DB34∕T 4207-2022 鸡排泄物中氧氟沙星的含量检测 高效液相色谱-荧光检测法(安徽省)

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ICS67.120.20CCSX1834安徽省地方标准DB34/T4207—2022鸡排泄物中氧氟沙星的含量检测高效液相色谱-荧光检测法Determinationofofloxacininexcrementsofchicken—Highperformanceliquidchromatography-fluorescencedetectionmethod2022-06-29发布2022-07-29实施安徽省市场监督管理局发布

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2DB34/T4207—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽中青检验检测有限公司、安徽省兽药饲料监察所、安徽天祥检验检测有限公司、望江县农产品质量安全中心、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽农业大学、阜阳市农业综合行政执法监督支队、泗县草沟镇畜牧兽医水产站、定远县康源农牧科技股份有限公司、合肥市动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：许世富、潘孝成、谢军池、王媛媛、韩素珍、凃健、许晓靖、祁钊、吴昊、刘发全、马腾飞、郝金华、陈守美、谢俊东、宋亚伟。I

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4DB34/T4207—2022鸡排泄物中氧氟沙星的含量检测高效液相色谱-荧光检测法1范围本文件规定了鸡排泄物中氧氟沙星含量的高效液相色谱-荧光检测方法。本文件适用于鸡排泄物中氧氟沙星含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样中的氧氟沙星用乙酸甲醇溶液超声提取，经离心、过滤、浓缩后，高效液相色谱分离，用荧光检测器测定，外标法定量。5试剂和材料除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。试剂5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲醇。5.1.3乙酸。5.1.4盐酸。5.1.5磷酸：85％。5.1.6三乙胺。溶液配制5.2.10.1mol/L盐酸溶液：取盐酸9mL，加水稀释到1000mL，混匀。5.2.220％乙酸甲醇溶液：取乙酸200mL，加入甲醇溶液至1000mL，混匀。5.2.30.02mol/L磷酸溶液：称取85％的磷酸2.31g，加水溶解并定容至1000mL，混匀。5.2.4三乙胺磷酸溶液：取0.02mol/L磷酸溶液1000mL，加入1.4mL三乙胺，混匀。1

5DB34/T4207—20225.2.5流动相：分别取乙腈和三乙胺磷酸溶液（5.3.4）按体积比10：90混匀。标准品及标准溶液配制5.3.1标准品：氧氟沙星标准品（CAS号：82419-36-1），纯度≥98.0％。5.3.2标准储备液（0.5mg/mL）：取氧氟沙星标准品10mg，精密称定，用1mL的0.1mol/L盐酸溶解后，加水稀释并定容至20mL容量瓶，配制成浓度为0.5mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存，有效期3个月。5.3.3标准工作液（10μg/mL）：准确量取上述标准储备液（0.5mg/mL）1mL，加水稀释并定容至50mL容量瓶，配制成浓度为10μg/mL的标准工作液，于4℃避光保存，有效期1个月。6仪器和设备高效液相色谱仪：配荧光检测器。分析天平：感量0.1g、0.1mg、0.01mg。高速冷冻离心机：≥16000r/min。超声波仪。氮吹仪。涡旋混合仪。无机滤膜：0.45μm。7试样的制备与保存试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试鸡排泄物，混匀，如下：——取混匀后的供试样品，作为试样；——取混匀后的空白样品，作为空白试样；——取混匀后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样作为空白试样。试样的保存-18℃以下保存，3个月内进行分析测试。8测定步骤提取称取5g（精确至0.1g）鸡排泄物样品，加入20％乙酸甲醇溶液（5.3.2）10mL，以2500r/min涡旋混匀30s，超声溶解15min，以5000r/min离心5min，取8mL上清液氮气吹干，加流动相1mL，以2500r/min涡旋混匀30s，超声溶解15min，以16000r/min4℃离心10min，取上清液过0.45μm的滤膜，供高效液相色谱仪测定。测定8.2.1色谱条件2

6DB34/T4207—2022色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）或相当者；检测波长：荧光激发波长为280nm，发射波长为450nm；流动相：乙腈-三乙胺磷酸溶液（5.3.4），按体积比10：90（v/v）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL。8.2.2测定法取试样溶液和标准工作溶液分别进样，得到色谱峰面积响应值，在线性范围内，用外标法作单点或多点校准，以保留时间定性，峰面积定量。氧氟沙星标准色谱图见附录A中图A.1。空白试验取空白试样，除不加标准溶液外，采用相同的测定步骤进行平行操作。9结果的计算与表述试样中氧氟沙星的含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：�×��×��×����?=·······································································(1)�×��×����式中：X——试样中被测组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；C——试样溶液中氧氟沙星的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1——提取液体积，单位为毫升（mL）；V2——取出上清液体积，单位为毫升（mL）；V3——试样定容体积，单位为毫升（mL）；M——试样取样质量，单位为克（g）。10灵敏度、准确度和精密度灵敏度本方法的检出限为10μg/kg，定量限为20μg/kg。准确度本方法在鸡排泄物20μg/kg～100μg/kg，添加浓度的回收率为80％～110％。精密度本方法的批内、批间相对标准偏差均≤10％。3

7DB34/T4207—2022附录A（资料性）氧氟沙星标准溶液的图谱见图A.1。图A.1氧氟沙星标准溶液（100ng/mL）的液相色谱图4