sars 冠状病毒n 基因的扩增与克隆

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1、栏　　目：论著·基础研究SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆作者：肖维威1；马文丽1；张宝1；王艳1；毛向明1；彭翼飞1；宋艳斌1；吴清华1；郑文岭2　　(1第一军医大学分子生物学研究所，广东  广州  510515；2广州军区广州总医院分子肿瘤学研究所，广东  广州510010)摘要：目的  RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法  根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列，利用PrimerPremier5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因，PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果  序列分析表明，pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论  

2、N蛋白基因的扩增、克隆成功，为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。关键词：严重急性呼吸综合征；N基因，冠状病毒；逆转录-聚合酶链反应中图分类号：Q786  文献标识码：A  文章编号：1000-2588(2004)01-0039-03AmplificationandcloningoftheNgeneofSARS-associatedcoronavirusXIAOWei-wei1；MAWen-li1；ZHANGBao1；WANGYan1；MAOXiang-ming1；PENGYi-fei1；SONGYan-bin1；WUQing-hua1；ZHENGWen-ling21Instit

3、uteofMolecularBiology,FirstMilitaryMedicalUniversity,Guangzhou510515,China;2InstituteofMolecularOncology,GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouCommand,Guangzhou510010,ChinaAbstract:Objective  ToamplifyandclonetheNgeneofsevereacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus.MethodUsingprimerPremier5.0sof

4、tware,twopairsofnestedPCRprimersweredesignedtoamplifytheNgene.Afterpurification,theamplifiedproductswereclonedintopMD18-Tvectors,andthepositivecloneswiththeinsertedfragmentswereidentifiedbysequenceanalysis.Results  Theamplifiedproductswasabout1375bpinlength,andsequenceanalysisdemonstratedthattheNge

5、nefragmentshadbeensuccessfullyinsertedintopMD18-Tvectors.Conclusion  ThesuccessfulamplificationandcloningofNgenefacilitatesfurtherinvestigationoftheexpressionoftheNproteinandstudyofitsstructureandfunctions.Keywords:severeacuterespiratorysyndrome;SARS:N-gene,coronavirus;reversetranscription-polymera

6、sechainreaction收稿日期：2003-07-01作者介绍：肖维威(1974-)，女，1998年毕业于第一军医大学，现为第一军医大学在读博士研究生，讲师，电话：020-61648114-89097通讯作者：马文丽，电话：020-61648210,E-mail:wenli@fimmu.comCorrespondingauthor:MAWen-li,E-mail:wenli@fimmu.com    2003年4月16日，WHO正式确认SARS冠状病毒是SARS感染的病原体。生物信息学分析和病毒学研究表明，SARS冠状病毒不属于任何已知的冠状病毒家系，是一类新型病毒[1][2]。SAR

7、S病毒颗粒周围环绕着象日冕一样的圆环，圆环之上和外壳表面分布着大大小小的蛋白。但对感染致病起重要作用的可能是6种关键蛋白：E蛋白、S蛋白、M蛋白、N蛋白、多聚酶和3CL蛋白水解酶[2][3]。本研究应用自行设计的巢式引物RT-PCR扩增了其中的N基因，并对N基因进行了克隆和鉴定，现将实验结果报告如下。    1  材料与方法    1.1  材料    样品取自北京SARS住院患者的痰液标本；受体菌TOP10