不同提取方法对测定蜂胶产品总黄酮含量的影响

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1、不同提取方法对测定蜂胶产品总黄酮含量的影响【关键词】蜂胶/化学；总黄酮/分析；分光光度法，紫外线　　　　【Objective】Toexploretheeffectofdifferentextractionmethodsonthecontentoftotalflavonesfrompropolis.　　【Methods】ethanolSoxhletextractionmethodissimple，effectiveandpractical，andcanbeusedtoreplacepharmacopoeiaextracti

2、onmethodforthedeterminationoftotalflavonesfrompropolisistry；TOTALFLAVONES/analysis；SPECTROPHOTOMETRY，ULTRAVIOLET　　蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物芽苞和树干处采集树胶，混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等而形成的一种具有芳香味的胶状固形物，其主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质［1］。《中华人民共和国药典》2005版一部收载了该药材，作为抗菌消炎、调节免疫中药应用［2］。现代药理研究表明，

3、蜂胶总黄酮具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用［3］。蜂胶总黄酮的含量已成为判定蜂胶产品质量的标志性物质之一，而提取方法是影响蜂胶总黄酮含量测定准确性的重要因素之一，为此，笔者进行了本项研究。　　１仪器及试药　　11仪器UV2100紫外—可见分光光度计（成都科析电子商务有限公司）；8953Dietikon型电子分析天平（瑞士，精度01?mg）；AS2060B型超声仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）等。　　12试剂与药品流动相所用甲醇为色谱醇，其他试剂甲醇、磷酸等均为分析纯

4、；蜂胶（毛胶，由广州市宝生园有限公司提供）；芦丁对照品（批号为0809705）由中国药品生物制品检定所提供。　　2方法与结果　　21芦丁对照品标准曲线的制备［2］精密称取无水芦丁对照品适量，加甲醇制成0268?mg／mL的溶液；吸取该溶液0、1、2、3、4、5?mL，分别置25?mL容量瓶中，加水至6?mL，加50?g/L亚硝酸钠溶液l?mL，摇匀，静置6?min；加100?g/L硝酸铝溶液l?mL，摇匀，放置6?min；加43?g/L氢氧化钠溶液10?mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置15?min，以相应试剂为空白

5、，按紫外—可见分光光度法（2005版药典附录VA），在波长500?nm处测定吸光度（Ｄ）。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果见图1。　　22供试品总黄酮含量测定精确移取各样品溶液1?mL，置25?mL容量瓶中，加水至6?mL，加50?g/L?亚硝酸钠溶液l?mL，摇匀，静置6?min；加　　图1芦丁标准曲线　略　　232乙醇回流法取同一批蜂胶，分别精密称取10028?g、10018?g、10074?g，以体积分数95%的乙醇回流2次，每次加乙醇50?mL，第1次回流15?ｈ，第2次回流1?ｈ

6、，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至100?mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4?mL置10?mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。　　233甲醇索氏提取法取同一批蜂胶，分别精密称取10008?g、10016?g、10024?g，分别置于索氏提取器中，加100?mL甲醇，加热回流至提取液无色，提取液转移至100?mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4?mL置10?mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。　　24方法学考察　　241稳定性试验取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按22项下所述方法，

7、分别在0、1、2、3、5?h不同时间点进行检测，相对标准差(sＲ)为08%，表明供试品溶液在5?h内是稳定的。　　242重复性试验用甲醇索氏提取法平行制备6份供试品溶液，按22项下所述方法，分别测定其吸光度，sＲ为05%，结果表明重复性好。　　243精密度试验取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按22项下所述方法，测定其吸光度，连续测定5次，其sＲ为03%。　　244回收率试验精确移取05?mL样品溶液5份，置25?mL容量瓶中，分别准确加入芦丁对照品甲醇液05?mL（0268?mg/mL），按

8、22项下所述方法，分别测定其吸光度，并计算回收率，其回收率为10008%（Ｎ=5），sＲ为095%。　　25不同提取方法所得样品总黄酮含量测定结果表1结果说明药典法和甲醇索氏提取法所得的总黄酮的含量较高，但两者无显著性差异。　　表1不同提取方法所得样品测定结果比较（略）　　3讨论　　本实验对药典法、乙醇回流法