基于灰色关联分析的黄连谱效关系研究

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1、基于灰色关联分析的黄连谱效关系研究王钰乐刘文杨道斌卿勇军杜平贵阳中医学院目的：明确黄连超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)指纹图谱与其抗炎药效的相关性，为黄连质量控制和药效物质基础研宄提供科学依据。方法:采用灰色关联度分析法研究黄连UPLC-MS/MS指纹图谱和黄连对湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型血清白细胞介素4(IL-4)影响的谱效相关性。结果:建立了黄连UPLCMS/MS指纹图谱的共有模式，确定了能够表征黄连特征的13个共有峰。与模型组比较，不同批次的黄连给药组均能不同程度的升高湿热型溃疡性结肠炎

2、大鼠模型血清IL-4的含量(P<0.05,P〈0.01)。黄连UPLC-MS/MS指纹图谱的各共有峰与其抗炎药效作用的关联度均>0.6。结论:通过谱效关系研究明确广黄连发挥抗炎药效作用是盐酸小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱等多成分共同作用的结果。关键词：黄连;指纹图谱;白细胞介素4;灰色关联度;谱效关系;现代药理研宄表明:黄连具有抗病原微生物、降血糖、机体免疫调节、抗炎、解热等药理作用；化学成分研宄表明:黄连主要以小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱等生物碱类成分为主1^1。中药谱效关系主要通过研究指纹图谱与药效之

3、间的相互关系揭示中药所含化学成分与药效间的关系，进而阐明药效物质棊础ui。然而黄连在该方面研宄的报道相对较少。本文应用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)建立黄连指纹阁谱，采用灰色关联度分析法，首次获得指纹图谱中各井有峰与黄连对湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型白细胞介素4(interleukin4,IL-4)因了*改善作用的关联度，为黄连质量评价和药效物质基础研究提供参考依据。材料1.仪器ACQU1TYUPLC超高效液相色谱仪、XevoTQMS三重四级杆质谱检测器、MassLynxTM质谱工作站软件,美

4、国Waters公司；DZF-6210型真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司）；SK8210HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；AUY220型万分之一电子天平（H木岛津）；AE/240型十万分子一电子天平（上海梅特勒仪器存限公司）;RppendorfResearchplus手动移液器（5_50此和100-1000PL,德国艾本德股份公司）岀C-2062型高速离心机（安徽屮科屮佳科学仪器有限公司）：MK3型酶标仪（芬兰雷勃公司）。1.试剂与药物盐酸小檗碱（批号：110713-201212）、盐酸巴马汀（批

5、号:110732-201510）、盐酸药根碱（批号：110733-201108）均购于中国食品药品检定研宄院；乙腈（色谱纯，德国MERCK公司，批号JA033130）:甲醇（色谱纯,德国MERCK公司，批号：1758107446）;甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20160314）;甲酸（色谱纯，CNW公司，批号:J259K144）;屈臣氏蒸馏水（北京屈臣氏蒸馏水有限公司）；其他试剂均为分析纯。2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）（Sigma公司，USA,批号:SLBP0899V）;戊巴比妥钠（

6、Sigma公司，USA,批号:20150516）;柳氮磺毗啶肠溶片（SASP）（批号:20150201,上海福达制药有限公司，规格为0.25g/片）：大鼠IL-4ELISA检测试剂盒（上海哈灵生物科技有限公司，货号:HL20040规格:96T）。不同产地及品种的黄连药材见表1，根据2015年版《中华人民共和国药典》，经贵阳中医学院周汉华教授鉴定为正品。表112批不同来源的黄连药材2.动物清洁级SD大鼠96只，体质量（200±20）g，鼠龄6-8周，雌雄各半。购自贵州眹科大学实验动物中心，动物质量合格证编号:SCX

7、K（黔）2012-0001。方法与结果1.黄连药材UPLC-MS/MS指纹谱的建立1.1对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品适量，罝于25mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制得各成分质量浓度分别为0.0736、0.0748、0.1048g/L混合对照品溶液，4°C保存，备用。1.2供试品溶液的制备称取黄连18g，加12倍量水，浸泡30min，煎煮lh，药渣加10倍量水，继续煎煮2次，每次lh,煎煮液趁热滤过，合并3次滤液，浓缩，50°C减压干燥成干浸膏。取黄连干浸膏粉末（过5号筛）约0

8、.5g，精密称定，置锥形瓶中，加入甲醇50mL，超声处理30min，放冷，补重，滤过，精密量取续滤液lmL置于10mL容量瓶屮，加甲醇定容至刻度，用0.22Pm微孔滤膜滤过，即得。1.3色谱/质谱条件色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mmX2.1mm,1.7Mm);柱温:40°C,样品温度10°C,流速:0.3mL/min,进样量1虬；以0.2%甲酸