冰片对麻醉大鼠海马gaba、glu和β-ep表达的影响

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1、冰片对麻醉大鼠海马GABA、GLU和β-EP表达的影响作者：王道刚，张钰琴，张光荣，凌江红【摘要】目的探讨冰片对麻醉大鼠海马齿状回区γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLU)、β-内啡肽(β-EP)表达的影响。方法SD雌性大鼠55只，随机分为空白组5只，模型组、乙醇对照组、冰片(低、中、高3个剂量)组各10只。低、中、高剂量3个剂量冰片组预先给予冰片乙醇溶液灌胃，乙醇对照组给予等量的乙醇溶液。用药3d后，水合氯醛麻醉大鼠，应用免疫组织化学的方法，研究冰片预处理对麻醉大鼠海马内GABA，GLU和β-EP的表达的影响。结果GABA、GLU及β-EP在各组大鼠大脑海马齿状回区均

2、有表达。模型组、乙醇对照组与空白组大鼠海马齿状回GABA表达量无明显差别，低、中、高剂量冰片组GABA表达量均较空白组及模型组显著减低(P<0.01或P<0.05)。各组大鼠海马齿状回区GLU表达均无显著差别(P>0.05)。模型组大鼠海马齿状回β-EP表达量较空白组明显减低(P<0.05)，中、高剂量冰片组β-EP的表达量较模型组明显增加(P<0.01或P<0.05)，高剂量组较乙醇对照组亦有明显的增加(P<0.05)。结论降低麻醉大鼠海马GABA的表达和增加β-EP的表达可能是冰片“开窍”作用机制之一。【关键词】冰片;昏迷;催

3、醒;神经递质11　芳香开窍药冰片功能开窍醒神，用于闭证神昏。近年冰片作用机制研究主要集中在其通过血脑屏障和脑保护方面[1～3]，其影响神经递质的研究尚较缺乏。本实验拟通过观察冰片溶液对麻醉大鼠海马内γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLU)、β-内啡肽(β-EP)的影响，进一步探讨冰片开窍醒神的作用机理。　　1材料与方法　　1.1动物SD大鼠，清洁级，雌性，体质量(200±20)g/只，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2003-0003。　　1.2用品机制冰片(购于湖南株州松本林化有限公司)，冰片溶液先由冰片与95%乙醇配制而成，分别为5，20，40g

4、/100ml三种质量体积分数的溶液，4℃密封保存，使用时取0.1ml/200g大鼠体质量，稀释至3ml混悬液，等同于乙醇浓度为3.2%;GABA多克隆抗体、GLU多克隆抗体、即用型SABC试剂盒、DAB显色剂(武汉博士德);多聚甲醛、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠(国药集团化学试剂有限公司，级别均为分析纯)。　　1.3动物分组、造模与取材取大鼠55只，随机分成空白组5只，模型组、乙醇对照组、冰片组(低、中、高3个剂量组)各10只。低、中、高剂量冰片组分别给予冰片乙醇溶液3ml灌胃311d，乙醇对照组给予同浓度(3.2%)同剂量(3ml)的乙醇溶液灌胃，模型组及空白组不予灌胃药物。

5、第3天给药后，除空白组外，所有大鼠应用水合氯醛(350mg/kg)麻醉，待翻正反射恢复(大鼠连续3次仰卧后恢复站立为翻正反射恢复)后再次应用1/2原剂量的水合氯醛麻醉，10min后，剪开胸腹腔，暴露心脏，将20号注射针头(切成平头磨钝)从左心室插入主动脉，用止血钳固定，剪开右心耳，快速灌注生理盐水300～500ml冲洗，至大鼠肝脏发白，流出液基本无色为止。随后灌注4%多聚甲醛先快速灌注100ml再缓慢灌注400ml，至头颈与四肢均已发硬。静置30min后断头取脑，置于4%多聚甲醛中，放入4℃冰箱固定3～4h，依次经过脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤制作成蜡块。空白组大鼠应用水

6、合氯醛(175mg/kg)麻醉后，用以上方法取材、固定、包埋后备用。　　1.4GABA、GLU及β-EP检测方法应用免疫组织化学方法，依据博士德试剂使用说明书操作。其中一抗操作浓度为1∶100，以PBS液代替一抗作为阴性对照。　　1.5图像分析及数据处理采用Lecia显微镜高清彩色病理图像分析系统对切片进行图像分析。所有切片分析在同一强度，同一放大倍数(40×10)下进行。利用Image-ProPlus6.0图像分析软件，检测阳性信号的积分光密度(IntegratedOpticalDensity，IOD)，将每张切片选取3个视野，取平均值来计算免疫组化阳性信号的IOD的平

7、均值。所得数据以±s表示,11应用SPSS13.0统计软件统计，多组间比较用单因素方差分析(One-WayANOVA)，方差齐采用LSD方法，方差不齐采用Games-Howell方法。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1各组大鼠海马齿状回区GABA、GLU和β-EP表达的细胞定位　　大鼠脑组织内GABA、GLU、β-EP免疫阳性物质在脑内分布广泛。GABA于海马齿状回颗粒细胞的胞膜胞浆均着色，如图1～3所示，高剂量冰片组较模型组和空白组阳性表达减少;GLU于胞浆内着色，如图4～5所示，低剂量冰片组与空白组