透明质酸刺激因子对增生性瘢痕成纤维细胞透明质酸合成的影响论文

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1、透明质酸刺激因子对增生性瘢痕成纤维细胞透明质酸合成的影响论文杨力鲁开化王强艾玉峰李荟元王胜春【关键词】,.freelgL-1增至0.1gL-1，HA浓度也由（495±37）mgL-1增至（914±75）mgL-1，在一定范围内呈剂量依赖性（P0.01）.继续增加HASF剂量，HA浓度并不成比例增加，呈显出饱和性.随HASF作用时间由3d延长至7d.freelgL-1增至（293±63）mgL-1，也呈剂量依赖性（P0.01），且明显低于单层培养条件下HA的浓度（P0.01）.结论HASF对单层及三维培养的FB有明显的促HA合成作用，并呈剂量和时间依赖性.Keyula

2、tingfactor（HASF）onthehyaluronicacid（HA）syn-thesisofhypertrophicscar-derivedfibroblastsculturedthree-dimensionallyinthemonolayer.METHODSHASF，isolat-edfromthefetalrabbitseraandamnioticfluid，onolayerandthree-dimensionalfibroblastculturesys-tems.TheconcentrationofHAinthesupernatantofthefi-

3、broblastculturesystemseasuredusingradioim┐munoassay.RESULTSConcentrationofHAinthemono-layersystemincreasedfrom（495±37）mgL-1to（914±75）mgL-1inadose-dependentmanner0.1mgL-1to0.1gL-1（P0.01）.TheconcentrationofHAreachedthemaximame-dependentmannerinthepresenceofHASFbetensionalculturesystem，th

4、econcentra-tionofHAincreasedfrom（90±25）mgL-1to（293±63）mgL-1inadose-dependentmanner（P0.01）.CONCLU┐SIONHAsynthesisofhypertrophicscar-derivedfibroblastscanbestimulatedbyHASFbothinmonolayerandthree-di-mensionalfibroblastculturesystemsinadose-andtime-de-pendentmanner.0引言透明质酸（hyaluronicacid，

5、HA）是影响胚胎伤口无瘢痕愈合的重要因素［1，2］.羊水中存在的透明质酸刺激因子（hyaluronicacidstimulatingfactor，HASF）通过刺激伤口部位成纤维细胞而提高伤口部位HA的含量.我们用纯化HASF对增生性瘢痕成纤维细胞生长、增殖及蛋白质合成等［3-6］研究的基础上，观察了其对单层及三维培养条件下的增生性瘢痕成纤维细胞（fibroblast，FB）HA合成的影响.1材料和方法1.1材料新西兰兔，体质量3.0kg左右，孕龄20～25d，由第四军医大学实验动物中心提供.3550型自动酶联仪（美国Beckman）SephadexG-25（中国科

6、学院上海脑研究所）、ConA-Sepharose（瑞典Phar-macia）、透明质酸放免测定盒（上海海军医学研究所）.增生性瘢痕组织6（男4，女2）例，供者年龄17～38岁，男4例，女2例.采用组织块法进行成纤维细胞的原代培养.实验采用第4～10代细胞.取孕兔20只，剖腹取羊水，分离胎兔血清，混匀过滤后经SephadexG-25分子筛层析，用20μmolL-1磷酸钠缓冲液作洗脱液，收集第1蛋白峰.再经ConA-Sephrose亲合层析，当第1个蛋白峰流出后，用含0.1molL-1α-D甘露糖酐的同样缓冲液继续洗脱，收集第2个蛋白峰液体即得HASF溶液.比色法测得H

7、ASF溶液中蛋白质含量为0.63gL-1.1.2方法1.2.1胶原制备［7］女性乳房整形患者3例，年龄18～40岁，取手术切下的正常新鲜皮肤，去表皮及皮下组织，制备真皮组织匀浆，加入5倍量的中性盐提取液（0.05molL-1Tris-HCl，1mmolL-1PMSF，1×10molL-1Na-EDTA，0.1molL-1NEM，1molL-1NaCl，pH7.4）4℃搅拌48h，换液1次，抽滤.浸入0.5molL-1冰乙酸中，加入胃蛋白酶（酶:湿重组织为1∶100），24℃搅拌3h，18000g4℃离心2h.沉淀部分可进行二次胃酶消化，上清液中加入NaCl至0.