善胃ⅱ号方对大鼠胃癌前病变的抑制作用及其机制研究

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1、善胃Ⅱ号方对大鼠胃癌前病变的抑制作用及其机制研究作者：唐丽明，高世全，施伟东，李东华，袁红霞【摘要】目的研究善胃Ⅱ号方对胃癌前病变模型大鼠胃黏膜P16、rasP21蛋白的影响及其对胃黏膜病理组织学改变的影响。方法制备胃癌前病变大鼠模型（造模30周）。将130只雄性NNG)为FlukA公司产品；P16、rasP21单克隆抗体均为美国Santacruz公司产品；兔SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒、多聚赖氨酸均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；维酶素片为北海阳光药业有限公司产品（批号050224）。高速离心机HitachiHimac1R21型日本产品；电热恒温水浴箱HH.NN

2、G溶液灌胃，药量为20ml/kg，隔天1次，灌胃4周后，除自由饮用100μg/mlMNNG溶液30周外（每天更换），同时每只大鼠每3天给予1ml无水乙醇1次,每进食2d禁食1d，进食当天下午自由饮用20mmol/L(0.85%)脱氧胆酸钠溶液。每周用钳子夹住大鼠尾部一次，使之保持激怒、争夺状态，持续10min，持续30周。空白对照组10只，每天自由饮用自来水。上述各组均以混合饲料喂养30周。　　2.3治疗方法在造模30周结束后，中药组用1g/ml的善胃Ⅱ号方水煎液以17.1ml/kg的药量灌胃，1次/d；西药组将维酶素片研碎制成0.029g/ml的混悬液以17.1ml/k

3、g灌胃，1次/d；两用药组用药时间均为6周。模型组和空白组以17.1ml/kg生理盐水灌胃，1次/d；持续时间均为6周。　　2.4标本采集及病理组织学、免疫组化染色上述各组于第30周予10％水合氯醛(3ml/kg腹腔注射)麻醉后处死动物，暴露并游离胃将胃沿胃大弯切开，按照胃底、胃体、小弯、幽门、贲门处分别取材,4%中性甲醛固定，石蜡包埋,切片厚4～……6μm，HE染色，镜下观察病理形态学改变。另外行P16、rasP21免疫组化检测。　　2.5病理组织评分　　2.5.1病理组织学判断标准以出现胃黏膜上皮异型增生，肠上皮化生判断为胃癌前病变，诊断标准如下：(1)肠上皮化生：胃

4、黏膜上皮细胞可见肠上皮的杯状细胞。(2)轻度上皮异型增生：鳞状上皮增厚，有一定异形性，基底膜完整，腺体明显增多，腺腔扩大，腺细胞核亦增多，异形性不明显。(3)重度上皮异型增生：鳞状上皮增厚，有一定异形性，偶见核分裂，基底膜完整，腺体明显增多，腺腔扩大，腺细胞核深染，有一定异形性，未见核分裂。　　2.5.2病理检验评定标准参照2006年上海全国第二届慢性胃炎共识会议通过的《中国慢性胃炎共识意见》进行诊断及分类，并分等级如下：非肠化及异型增生(-)；肠化(+)；轻度异型增生(++)；重度异型增生(+++)。　　2.5.3免疫组化的判断标准参照　　3.2胃黏膜病理观察　　3.2

5、.1肉眼观察空白组胃黏膜呈粉红色，皱襞排列整齐，伸展性好，未见增生结节。造模组大鼠胃腔变形，胃黏膜呈灰白色，皱襞平坦，有2例增生结节。西药组黏膜较暗淡，较正常黏膜变薄，未见增生结节。中药组胃黏膜呈粉红色，皱襞排列规则，未见增生结节。　　3.2.2光镜下观察空白组大鼠胃黏膜上皮细胞排列整齐，腺体形态规则，大小一致，细胞呈单层柱状，胞浆透明或呈小空泡状，腺上皮和腺管分界清楚，固有层偶见炎性细胞浸润，黏膜肌层未见增生。造模组胃黏膜明显变薄，腺体排列紊乱，黏膜表面可见散在的陈旧出血点，上皮细胞形态大小不一，核浆比例增大，出现共壁或背靠背现象，黏膜肌层向黏膜层延伸。中药组胃黏膜腺体

6、排列较整齐，细胞形态较均一，腺上皮和腺管分界清楚，炎细胞浸润主要局限于黏膜浅层，固有腺体保持完整。西药组胃黏膜幽门腺有部分萎缩，胃小凹延长，病变黏膜固有层内慢性炎细胞浸润，甚至有淋巴细胞聚集及淋巴滤泡形成，血管增生，腺上皮呈不同程度的变性、萎缩，并夹杂有不少杯状细胞。固有层内腺体数目减少，有时腺体呈囊性扩大或共壁现象，细胞形态大小不一，核浆比例失调。各组大鼠病理结果见表1。表1各组大鼠的病理评定结果（略）　　在阴性与阳性的计数比较中：中药组和西药组分别与模型组进行比较均有统计学意义，且在中药组和西药组的比较中，中药组亦优于西药组，差异显著有统计学意义（P<0.05）

7、表2各组大鼠病理结果阴性与阳性的计数比较（略）　　3.3免疫组化检验结果综合计分后，乘积大于3分为免疫反应（+）做为标准，中药组与模型组进行比较有统计学意义（P<0.01）；P16，中药组与西药组进行比较有统计学意义（P<0.01）结果见表3。rasP21组中药组与西药组比较无统计学意义（见表4）。综合计分后对积分的均数进行组间比较：中药组和西药组分别与模型组进行比较均有统计学意义（P<0.01），且在中药组和西药组的比较中，中药组亦优于西药组，差异显著有统计学意义（P<0.01）。结果见表5。表3各组