顶空固相微萃取-气相色谱法测定尿中甲基异丁基酮

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1、顶空固相微萃取-气相色谱法测定尿中甲基异丁基酮孙醒麵麵姬睦皇张耕武汉科技大学医学院公共卫生学院"职业危害识别与控制"湖北省重点实验室目的建立顶空固和微萃取-气相色谱法测定尿中中基异丁基酮的方法。方法使用二乙烯苯/碳烯/聚二甲基硅氧烷(DVB/CAR/PDMS)固相微萃取头，采用顶空固相微萃取技术富集尿样中甲基异丁基酮，通过L9(33)正交试验对盐析量、萃取温度、萃取时间进行优化，以DB-5(30mX0.32mmX0.25um)毛细管柱为分离柱，火焰离子化检测器检测，内标法定量。结果甲基异丁基酮在0.052.0ug/ml范围内线性相

2、关系数大于0.999，方法检出限为0.006ug/ml,加标回收率为82.7%103.7%,相对标准偏差为0.15%4.33%。结论木法操作简便，灵敏度高，适用于职业接触人群尿样中甲基异丁基酮的测定。关键词：顶今側相微萃取;甲基.异丁基酮;監气相色谱法;通过呼吸道和皮肤接触，可引起恶心、呕吐、腹痛、呼吸道刺激等症状，甚至导致中枢神经系统的抑制和麻醉位1。M1BK在人体内代谢为甲基异丁基甲醇和4-羟基-4-甲基-2-戊酮U1,大部分中间代谢产物在体内转化为二氧化碳消除或纳入组织中，2%~14%通过呼气排出位1;尿中未代谢的MTBK约

3、为0.12%,可作为MTBK暴露的生物标志物［6-7］。有关人体生物材料屮MIBK含量的测定方法研究较少，美国政府工业卫生学家会议(ACGIH)制定的班末尿中MIBK的生物接触指数为lmg/L，FI前我国暂未制定有关检验方法以及生物接触限值标准。通过顶空固相微萃取技术(HS-SPME)对尿样中的MIBK进行萃取和富集，能有效减小尿样基体干扰，是一种无有机溶剂的前处理技术。在大量预试验的基础上，经过正交试验设计，以少量试验次数进一步科学优化HS-SPME条件，釆用气相色谱-火焰离子化检测器对尿样中的MTBK进行测定，以内标法准确定量

4、M。建立的顶空固相微萃取-气相色谱法测定鉍屮甲棊异丁棊酮的方法，可为制订鉍屮MIBK生物接触限值和检测方法提供技术支持。1材料与方法1.1仪器与试剂Agilent7890B气相色谱仪（Agilent,美国）;DB-5毛细管柱（30mXO.32mmX0.25um）;IIP-INNOWAX毛细管柱（30mX0.25mmX0.25pm）;20ml顶空瓶（Welch,美国）;碳烯/聚二甲基硅氧垸（CAR/PDMS）75um固相微萃取头（Supelco,美国）;二乙烯苯/碳烯/聚二甲基硅氧烷（DVB/CAR/PDMS）50/30ym固相微萃

5、取头（S叩elco，美国）；萃取手柄（Supelco,美国）:PGJ-20-AS超纯水机（武汉品冠仪器设备有限公司,中国）；恒温水浴锅（江苏荣华仪器制造有限公司，屮国）。甲基异丁基酮（分析纯，山东西亚化学股份有限公司）；环己酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。1.2标准系列配制称取500.Omg甲基异丁基酮，用纯水逐级稀释为5.0yg/ml的标准使用液。称取500.Omg环己酮，用纯水逐级稀释为10.0ug/ml的内标标准使用液。分别取0.50,1.00，5.00，10.0，20.0ml标准使用液至50ml容量瓶屮，各加入10

6、.0ml环己酮内标标准使用液，用纯水定容，得到浓度为0.050，0.10，0.50，1.00，2.00ug/ml的标准系列。1.3HS-SPME条件称取2.0g氯化钠于20ml顶空瓶中，加入5.Otnl待测溶液，用配有聚四氟乙烯垫的盖子密封。将密封好的顶空瓶放至30°C恒温水浴锅内，插入DVB/CAR/PDMS萃取头，30min后将萃取头收回取出，迅速插入气相色谱进样口，解吸5min。1.4气相色谱条件釆用DB-5毛细管柱（30mX0.25mmX0.32nm）,载气为氮气，流速为1.5ml/min,进样口温度为20CTC，分流比为

7、20:1，柱温为8CTC，火焰离子化检测器温度为25O0C。2结果与讨论2.1色谱柱的选择分别用HP-INNOWAX毛细管柱和DB-5毛细管柱测定MIBK，前者的柱温(140°C)相较后者的柱温(80°C)高，＞1.使用时有较多杂峰，目标峰拖尾，影响其与内标物峰的分离，故选用DB-5毛细管柱。2.2萃取条件优化M1BK为弱极性小分子有机化合物，分别选用CAR/PDMS和DVB/CAK/PDMS萃取头，结果表明，前者和较后者萃取量少、峰形差且有杂峰，故选用DVB/CAR/PDMS萃取头;在其他条件不变的情况下加样体积在5ml，7ml

8、,10ml时，萃取量变化幅度较小，由于加样体积远大于萃取涂层的体积时，分配平衡的萃取量与加样体积相关性较小M，因此不考虑加样体积的影响，选取最小加样体积5ml。对毛细管柱类型、萃取头类型和加样体积条件探究后，采用单因素轮换试验探究萃取温度、盐析量和