DB22T 1987-2013 饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱质谱法

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1、ICS65.120B46备案号：40177-2014DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1987—2013饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱/质谱法本标准仅供内部使用不得翻印Determinationofdiethylstilbestrolinfeeds—LC-MS/MSmethod2013-12-18发布2013-12-31实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1987—2013本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T

2、1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、顺德出入境检验检疫局。本标准起草人：刘斌、邵秋荣、史艳宇、王宇、王潇、王家旭、石金娥、李滢倩、李媛媛。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1987—2013本标准仅供内部使用不得翻印料饲料中己烯雌酚的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了饲料中己烯雌酚含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于

3、饲料中己烯雌酚含量的测定。本方法检出限为0.01mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理本标准仅供内部使用不得翻印试料用乙腈提取，经阴离子固相萃取柱净化、浓缩后，液相色谱-质谱/质谱（HPLC-MS/MS）测定，外标法定量。4试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水

4、符合GB/T6682规定一级水的标准。4.1氢氧化钠（NaOH）。4.2甲醇(CH3OH)。4.3甲酸(HCOOH)。4.4乙腈(CH3CN)：色谱纯。4.5氨水(NH4OH)：浓度25%～28%。4.6氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：称取0.4g氢氧化钠（4.1），用水定容至1L。4.770%甲醇溶液：量取70mL甲醇（4.2），用水定容至100mL。4.8氨水溶液：氨水-水（1+19，体积比）。4.9甲酸甲醇溶液：甲酸-甲醇（1+19，体积比）。4.10己烯雌酚（diethylstilbestro

5、l）标准品：C18H20O2，CAS：56-53-1，纯度≥99.0%。4.11标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取0.0100g己烯雌酚标准品，用甲醇定容至10.0mL。4℃条件下避光保存，可使用1个月。4.12标准工作液：取标准储备液（4.11）用70%甲醇溶液（4.7）稀释，配制成浓度依次为0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的己烯雌酚标准溶液，根据需要用2.0mL适当浓度的标准溶液溶解空白样品浓缩残渣，配制成相应浓度的标准工作溶液，现用现配。

6、4.13弱阴离子交换固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。1DB22/T1987—20134.14滤膜：0.22μm，有机相。5仪器和设备本标准仅供内部使用不得翻印5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。5.2离心机：转速≥8000r/min。5.3天平：感量0.0001g。5.4超声波清洗器：40kHz。5.5固相萃取装置。5.6氮吹仪。6分析步骤6.1试样制备选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。6.2提取称取5g粉碎试样（精确到0.001g）于50mL离

7、心管中，加入40mL乙腈（4.4），混匀，超声提取15min，5000r/min离心10本标准仅供内部使用不得翻印min，上清液转移至另一50mL离心管中；残渣中加入10mL乙腈再次提取，合并两次提取溶液，40℃下旋转蒸发至近干，加5mL氢氧化钠溶液（4.6）溶解残渣，8000r/min离心5min，取上清液，待净化。6.3净化将阴离子固相萃取柱连接于真空固相萃取装置下，先用2mL甲醇（4.2）、2mL水将柱子活化，将6.2的样品上清液上柱，流速为1mL/min，依次用1mL氨水溶液(4.8)、0.5mL

8、甲醇以3mL/min的流速淋洗，用4mL甲酸甲醇溶液(4.9)洗脱，流速为1mL/min。收集洗脱液，在40℃下经氮气吹干后，用2mL70%甲醇溶液（4.7）溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.14），供HPLC-MS/MS测定。6.4测定6.4.1液相色谱参考条件：a）色谱柱：C18柱,5μm，150mm×2.1mm，或相当者；b）流动相：V（水）+V（乙腈）=43+57；c）流速：0.3mL/min；d）进样量：5μL；e）