人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察

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1、人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract：ObjectiveTodevelopanudemousemodelofhumangastriccancerthatcanmimicitsnaturalhumanbiologicactivities.MethodsHumangastriccancercelllineSGC-7901icerepeatedlyfor5generationstogetthesubcutaneoussolidtumor,ulsifiedandorthotopicly

2、inplantedintotheanteriorachin16nudemice.Thetumorgroor-takerateandmetastaticrateoranditslymphaticandhepaticmetastases,afterroutineH-Estaining;theultrastructures,byelectronmicroscopy;andCOX-2,byimmunohistochemicalmethod．ResultsThetumor-takerateetastasistolymphnodesandliverationodel

3、ofhumanstomachcancerestablishedisqualified,exhibitingnaturalgroachneoplasms;orthotopicthansplantation;diseasemodel;nudemouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。如移植瘤常有

4、包膜、局限性生长、很少发生局部或远处器官的转移，故未能很好地被应用于研究人癌潜在的侵袭与转移特性。我们选用低分化胃腺癌细胞系SGC-7901通过裸鼠皮下传5代后再原位移植建立的动物模型局部呈浸润性生长、局部或远处有肿瘤转移，为胃癌的研究提供了一个很好的载体。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物BALB/C/nu/nu裸小鼠由中科院国家啮齿类上海实验分中心购买，繁育自无特殊致病原(specialpathogenfree，SPF)实验动物屏障环境。雌雄兼用，5～6周，体重（17±2.5）g，分笼饲养（每笼5只）。实验过程中均在SPF屏障环境内饲养。实验前

5、1周购入小鼠，使之适应新环境。1.1.2瘤株人胃腺癌SGC-7901细胞株，由中科院上海细胞生物研究所提供。癌细胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中，于CO2恒温孵育箱中培养，常规传代。1.1.3COX-2羊抗人单克隆抗体及其免疫组化染色试剂盒购自苏州福佑生物技术有限公司。1.2方法1.2.1人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立1.2.1.1皮下移植瘤模型的建立收集体外培养的SGC-7901细胞，使细胞含量为2×1010个/L，取0.1ml注入裸小鼠颈部皮下形成实体瘤。至肿瘤直径1.5cm左右时，处死裸小鼠，切取肿瘤放入生理盐水（含105U/L

6、青霉素和105U/L链霉素）中，去除包膜，选择近边缘新鲜组织大约1mm3以粗针穿刺接种于另一只小鼠，每次传代4只，反复传5代后作为原位移植用瘤源。1.2.1.2原位移植模型的建立裸小鼠术前禁食12h，以0.6％戊巴比妥钠腹腔内注射（50mg/kg）麻醉。常规消毒皮肤，取上述传5代后生长3周左右处于对数生长期的荷瘤鼠，常规消毒，从颈部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织，剪成1mm×1mm×1mm小块，以8-0丝线穿过浆肌层将上述一块瘤组织荷包缝扎在刮破浆膜的胃大弯前壁，荷包直径约0.4cm。分层关腹。术后精心饲养，每

7、日观察1～2次，每周称1次体重。1.2.2光镜和电镜常规观察肿瘤形态学1.2.3免疫组化S-P法检测肿瘤组织诱导型环氧化酶-2（COX-2）表达判定标准COX-2表达阳性的判断以>10%的肿瘤细胞的细胞质出现棕黄色颗粒者判断为阳性。2结果2.1人胃癌组织块原位移植瘤的生长情况共建立供生长特性观察的原位移植模型鼠16只，成功率100%（16/16）。移植术后3～4周于左上腹部可扪及直径2～3mm质地较硬的结节，随后肿瘤结节逐渐生长增大，5～7周时上腹部可扪及较明显的肿块，同一组荷瘤鼠肿瘤结节的大小略有差异。8～10周时，上腹部肿块的直径可达1.0～1

8、.5cm，大部分动物消瘦明显，活动欠佳。以后瘤体继续增大，腹部可见巨大瘤体突起，