02007053259.26

10SN/T5437—2022附录B(资料性)标准物质的多反应监测(MRM)色谱图标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图B.1和图B.2。a)苯海拉明定量离子对MRM色谱图b)苯海拉明定性离子对MRM色谱图图B.1苯海拉明标准溶液的MRM色谱图(2μg/L)图B.2苯海拉明-D内标物质的定量离子对MRM色谱图(103μg/L)7

11SN/T5437—2022附录C(资料性)添加水平及回收率数据苯海拉明在典型基质中的添加浓度及其回收率见表C.1。表C.1苯海拉明在典型基质中的添加浓度及其回收率添加水平/平均回收率/RSD/回收率范围/序号样品(μg/kg)%%%5.001014.5093.5~1061猪肉10.098.13.6892.5~10350.098.61.8196.4~1015.00102.05.4392.7~1082牛肉10.098.72.4096.8~10350.098.60.8097.21~99.45.001022.7898.3~1063羊肉10.01002.7897.7~10550.099.61.0298.3~1015.001001.8298.2~1034猪肝10.099.54.1693.8~10450.099.813.6296.3~1055.0098.853.5293.8~1045猪肾10.099.612.5796.5~10450.099.441.8497.7~1035.01002.9697.9~1066猪肠10.099.74.0894.6~10650.099.92.2397.7~1031.0099.70.9599.0~1017牛奶2.0099.31.7697.4~10210.099.91.6298.0~1028

122022—5437/TSN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口动物源食品中苯海拉明残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法SN/T5437—2022*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023)编辑部:(010)65194242-7530网址www.customskb.com/book中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张1字数21千字2022年9月第一版2022年9月第一次印刷印数1—500*书号:155175·825定价18.00元