DB34∕T 4208-2022 草地贪夜蛾抗药性监测技术规范(安徽省)

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ICS65.020.01CCSB1534安徽省地方标准DB34/T4208—2022草地贪夜蛾抗药性监测技术规范Guidelineforinsecticideresistancemonitoringofthefallarmyworm2022-06-29发布2022-07-29实施安徽省市场监督管理局发布

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2DB34/T4208—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽农业大学提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽农业大学、肥西县农业综合服务中心、安徽省植物保护总站、凤台县植保植检站、宿州市植检植保站、安徽省农业科学院、宿州市埇桥区大店镇农业综合服务中心、宿州市埇桥区桃园镇农业综合服务中心。本文件主要起草人：操海群、盛成旺、廖敏、蒋兴川、周建、李秀霞、李桂亭、黄超、黄勇、董永成、蒋山、高全、肖金京、郑兆阳、吴向辉、马书芳、徐丽娜、陈浩梁、张前进、梅最英。I

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4DB34/T4208—2022草地贪夜蛾抗药性监测技术规范1范围本文件规定了草地贪夜蛾[Spodopterafrugiperda(J.E.Smith)]抗药性监测的化学药剂、监测点的确定、监测方法、抗性水平的判断。本文件适用于草地贪夜蛾的抗药性监测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2058水稻二化螟抗药性监测技术规程NY/T2916棉铃虫抗药性监测技术规程NY/T3539叶螨抗药性监测技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4化学药剂氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、乙基多杀菌素、虱螨脲和其它取得登记的化学药剂。5监测点的确定设置原则根据安徽省玉米种植分布和草地贪夜蛾入侵和发生分布特点，在长江以南、淮河以北、以及江淮之间各个地区选择代表性玉米种植区进行设置。设置数量在长江以南草地贪夜蛾迁飞过渡区选取1个～2个市县、江淮之间选取2个～3个市县、淮河2以北草地贪夜蛾重点防治区选取3个～4个市县，每个监测点面积不少于0.5hm。6监测方法监测时间根据安徽省草地贪夜蛾的发生规律，监测时间为每年5月至10月。1

5DB34/T4208—2022试虫的采集和饲养选取代表性玉米田3块～5块，每块田采用“W”型五点取样，每个监测点采集草地贪夜蛾卵块200块以上，或采集幼虫、蛹500头以上，或利用诱虫灯诱集活成虫200头以上。采集的卵块孵化后，幼虫生长至3龄初，可直接用于生物测定。其他虫态室内饲养至F1代，3龄初幼虫用于生物测定。饲养条件为（26±1）℃，相对湿度为40％～70％，光周期L/D=16h/8h，幼虫采用人工饲料饲养，人工饲料的配方参见附录A所示，成虫饲喂10％蜂蜜水。药剂的配制6.3.1母液配制准确称取一定量的杀虫剂原药，用丙酮或二甲基亚砜等有机溶剂溶解，配制成母液。6.3.2饲料混毒法使用同一溶剂稀释母液，配制系列浓度的工作液，再与人工饲料按照质量比1:99均匀混合，加入药液量不少于2g。6.3.3点滴法用同一溶剂将母液稀释为系列浓度的工作液，每个浓度药液量不少于2mL。6.3.4浸叶法将母液用0.1％Triton-100水溶液梯度稀释至工作液浓度，每个浓度药液量不少于400mL。测定方法6.4.1方法的选择根据防治药剂的作用特点和作用方式，选择饲料混毒法、点滴法和浸叶法等。6.4.2饲料混毒法选取生长一致、健康的3龄初幼虫作为试虫。在12孔培养板中加入适量混毒人工饲料，并接入1头试虫。12头为一个重复，每个浓度重复3次；每个药剂设置5个～7个浓度梯度。以添加相同溶剂处理的饲料作为对照。处理后的试虫转移至（26±1）℃、相对湿度为40％～70％、光周期L/D=16h/8h的条件下饲养。6.4.3点滴法选取生长一致、健康的3龄初幼虫作为试虫。用微量点滴器将0.2μL药液点滴在幼虫的胸部背板，从低浓度到高浓度依次处理。12头试虫为一个重复，每个浓度重复3次，每个药剂设置5个～7个浓度梯度。以点滴相同溶剂的试虫作为对照。处理后的试虫转移至12孔培养板饲养，每孔1头，并加入适量人工饲料或新鲜玉米叶片，于（26±1）℃、相对湿度为40％～70％、光周期L/D=16h/8h的条件下饲养。6.4.4浸叶法选取生长一致、健康的3龄初幼虫作为试虫。采集未接触任何农药的新鲜玉米叶片，用打孔器打成直径略小于12孔培养板孔径的叶碟，浸入待测药液中10s，取出置于吸水纸自然晾干，每孔放入2

