雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌skov3细胞增殖的抑制作用

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1、雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用段钊，杨雪梅，邢兰锳，潘艳艳，王艳华，李虹【摘要】目的探讨雷帕霉素单独及联合顺铂应用对人卵巢癌SKOV3细胞生长的影响及可能的分子机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞，实验组分别采用不同浓度的雷帕霉素、顺铂及40nmol/L雷帕霉素+10μmol/L顺铂作用，MTT法检测上述药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测分析细胞凋亡率及细胞周期分布变化。结果雷帕霉素单独及联合顺铂应用均可显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖，其作用呈现时间剂量依赖性，且两药联合作用时抑制率显著增高(P0.05)，显示两药有

2、协同作用;流式细胞仪检测显示雷帕霉素能使卵巢癌SKOV3发生G1期阻滞，同时可诱导细胞凋亡，其凋亡率随用药浓度增加而增加。结论雷帕霉素和顺铂可显著地抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖，阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡，且两药联合应用时呈现协同作用。【关键词】雷帕霉素;顺铂;卵巢癌SKOV3细胞;细胞周期;细胞凋亡　ABSTRACT:ObjectiveTostudyrapamycinaloneorinbinationanovariancancerSKOV3cellsandthepossiblemolecularmechanism.MethodsHumanovari

3、ancancerSKOV3cellsentalgroupinisteredycinandcisplatin,and40nmol/Lrapamycin+10μmol/Lcisplatin.MTTassayinethesedrugsinhibitionrateoncellproliferation;floetryycinaloneorinbinationanovariancancerSKOV3cellsintimeanddosedependentmanners,andthejointeffectofthetetryrevealedthatrapamycin

4、couldcauseG1phasearrestofovariancancerSKOV3cellsandinduceapoptosisatthesametime;theapoptosisrateincreasedycinandcisplatincansignificantlyinhibittheproliferationofhumanovariancancerSKOV3cells,arrestcellcycleandinducecellapoptosis,andthetinisteredinbinationshoycin;cisplatin;ovarianca

5、ncerSKOV3cell;cellcycle;cellapoptosis　　哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)是一种组成非常保守的丝/苏氨酸激酶，是磷酸肌醇激酶3相关激酶(phosphoinositide3kinaserelatedkinase,PIKKs)家族中的一员，它可以整合氨基酸、能量、生长因子等所激发的信号通路，借以调控细胞生长增殖和细胞周期。研究显示，在胰腺癌、肺癌、前列腺癌、食管癌等多种肿瘤中均可发现mTOR信号传导通路被过度激活[15]。抑制mTOR靶蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周

6、期运行、抑制细胞生长增殖、以及逆转其对化疗药物的耐药性。因此，mTOR已成为肿瘤治疗的新靶点。雷帕霉素是一种大环内酯类抗生素，具有较强的免疫抑制、抗真菌和抗肿瘤作用，是mTOR的特异性抑制剂。我们的研究观察了不同浓度雷帕霉素、顺铂单独及联合作用对人卵巢癌SKOV3细胞生物学活性的影响，进一步探讨了雷帕霉素的抗肿瘤作用机制，以期为临床治疗卵巢癌提供新的思路。　　1材料与方法　　1.1材料人卵巢癌SKOV3细胞株由西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室提供。雷帕霉素(纯度≥98%)购自上海贝基生物科技有限公司;RPMI1640培养基、二甲基亚枫(

7、DMSO)购自美国Gibco公司;顺铂注射液、新鲜胎牛血清、四甲基偶氮唑蓝(4methylthiazolyltetrazolium,MTT)、胰蛋白酶、碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染液等购自美国Sigma公司。　　1.2细胞培养人卵巢癌SKOV3细胞生长于含10mL/L小牛血清的RPMI1640+双抗的培养液中，置于37.0℃、5mL/LCO2、100%湿度的恒温培养箱中进行传代培养。细胞呈贴壁生长。　　1.3细胞处理与分组以DMSO溶解雷帕霉素纯品至0.1mol，微孔滤膜过滤除菌，分装4℃保存，临使用时用RPMI1640培养基稀释成实

8、验用各种浓度。顺铂溶于生