DB13T 1471-2011 黄瓜耐盐性鉴定技术规程.pdf

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1、ICS65.020.01B05DB13河北省地方标准DB13/T1471—2011黄瓜耐盐性鉴定技术规程Rulesforidentifyingsalttoleranceofcucumberlines2011-11-15发布2011-11-30实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1471—2011前言本标准依据GB/T1.1—2009的规定编写。本标准由沧州市质量技术监督局提出。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心、沧州市农林科学院。本标准主要起草人：张越、刘仲齐、阎旭东。IDB13/T1471—2011黄瓜耐盐性鉴定技术规程1范围本标准规定了

2、利用叶表皮细胞进行黄瓜耐盐性鉴定的方法及评价指标。本标准适用于黄瓜品种资源和育种材料的耐盐性鉴定及评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1叶片表皮细胞死亡率指从黄瓜叶片上剥离下来的表皮细胞，浸泡在一定浓度的NaCl溶液中胁迫一段时间后，表皮细胞死亡的数量占观察细胞总数的比率。4耐盐性鉴定原理用叶表皮细胞的死亡率能快速鉴定黄瓜耐

3、盐潜力。黄瓜的叶表皮细胞在高盐环境中，发生质壁分离，最后导致细胞质膜的破裂。耐盐能力不同的细胞，在盐胁迫环境中发生质膜破裂的程度不同。以染料中性红为指示剂，对黄瓜的叶表皮细胞进行染色，质膜没有破裂的活细胞，其液泡内的微酸性环境使中性红变成樱桃红色。质膜破裂的死细胞不着色。根据着色细胞的多少可以区分耐盐能力不同的黄瓜品种。5耐盐性鉴定方法5.1鉴定准备5.1.1培养器皿的选择选择72孔的育苗盘进行育苗，穴孔直径2.5cm、深度3cm。5.1.2种子选择选取籽粒饱满、整齐一致的种子，种子的品质应符合GB4404.1标准要求。5.1.3培养基质的准备选择粒径

4、为1mm的蛭石和优质草炭作为培养基质，蛭石和草炭在试验前100℃高温灭菌2h。1DB13/T1471—20115.1.4盐溶液的配置-1将175.5g分析纯NaCl溶解在1000ml去离子水中，配制成3.0mol·LNaCl溶液。5.1.5染色剂的配置将0.3g中性红溶解在1000ml去离子水中，配制成0.03％的中性红（3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐，分子式C15H16N4·HCl）溶液。5.2鉴定步骤5.2.1种子的催芽将准备好的种子置于培养箱内催芽，温度25℃±1℃，催芽时间16h～24h。5.2.2播种待种子发芽后播于装有蛭石：草炭（1

5、:1）的育苗盘中育苗。5.2.3培养培养温度为昼温25℃±1℃、夜温18℃±1℃，培养湿度为60％。5.2.4盐胁迫及染色处理当黄瓜幼苗长出2片真叶时，选取黄瓜幼苗的第一片真叶，剥离叶片下表皮，放在0.03％中性红-1溶液中染色10min，置于浓度为3.0mol·L的NaCl溶液中处理10min。6耐盐性评价6.1叶片表皮细胞死亡率的计算2把染色后的叶表皮放在10×10倍的光学显微镜下观察，用C5型0.5网形目镜尺在（5×5）mm范围内统计活细胞数量和细胞总数。叶片表皮细胞死亡率的计算公式如下：细胞死亡率（％）=（单位面积细胞总数-单位面积活细胞数）/

6、单位面积细胞总数×1006.2耐盐性评价根据单位面积叶片表皮细胞的死亡率，把黄瓜的耐盐性分成强、中、弱三个等级。表1黄瓜耐盐性分级标准级别叶片表皮细胞死亡率（A）耐盐性1A≤20％强220％＜A＜60％中等3A≥60％弱_________________________________2