6DB34/T4208—20223个叶碟，接入1头试虫。12头试虫为一个重复，每个浓度重复3次，每个药剂设置5个～7个浓度梯度。以相同溶剂的0.1％Triton-100水溶液处理的叶碟饲喂组为对照。处理后的试虫转移至（26±1）℃、相对湿度为40％～70％、光周期L/D=16h/8h的条件下饲养。药剂处理后的检查时间根据药剂发挥作用的快慢确定检查时间。氯虫苯甲酰胺和溴氰虫酰胺，处理后48h检查结果；乙基多杀菌素处理后72h检查结果；虱螨脲处理后96h检查。试虫触碰无反应或不能协调运动，或处理组草地贪夜蛾体长小于对照组体长一半以上，即判定为死亡。检查结果填于附录B中表B.1。统计分析利用SAS、SPSS、POLOplus等软件，采用浓度对数-机率值分析法，计算LC50值及其95％置信限、斜率±标准误（b±SE）、卡方值和自由度，计算结果填于附录C中表C.1。7抗性水平的判断抗性倍数的计算参照NY/T2058、NY/T2916和NY/T3539的规定，根据敏感品系的LC50值（S）和监测地区种群的LC50值（T），按公式（1）计算监测地区种群的抗性倍数（RR），计算公式如下：TRR=···············································································(1)S式中：RR——监测地区种群的抗性倍数；T——监测地区种群的LC50值；S——敏感品系的LC50值，部分杀虫剂的敏感品系的LC50值参见附录D。抗性水平的评估参照NY/T2058、NY/T2916和NY/T3539的规定，抗性分级标准表如下表1：表1抗性水平的分级标准抗性水平等级抗性倍数RR敏感性下降1.0＜RR≤5.0低水平抗性5.0＜RR≤10.0中等水平抗性10.0＜RR≤100.0高水平抗性RR＞100.03

7DB34/T4208—2022附录A（资料性）草地贪夜蛾人工饲料配方A.1A组份分别称取黄豆粉100g，麦麸80g，酵母粉26g，干酪素8g，抗坏血酸8g，加入蒸馏水500mL充分搅拌均匀。A.2B组份称取琼脂26g，加入蒸馏水400mL，充分搅拌均匀。A.3C组分分别称取氯化胆碱1g，山梨酸2g，肌醇0.2g，青霉素钠0.1g，尼泊金甲酯2g，加入蒸馏水100mL充分搅拌均匀。A.4将B组中的琼脂与蒸馏水混合物倒入烧杯中煮至沸腾，然后加入A组，继续煮至沸腾。A.5煮沸后冷却至70℃～80℃，加入C组并搅拌均匀。A.6待冷却至50℃～60℃，加入微量元素组合4mL，并搅拌均匀，微量元素组合见表。表A.1微量元素组合重量序号微量元素（mg）1烟酰胺(Nicotianamine)20862泛酸钙(Calciumpantothenate)20863核黄素（Riboflavin）10594盐酸硫胺素（Thiaminehydrochloride）5245盐酸吡哆醇（Pyridoxinehydrochloride）5246叶酸（Folicacid）5247生物素（Biotin）518钴胺素（Cobalamin,vitaminB12）13注：准确称取以上各组分，加入蒸馏水160mL，并用玻璃棒搅拌混匀，用移液枪吸取4mL分装保存于-20℃备用。A.7将配制完成的饲料倒入16.7cm×12.3cm×6cm饲料盒中，待饲料冷却后盖上保鲜膜，置于4℃冰箱保存。4

8DB34/T4208—2022附录B（资料性）草地贪夜蛾抗性监测实验记录表见表B.1。表B.1药剂对草地贪夜蛾生物测定原始数据记录表药剂名称：测定时间：测试地理种群：测定记录人：药剂剂量或浓度处理的总虫数处理后的死亡虫数重复组（μg/头或mg/L）（头）（头）1CK231A1231A2231A3231A4231A5231A6231A7235

9DB34/T4208—2022附录C（资料性）草地贪夜蛾抗性监测统计结果见表C.1。表C.1草地贪夜蛾抗性监测统计结果测定时间：测定纪录人：种群毒力回归线LC50及95%置信限卡方值药剂斜率±标准误抗性倍数（监测点）（y=a+bx）（μg/头或mg/L）（自由度）ABCD6

10DB34/T4208—2022附录D（资料性）草地贪夜蛾对部分杀虫剂的相对敏感基线见表D.1。表D.1草地贪夜蛾对部分杀虫剂的相对敏感基线LC50（95%置信区间）药剂名称斜率±标准误测定方法μg/g或mg/L甲氨基阿维菌素苯甲0.0441.53±0.29饲料混毒法酸盐（0.031～0.063）0.25氯虫苯甲酰胺6.09±2.03饲料混毒法（0.15～0.30）3.37氟苯虫酰胺1.51±0.41饲料混毒法（1.85～7.62）0.10乙基多杀菌素1.61±0.26饲料混毒法（0.076～0.14）19.87茚虫威3.87±1.20饲料混毒法（17.08～29.37）注：草地贪夜蛾对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺、乙基多杀菌素和茚虫威的相对敏感性数据，来源于本团队按照本标准的方法测定，虫源为2019年5月～7月第一批入侵安徽的草地贪夜蛾。7