丹参药材水溶性成分含量的hplc法分析

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1、丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析：李曼玲,冯伟红,康琛,梁日欣,杨洪军,何希荣,黄璐琦【摘要】目的建立丹参药材水溶性成分中丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为KromosilC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相Ⅰ：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59),流动相Ⅱ：甲醇-冰醋酸-水(20∶1∶80)；流速：1.0mL/min；检测波长分别为286、280nm；柱温35℃。结果测定了10个不同产地的丹参药材,丹酚酸B含量在0.09%～6.81%之间,平均回收率为99.64%,RSD＝1.09%；

2、丹参素的含量在0.16%～0.68%之间,平均回收率为98.94%,RSD＝1.49%；原儿茶醛的含量在0.01%～0.09%之间,平均回收率为98.96%,RSD＝1.66%。结论本法简便、准确、重复性好,可作为丹参药材的含量测定标准。【关键词】丹参；丹酚酸B；丹参素；原儿茶醛；高效液相色谱法　　KeyiltiorrhizaBge.；SalvianolicacidB；Danshensu；Protocatechuicaldehyde；HPLC丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎,味苦,性微寒,归心、肝经,具有祛瘀止

3、痛、活血通经、清心除烦的作用。用于月经不调,经闭通经,癥瘕积聚,胸腹刺痛,热痹疼痛,疮疡肿痛,心绞痛等。丹参的主要药效成分之一是丹参中的水溶性成分,主要是酚酸类化合物丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛。我们采用HPLC法建立了这3种成分的含量测定方法,可用于丹参及其饮片和制剂的研究及质量控制等。　　1仪器与试药高效液相色谱仪：HP1100高效液相色谱仪,G1315ADAD检测器,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1322A在线脱气机,AgilentChemStation色谱工作站。丹酚酸B对照品(批号200201)、丹参素钠对照品(

4、批号855-200102)、原儿茶醛对照品(批号0801-9402)均为供含量测定用,购于中国药品生物制品检定所。乙腈：色谱纯,美国；甲醇：色谱纯,北京化工厂；高纯水：自制；其他试剂均为分析纯。丹参药材由本所生药室提供。　　2方法与结果　　2.1丹酚酸B的含量测定　　2.1.1色谱条件　　色谱柱：KromasilC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速：1mL/min；柱温：35℃；检测波长λs＝286nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000。在此条件下丹酚酸B与其他组分达到良好分离(见图1

5、)。　　2.1.2供试品溶液的制备　　取本品粉末(过3号筛)0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50mL,密塞,称定重量,加热回流1h,取出,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。　　2.1.3对照品溶液的制备　　取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇溶解并制成每1mL含0.14mg的溶液,即得。　　2.1.4标准曲线的绘制　　分别精密吸取对照品溶液(0.14mg/mL)4、8、12、16、20μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹酚酸B的进样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐

6、标,绘制标准曲线,并计算回归方程：Y＝-0.1536＋895.6X,r＝0.9996,结果表明,丹酚酸B在0.56～2.8μg范围内呈线性关系。　　2.1.5精密度试验　　取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5μL,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD＝0.28%。　　2.1.6重复性试验　　平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5μL,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD＝2.24%。　　2.1.7稳定性试验　　取供试品溶液1份,上述色谱条件下,分别于样品制备后第0、1、2、4、8、16、24h进行测定,测定丹酚酸B含量,

7、经计算,RSD＝1.76%。　　2.1.8加样回收率试验　　取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹酚酸B对照品,按上述色谱条件测定,计算回收率,丹酚酸B为99.64%,RSD＝1.09%。见表1。表1丹酚酸B回收率试验结果（略）　　2.1.9含量测定　按供试品溶液制备方法,分别对10个不同丹参药材丹酚酸B的含量进行测定。结果见表2。表2不同产地丹参药材丹酚酸B的含量测定结果（略）　　2.2.2供试品溶液的制备　　取丹参药材粉末(过3号筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25mL,密塞,称定重量,超声提取1h,取出,再加热回流4h,取出,

8、密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。