gb-t17999.1-1999 spf鸡 红细胞凝集抑制试验

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1、GB/'r17999.1--1999前台本标准以我国建立的HI方法为基础，参照美国SPAFAS公司的有关操作规程，规定厂SPF鸡红细胞凝集抑制试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法本标准为《SPF鸡红细胞凝集抑制试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验;GB/T17999.3-1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.4一1999SPF鸡琼脂扩散试验;GB/T17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;G

2、B/T17999.6-1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T17999.7--1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;GB/T17999.81999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9-1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准山农业部畜牧兽医司归日本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。本标准土要起草人:陈德威、赵立红、靳彦华、张秀美、李军。中华人民共和国国家标准Gu/r17999.1-1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验SPFchickenHemagglutinati

3、oninhibitiontest1范围本标准规定厂红细胞凝集抑制试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等本标准适用于SPF鸡感染以下病原微生物后的血凝抑制抗体监测:禽流感病毒(A型)(AvianIn-fluenzaVirus(TypeA)D.传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)，新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus),X腺病毒I群(减蛋综合症)(AvianAdenovirusGroup11),A毒支原体(MycoplasmaGallisepticum)，沿液囊支原体(MycoplasmaS

4、ynoviae)。2原理许多病毒井有凝集动物红细胞的能力。这种凝集红细胞的能力能被特异性抗体所抑制，因此可用已知病毒检测相应的血凝抑制性抗体3试剂和器材3.1试剂3门门血凝抗原3.1.2阴性、阳性血清3.13被检血丫青31.4鸡红细胞11.50.850o生理盐水3.1.6阿氏液3.2器材3.2.19sTL微杖血凝板(U型)。3.2.2微Ifr移液器(TDtoId一200k])及吸头12.3水浴锅。32.4r=3匕机与锥形刻度离心管4操作程序4.飞抗原血凝效价测定41.110%和().5乡石鸡红细胞液的制备4.1.1-1采鸡血:用注射器吸取阿氏

5、液约1m工一取3口龄一功日龄SPF鸡(最少两只)，从胸骨尖下方约!.3cm处将注射器针头刺入心脏.吸取心血约2ml,-,tm工，与阿氏液轻轻混合，放入装有10ml.阿氏液的离心竹中4.1.1.2洗涤鸡f1_LM胞:将离心管中的血液经1500r/mi。一]800r/min离心8min,弃上清液，沉淀兰It1l1}鲤Ll:R,鱼型丝IGl二q?立50(竺竺二800竺min,丝二min,911些P达上'lNR丝.Ya:燮国家质量技术监督局1999一们一10批准2000一04一01实施CB/『r17999，1一1999胞}几层的自细胞薄膜，再重复以仁

6、过程后，加入阿氏液20ml，轻轻混合成红细胞悬液，4〔保存sd备用4门门.31。%鸡红细胞悬液:取阿氏液保存不超过sd的红细胞液，在锥形刻度离心管中离心150。:/mm一18()0r/minsmtn，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml_)，加人9倍体积(。1)的生理盐水.用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞均匀混合4门门.40.5%鸡红细胞液:取棍合均匀的10%鸡红细胞悬液lml，加入19ml生理盐水，混合均匀即可4门.2抗原血凝效价r)lJ定4.，.2门于微址血凝板的八一G排各孔加入生理盐水5。川一，Hl与Hl孔作为对照，也加入生

7、理盐水50科14.1.2.ZA一G排的第1孔加入抗原5。产L，每一种抗原的血凝效价测定应作两排检验，如Al与B，孔各加入新城疫病毒抗原刘川;Cl与D，孔各加入禽流感病毒(A型)抗原5。拜L，以此类推。4门.2.3用微量移液器，从第1孔至第]2孔对抗原作系列倍比稀释，即将第1孔的抗原与生理盐水用移液器反复吹吸3次，吸出5()川移至第2孔，用生理盐水清洗吸头3次后，再用于下一个孔的混合，以此类推，直至第12孔，从第飞2孔中吸出50户L弃去，此孔抗原的最终稀释度为1，4o96。4门.2.4仔孔巾加入。.5。似鸟红细胞悬液50可，包括Hl与HI:孔。

8、4门.2.5将血凝板置振荡器上中速振荡lmin一Zrnin。4.1.2.6跪宝温(]8〔一22〔)感作45min4.1.2.了抗原血凝效价判定:感作完毕.观察血凝板