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1、维生素C在铝、铁、铅3种离子诱导神经细胞凋亡中的作用【摘要】目的:研究不同剂量不同时间铁、铝、铅元素神经细胞生存能力的影响和VitC在铁、铝、铅元素诱导神经细胞凋亡中的作用。为探讨微量元素生理功能提供理论依据和资料。方法:采用体外培养脑胶质瘤细胞,MTT比色法测定40μmol/L、400μmol/L浓度下的三氯化铝、硫酸亚铁、醋酸铅3种药物及3种药物联合250μmol/LVitC对脑胶质瘤细胞体外生长的影响。结果:24h醋酸铅、三氯化铝联合维生素C实验组,细胞生长抑制作用明显大于400μmol/L和40μmol/L浓度组。最弱为40μmol/L浓度硫酸亚铁,
2、细胞数量明显高于联合VitC和400μmol/L浓度组。72h各实验组对细胞生长抑制作用减弱,40μmol/L浓度的硫酸亚铁细胞生长数量明显高于其他实验组。除硫酸亚铁+VitC、40μmol/L浓度组与对照组无统计学意义,其他各实验组细胞数量明显低于对照组。结论:铝离子、高浓度铅离子和高浓度铁对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,VitC能增强铁、铝、铅离子诱导胶质细胞凋亡。其中VitC对铝离子的效应大于铅离子和铁离子。【关键词】铁;铝;铅;胶质瘤细胞;维生素C;MTT维生素C（VitminC,VitC）是一种水溶性物质,具有可逆的氧化还原作用。VitC是自然界
3、广泛存在的一种抗氧化剂,VitC联合其他抗癌药物治疗恶性肿瘤方法具有潜能,体外及动物实验证实它对多种肿瘤有明显的抑制作用。但高浓度VitC可致细胞毒性,适量VitC对体外中脑神经的生长发育有一定的促生长分化作用。研究发现VitC通过影响细胞周期增强三氧化二砷诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡[1]和诱导肝癌细胞凋亡[2]。铁是细胞生长增殖及机能活动所必需微量元素之一,在细胞生长周期中铁的调控起重要的作用,VitC联合Fe2+对细胞生长状态的影响存在一定的剂量反应关系,不同剂量作用可引起细胞生长状态的不同变化,适量VitC/Fe2+可诱导细胞凋亡[3]。铝、铅元素属于
4、低毒性金属元素,铝元素可导致神经行为损害、记忆力减退、早老性痴呆等某些中枢神经功能障碍。铝可对原代培养皮层神经细胞产生细胞毒性,可引起细胞结构改变,抑制皮层神经细胞生长,并可诱导细胞凋亡[4]。铅元素对心血管系统、神经系统、泌尿系统、生殖系统都有毒性效应,铅对神经系统有很强毒性高浓度的铅可导致儿童严重的智力低下和不可逆的大脑损伤,铅接触引起海马神经元细胞凋亡可能是铅损害学习记忆的重要机制之一[5]。研究铁、铝、铅元素细胞毒性及VitC对铁、铝、铅元素诱导肿瘤细胞凋亡作用的影响,为临床提供依据。1材料和方法1.1材料RPMI1640培养液、胎牛血清购自Gibc
5、o公司;VitC纯品（配制浓度250μmol/L的VitC）、胰蛋白酶购自Sigma公司;脑胶质瘤细胞株为宁夏医学科学研究所提供;三氯化铝、醋酸铅、硫酸亚铁、二甲亚砜为国产分析纯。1.2方法1.2.1细胞培养脑胶质瘤细胞在含有100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中,置于37℃、50mL/LCO2培养箱常规培养。用2.5g/L胰酶（PBS配）消化传代,传代密度一般为5×108/L,传至3代后细胞用于实验,实验选用对数生长期的细胞,用2.5g/L胰酶和0.2g/LEDTA混合消化液消化,用培养液稀释成单细胞悬液,以4000个/孔接种于96孔板中,待细胞
6、贴壁后吸出原液,设立对照组与实验组,每组均设4个平行孔。1.2.2MTT比色法测定及其联合VitC对脑胶质瘤细胞增殖的影响细胞准备方法同1.2.1,按以下分组加药,单独用药6个实验组:40μmol/L和400μmol/L浓度三氯化铝、硫酸亚铁、醋酸铅3种药物。联合VitC3个实验组:250μmol/LVitC分别加40μmol/L浓度三氯化铝、硫酸亚铁、醛酸铅3种药物。1组空白对照组:每孔加含血清的培养液。移入恒温箱内继续培养,分别于24、72h时间段在倒置显微镜下摄像。每孔加入20μLMTT（质量浓度为5g/L,用0.01mol/L的PBS配制）在同样条件
7、下培养4h,弃去孔内液体,每孔加入150μLDMSO,振荡10min,酶标仪测定A490值,分别计算24、72h9组药物对细胞抑制率。抑制率=（空白对照组A490值－实验对照组A490值）/空白对照组A490值×100%。1.2.3统计学分析计量资料x±s描述,多组平均数的比较用单因素方差分析,检验水准以P<0.05为差异有统计学意义,采用SPSS11.0软件包进行统计。2结果药物作用下细胞数量的变化:（1）同一浓度不同药物的实验组比较:联合组、单一药物组有相同的变化规律,72h变化规律与24h相同,24h细胞数量明显为硫酸亚铁+VitC>醋酸铅
8、+VitC>三氯化铝+VitC。40μmol/
