血小板gpⅱb-ⅲa拮抗剂rgds和钙通道拮抗剂nifedipine对gpiib-iiia活化的影响

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1、血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb/IIIa活化的影响杨国雷1尹松梅2张复华1牛国敏1凌奕文11.南方医科大学附属南海医院血液内科，广东佛山528200;2.中山大学附属第二医院血液内科，广东广州510120[摘要]目的探讨GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对ADP诱导的血小板GPⅡb/Ⅲa活化的影响。方法GPIIb／11Ia特异性抗体PAC-1标记活化GPIIb／11Ia，流式细胞仪检测静息及ADP（5μmol/L)诱导的血小板PAC

2、-1表达率。结果静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)％；在ADP（5μmol/L）激动下，PAC-1表达率为(77.27±9.47)%；RGDS以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率，IC50值为206μmol/L；Nifedipine能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率，IC50值为178μmol/L；RGDS联合Nifedipine对PAC-1表达的联合抑制率为（60.15±16.35）％，二者的交互效应差异有统计学意义（P<0.05）。结论GPIIb/IIIa受体拮抗剂R

3、GDS和Ca2+拮抗剂Nifedipine均抑制ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化，其抑制作用呈浓度依赖性，随拮抗剂浓度增加抑制作用增强；两者对血小板GPIIb/IIIa活化的抑制存在协同作用。.jyqka）；MouseIgM：FITC、PAC-1FITC（FITC标记活化GPIIb／11Ia特异性抗体），CD61：PerCP，（美国BDIS）。FACSort型流式细胞仪（B-D美国）。1.3实验方法1.3.1血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa测定ACD液抗凝静脉血2mL，分成每份90μL，加入ADP

4、(5μmol/L)孵育5min,实验组加入PAC-1：FITC、CD61：PerCP,对照组分别加入MouseIgM：FITC、CD61：PerCP染色，室温下作用20min,立即加入2～8℃的％甲醛溶液1mL,置2～8℃冰箱内固定30min，24h内上机检测。每次检测时取5μL标本，以CD61PerCP/SSC双参数设门,检测PAC-1阳性血小板的百分率[2]。1.3.2RGDS、Nifedipine单独对血小板PAC-1表达率的作用制备处理标本同上，静息组不加ADP直接测定，对照组加入ADP，药物组分别加

5、入5种不同浓度的RGDS（50、100、200、400、800μmol/L）,Nifedipine（10、20、40、80、160μmol/L）于37℃孵育10min后加入ADP；其余各步骤相同。1.3.3RGDS联合Nifedipine对血小板PAC-1表达率的联合作用制备处理标本同上，药物组同时加入RGDS（200μmol/L）及Nifedipine（160μmol/L）于37℃孵育10min后加入ADP；其余各步骤相同前。1.3.4Nifedipine(160μmol/L)和RGDS(200μmol/L

6、)对血小板PAC-1表达率的联合作用Nifedipine(160μmol/L)对血小板PAC-1抑制率为（44.35±22.81）%；RGDS(200μmol/L)对血小板PAC-1的抑制率为（51.64±17.14）%;二者对血小板PAC-1的联合抑制率为（60.15±16.35）％，经析因设计的方差分析，二者的主效应与交互效应差异有统计学意义（P<0.05）。即二者对PAC-1表达率的抑制存在协同作用。1.4统计方法计量资料的描述用均数±标准差（x±s）表示；PAC-1表达抑制率=[(对照组PAC-

7、1表达率一用药后PAC-1表达率)/对照组PAC-1表达率]x100％。不同浓度药物的单独效应用随机区组设计的方差分析；联合效应用析因设计的方差分析；所有数据均用SPSS16.0统计软件处理。2结果2.1ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化正常人，静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)％；在ADP（5μmol/L）激动下，PAC-1表达率增高,为(77.27±9.47)%。2.2RGDS对血小板PAC-1表达率的作用5种不同浓度的RGDS对PAC-1表达率均有抑制作用，IC50值为2

8、06μmol/L。随着RGDS浓度的增加，抑制作用增强，经随机区组设计的方差分析及SNK法多重对比，各浓度的效应有统计学意义，即RGDS能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率。2.3Nifedipine对血小板PAC-1表达率的作用5种不同浓度的Nifedipine对PAC-1表达率均有抑制作用，IC50值为178μmol/L。随着Nifedipine浓度的增加，抑制作用增强，经随机区组设计的方差