肾细胞癌组织中△np63和mdm2蛋白的表达及其临床意义

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1、肾细胞癌组织中△Np63和MDM2蛋白的表达及其临床意义【摘要】目的探讨△Np63和MDM2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭与转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法，检测76例肾细胞癌和14例正常肾组织中△Np63和MDM2蛋白的表达。结果肾癌组织与正常肾组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=28.34、22.57,q=6.471～12.529,P<0.05）；不同病理类型的肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异均无显著性（q=0.093～2.169,P>0.05）；不同临床分期肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有

2、显著性（F=24.59、10.82,q=4.694～11.971,P<0.05）。△Np63和MDM2蛋白的表达存在着显著相关性（rs=0.513,P<0.05）。结论△Np63和MDM2蛋白可以作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标。【关键词】肾肿瘤△Np63原癌基因蛋白质cmdm2免疫组织化学　　［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheexpressionsof△Np63andMDM2proteinsinrenalcellcarcinoma(RCC)andtheirrelationshiporinvasionandmeta

3、stasis.MethodsUsingimmunohistochemicalmethod,△Np63andMDM2in76RCC,and14normalrenaltissuesalrenaltissuesho(F=28.34,22.57;q=6.471-12.529;P<0.05);aybeusedasbiologicalparametersreflectinginvasionandmetastasisofthiscancer.［KEYDM2蛋白在肾细胞癌中的表达情况及其意义，探讨二者在肾细胞癌发生发展中可能发挥的作用，从而为临床早期判断肾癌的生物学行为和寻求

4、新的治疗途径提供参考资料。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料实验组76例标本均为我院2000～2006年间手术切除的肾细胞癌标本。其中男46例，女30例；年龄34～85岁，平均56.2岁。病理学分型为：透明细胞癌48例，嗜色细胞癌10例，嫌色细胞癌5例，未分类型及其他13例。ROBSON分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期14例，Ⅳ期17例。有淋巴结转移31例，无淋巴结转移45例。对照组14例肾组织均取自离肿瘤2cm以上的正常肾组织。　　1.2方法　　1.2.1主要试剂及　　小鼠抗人MDM单克隆抗体（Dako公司），△Np63鼠抗人单克隆抗体浓缩液(Sa

5、ntaCruz公司)，SP免疫组化试剂盒（通用型），DAB显色试剂盒，EDTA抗原修复缓冲液和柠檬酸抗原修复缓冲液（福建迈新公司）。　　1.2.2免疫组织化学染色　　石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，0.01mmol/LPBS冲洗5min,共3次。根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复（其中P63为柠檬酸，pH6.0修复，MDM2为EDTA，pH8.0修复）。每张切片滴加体积分数为0.03的H2O2双蒸水溶液，室温下放置10min，用PBS振洗5min,共3次。滴加正常非免疫动物血清，室温放置10min，甩去多余液体不洗。滴加适当稀释的一抗（P63为1∶

6、100，MDM2为1∶75），于湿盒内室温下放置1h，PBS振洗5min,共3次。滴加生物素化二抗，置湿盒内室温放置15min，PBS振洗5min,共3次。滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液，置湿盒内室温放置15min，PBS振洗5min,共3次。DAB显色，镜下观察，自来水冲洗中止显色。复染核，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阳性对照和阴性对照分别采用已知的阳性切片和PBS代替一抗，步骤与前相同。　　1.2.3结果判定　　利用德国SimplePCI图像分析系统进行灰度测量，将免疫组化染色结果转化为灰度值进行定量分析。每张切片以组织间质空白处入射光的值为

7、定标，在200倍镜下每张切片选取5个视野，分别测定间质灰度和肾癌灰度，取其平均值，作为△Np63和MDM2蛋白表达测定值，测定值＝间质灰度值-癌组织灰度值。　　1.2.4统计学处理　　应用SPSS11.0统计学分析软件进行统计学处理。组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK法，蛋白表达之间的相关分析采用Spearman法。　　2结果　　2.1△Np63、MDM2蛋白的表达实验组中△Np63蛋白主要表达于肾癌细胞细胞核，呈棕黄色颗粒，MDM2主要表达于肾癌细胞细胞核；对照组中△Np63和MDM2蛋白少量表达于近曲、远曲肾小管上皮细胞细胞核。14例正常肾组