波棱素脂质体冻干粉针的制备及初步安全性和药效学研究

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1、波棱素脂质体冻干粉针的制备及初步安全性和药效学研究　　[收稿日期]2014-05-17[基金项目]国家自然科学基金项目（81674168）；四川省科学支撑项目（2011FZ0053）；四川省应用基础研究项目（2012JY0027）[通信作者]*顾健，教授，研究生导师，主要从事中药及民族药物开发与研究，Tel：13882156288，E-mail：gujiancd@163.com[作者简介]张鑫，硕士研究生，E-mail：617751077@qq.com[摘要]该文研究了波棱素（herpetin，HPT）脂质体冻干粉针剂的制备方法，并对其初步安全性和药效学进行评价。采

2、用薄膜分散法制备HPT脂质体溶液，以包封率、粒径等为评价指标，筛选最佳冻干保护剂；对冻干粉针进行稳定影响因素实验，并初步研究了HPT脂质体冻干粉针的安全性以及对CCl4所致急性肝损伤模型小鼠的治疗效果。质量分数5%乳糖+5%蔗糖为最佳冻干保护剂，按照最优处方制得的脂质体冻干粉针复水后，平均包封率为（99.70±0.50）%，平均粒径为（107.0±1.2）7nm，平均电位为（-6.11±0.72）；脂质体冻干粉针对温度、湿度及光照均较为敏感；脂质体冻干粉针复水后不会引起溶血和红细胞聚集反应，静脉注射对血管亦无明显影响；HPT脂质体对CCl4所致急性肝损伤模型小鼠的治

3、疗效果明显，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）指标水平均明显改善，治疗效果明显优于HPT原药。按照最优处方制备的波棱素脂质体冻干粉复水后粒径均匀，包封率符合《中国药典》要求，且具有较高的安全性，能显著提高HPT的治疗效果，保存时应该注意低温、避光、密封保存。[关键词]波棱素；脂质体；粉针剂；安全性；药效学波棱素（herpetin，HPT）是从藏药波棱瓜HerpetospermumcaudigerumWall.子中的木脂素分离出来的活性单体成分。药理学活性研究表明，其具有抗肝损伤、保肝降酶、抑制乙型肝炎病毒复制的作用[

4、1]。但HPT的水溶性很差，口服生物利用度低，为了克服HPT的上述缺点，并增强其治疗肝脏疾病的效果，作者在前期研究中利用薄膜蒸发法制备HPT脂质体。本研究进一步对HPT脂质体冻干粉针制剂进行筛选，并初步考察了HPT脂质体冻干粉针的安全性及对肝损伤模型动物的治疗效果。1材料7Acquity型超高效液相色谱（美国，Waters）；ZS90激光粒度仪（英国，Malvern）；冷冻干燥机；LHH药品稳定性试验箱（上海一恒科学仪器有限公司）；可见分光光度计（上海箐华科技仪器有限公司）；台式高速离心机TGL-16G（无锡市瑞江分析仪器有限公司）。波棱素对照品（自制，纯度为98.

5、59%）；波棱素原料药（自制，纯度>95%）；大豆卵磷脂购自德国Lipoid公司；胆固醇购自美国Sigma公司；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）试剂盒购自长春汇力生物技术有限公司。超滤离心管（10kDa）购自Millpore公司，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。ICR小鼠，SPF级，体重18～22g，雄性；家兔，体重1.8～2.2kg，雄性，均购自于成都达硕实验动物研究中心，动物合格证号分别为SCXK（川）2013-24，SCXK（川）2013-14。2方法与结果2.1HPT脂质体溶液的制备根据前期研究结

6、果，采用薄膜分散法制备HPT脂质体溶液[2]：称取波棱素单体24.4mg、胆固醇195.1mg、大豆磷脂780.5mg，置于圆底烧瓶中，加入100mL氯仿溶解，水浴减压除去氯仿，成膜，加入0.5%泊洛沙姆F6850mL脱膜，将得到的类脂膜初悬液水浴超声20min，过0.22μm滤膜，即得HPT脂质体溶液。经测定，HPT脂质体平均包封率（94.50±2.15）%，平均粒径（119.2±10.7）7nm，多分散系数为0.156±0.075。2.2冻干粉针处方筛选选择常用的葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖为冻干保护剂选择不同种类、不同浓度的冻干保护剂，见表1，溶于HPT脂质体溶

7、液中，冷冻干燥后，制得HPT脂质体冻干粉针，观察以下评价指标：①外观及色泽；②再分散性；③粒径；④包封率，筛选出适合的冻干保护剂。选择5%乳糖+5%蔗糖作为复合冻干保护剂，HPT脂质体复水后，粒径最小，包封率最高，外观和再分散性也较好，故选择5%乳糖+5%蔗糖作为HPT脂质体的冻干保护剂。2.3初步稳定性研究取HPT脂质体冻干粉针样品进行影响因素实验考察，分别选取①高温试验条件：40℃；②高湿试验条件：相对湿度（RH）75%；③光照试验条件：4500lx的光照。将冻干粉针样品分别放置上述条件下，于第5，10天取出样品，观察HPT脂质体冻干粉针变化情况，测定渗漏率