棉酚生物合成关键酶杜松烯合成酶基因的克隆及表达研究

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1、分类号Ｓ３３０ｉｍ学号誦１６５山巧ｉｆ大聲全日制硕±学位论文棉国分生物合成关键酶杜松婦合成酶基因的克隆及表达研究姓名；高艳菊指导教师：黄晋跨教授学科专业：作物遗传育种培养单位：农学院中国？山西？太谷二〇＿五年六月ＳｈａｎｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｕ－ｌｌｔｉｍｅＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅｇＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＣｏｔｔｏｎＡＢＨｃａｄＧｅｎｅａＫｅｙＥｎｚｙｍｅｉｎｔｈｅＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＧｏｓ

2、ｓｏｌｙｐＮａｍｅ；ＹａｎｕＧａｏｊＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＪｉｎｌｉｎｇＨｕａｎｇＭａｏｒ：ＣｒｏＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇｊｐＴｒａｉｎｉｎｇＵｎｉｔ：ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＴａｉｕＳｈａｎｘｉＣｈｉｎａｇＪｕｎｅ２０１５，学位论义原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文，是在导师指导下，独立进行研究工作所取得的成果。换文中已注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文研究做出过重要贡献的个人和集体，均已在文中ｋ乂明确方式标明。本人

3、完全意识到本声明的法律后果由本人承担。＞之作者签遂（亲笔）：馬樓萄／夕年月／日学位论义版权使用授权书本学位论文作者完全了解学枚有关保留、使用学位论文的规定。即学位论文的知识产权属山西农业大学；同意学校保留并向国家有关、复印件和电子版部口或机构送交论文的原件；允许论文被查巧和借巧；本人授权山西农业大学可ｋ义将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可从采用影印、缩印或担描等复制手段保存、；ｎ编学位论文。／么作者签為（亲笔南絶瑪却巧年＾月日导师签違（亲笔年Ｙ月／＞目目录Ｍ＾１一第部分文献综述３１１．植物的次生代谢及储藏器

4、官３Ｕ．１植物的次生代谢３１丄２棉敵及其生物学作用３Ｕ．３棉４瞭的储藏器官１．２棉酪代谢途径及其关键酶基因的克隆５１２．．１棉酷代谢途径５，１．２．２棉献合成关键酶基因杜松帰合酶的研究６１．２．３基因克隆的策略７１．３低筋棉育种研究进展８１．３．１低酪棉育种新目标８１３２．．棉花色素腺体延缓形成性状９１．４本研究的目的和意义９１．５技术路线１０第二部分色素腺体表型及棉獻含量的测定１１２．１供试材料及试剂１１２丄１供试材料１１２丄２试验试剂１１２丄３试验仪器１１２．２试验方法１１

5、２．２．１色素腺体密度测定１１２．２．２棉酶含量测定１２２３１．结果与分析３２．３．１Ｈ种近等基因系色素腺体分布１３２．３．２ＧＩ１、ＧＩ３品系云个不同时期各组织棉献含量的测定１６２．３．３ＧＩ１、ＧＩ３品系各组织在不同时期棉齡含量的变化１７２．４職１８２．４．１色素腺体分布的多样性１８２．４．２色素腺体与棉酌相关性１８２．４．３色素腺体延缓形成１９２．５结论１９第Ｈ部分棉花杜松稀合酶基因的克隆与序列分析２０３．１供试材料及试剂２０３丄１供试材料２０３丄２试验试剂２０２０３丄３引物及测序

6、３丄４试验仪器２０２３．２试验方法１３．２．１ＤＮＡ的提取２１３．２．２总ＲＮＡ的提取２２３．２．３ｍＲＮＡ２２的分离３．２．４ｍＲＮＡ反转录２３３．２．５引物搜计２５３．２．６杜松帰合酶基因ｃＤＮＡ中间部分的克隆２６＇３ＣＤＮＡ５２７．２．７化松締合酶基因端的克隆＇３．２．８杜松婦合酶基因的３ＲＡＣＥ２７＇３．２９３ｃＤＮＡ３１．末端的扩增３３２．２．１０杜松帰合酶基因的基因组序列克隆３．２．１１扩増产物的检测及回收３３３．２．１２ＬＢ培养基的配方３４３．２．１３载体的连接及转化

7、３４３．３结果与分析％３．３．１总ＲＮＡ质量的检测３６３ＮＡ的３６．３．２基因组Ｄ质量检测３．３．３杜松巧合酶基因中间片段的合成３７＇３．３．４杜松帰合酶基因５端片段的合成３８＇３．３．５化松帰合酶基因３端片段的合成３８３．３．６完整杜松稀合酶基因的拼接４０３．３．７地成化／基因ｃＤＮＡ的生物信息学分析４１３．３．８粗松帰合酶基因的基因组序列克隆及分析４４３４４