hiv检验技术的研究进展

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1、HIV检验技术的研究进展　　［关键词］人类免疫缺陷病毒；聚合酶链反应；抗原　　StudytheProgressofHIVExaminetheTechniqueAbstract：AIDSisaseverediseasethreateningthehumanhealthandcausedbyHIVtheealydiagnosisplaystheimportantroleforpreventtheAIDSspreadbesidestheeffectivevaccineandthedrug.ItsdiagnosismethodesmainlyincudetheimmunologyandMolecula

2、rBiologyet.　　Keywords：HIV;PCR;Antigen　　1981年美国发现世界首例艾滋病患者，1983年由美国人罗伯特加洛领导的研究小组成功分离出艾滋病毒(HIV)，引起全世界对其进行广泛深入的研究。据联合国艾滋病规划署报道：截止2004年底，估计全球有HIV感染者3940万人(3590万~4430万)；2004年，全球估计有490万(430万~640万)新感染者，310万(280万~350万)人死于艾滋病；而且每天有14000人新感染HIV，给人类造成巨大的经济损失和社会危害。面对这一世界性温疫，全世界科学家使出浑身解数，寻找致病线索和治疗药物，而寻求更加特异、灵敏、准

3、确的检测方法是一项重要的基础性研究。自1985年第一个艾滋病诊断试剂盒问世以来，HIV检测技术发生了巨大的变化，下面就此领域的研究进展作一检述。　　1　抗原检测应用　　免疫荧光法、ELISA法及放射免疫直接测HIV抗原，通常测P24抗原，由P24抗原出现于抗体出现之前，对窗口期感染的早期诊断有帮助意义，此法简便易行，还常用于细胞培养HIV的测定，抗HIV医药费物疗效的检测及HIV感染者发展为艾滋病的动态观察。　　2　抗体检测HIV抗体　　一般在感染4周后逐渐出现，可延至终身，是人类重要的检测指标，相比于近年来逐步发展起来的用免疫技术测定其感染因子，检测HIV特异性抗体仍是诊断艾滋病的重要依据。

4、　　2.1　HIV抗体检测初筛实验　　2.1.1　酶联免疫吸附实验(ELISA)　　ELISA法敏感性好且操作简便。目前酶免法测HIV抗体试剂已发展到第四代，市售试剂有美国的雅培、上海科华、北京万泰等其敏感度几乎100%，特异在98.1%~99.8%之间，并且适用于批量操作，缺点是有一定假阳性。　　2.1.2　免疫荧光法(IFA)　　　　　　　　　　　　　　是借助抗体反应进行荧光染色的诊断技术，由于非特异荧光较难去除等缺点，因而仅用于HIV抗体初筛，阳性结果需经确证实验证实，该法操作简便、敏感性高、特异性比ELISA法高。　　2.1.3　凝集实验　　　　　　　　　　　　　　具有不需任何设备，一

5、步即可迅速得到结果的优点，敏感性和特异性与ELISA相近。缺点是有假阳性，且价格昂贵，亦仅作初筛实验。　　2.1.4　在ELISA基础上发展起来的金免疫渗滤实验(GIFA)，GIFA始于1985年，最初以酶作为标记物，1989年发展以胶体金为标记物用于检测艾滋病毒抗体的渗滤实验。1990年Oskiowicz等应用硒作为标记物建立了免疫层析实验。上述两种方法具有快速、简单，不需要任何仪器设备，几分钟可用肉眼观察结果的优点，目前在临床检测中已广泛应用。　　2.2　确证实验　　2.2.1　免疫印迹实验(WB)　　　　　　　　　　　　　　WB是目前最特异、敏感的证实HIV感染的方法，也是国内HIV确认

6、的首选方法。WB实验能检测到gp120、fp160、p66、p51、gp41、p31、p24和17Kda等抗原相应的抗体。我国对于WB实验结果判断标准：HIV阳性：至少有两条env带和至少一条env带和p24带同时出现。HIV阴性：无任何HIV抗体特异带出现。HIV可疑：出现HIV抗体特异带，但带型不足以确认阳性者。WB实验操作较ELISA稍复杂，检测需在确证实验室进行。由于自身抗体的存在，该方法仍有假阳性。　　2.2.2　条带免疫印实验(LTA)　　　　　　　　　　　　　　其原理和操作方法与WB实验基本相同，只有条膜和组成有所区别。检测时信噪比高，本地清晰，无潜在假阳性干扰，克服了WB实验中

7、使用病毒裂解产物而可能产生的同相载体上某些重要抗原不足缺点。这类试剂特异性高，但也有可能由于病毒株所合成抗原决定筛部位发生突变致HIV抗体假阴性。唯一缺点是由于合成抗原不能糖基化，其立体构象与天然抗原有一定差异，在一定程度上可能影响了模拟真实HIV抗原检测抗体的能力。　　3　核酸检测　　3.1　原位杂交(insitehyrization)　　　指应用特定的标记探针以分子杂交法直接检测标本中的HIV