小肠rna对受60coγ射线照射后小鼠肠系膜淋巴结细菌移位和血中内毒素含量的影响论文

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1、小肠RNA对受60Coγ射线照射后小鼠肠系膜淋巴结细菌移位和血中内毒素含量的影响论文苏晓明，曾桂英，任东青，周晓光，方恒虎，赵涛，金成，徐修礼【关键词】内毒素EffectsofintestinalRNAonMLNbacterialtranslocationandendotoxininbloodofmiceafterabdominal60Coγirradiation【Abstract】AIM:ToexploretheeffectsofintestinalRNAonMLNbacterialtranslocationandendotoxininbloodofmiceafterabdomin

2、al60Coγirradiation.METHODS:The144BALB/cmalemiceinallyirradiatednormalratsonjejunum.Onday1，3and5afterirradiation，themiceiningendotoxininbloodandbacterialmetatheticrate，andintestinalcryptsurvivalrate.RESULTS:IntestinalRNAcandecreaseMLNbacterialmetatheticrateandthelevelofendotoxininblood.Intestina

3、lRNAcansignificantlyincreasethecryptsurvivalrateofjejunum（P0.01）.CONCLUSION:IntestinalRNAcanimproveintestinalmucosalmechanicalbarrieranddecreaseintestinalbacterialmetatheticrateinirradiatedmice．【KeyartSpecTM3000，BioRAD公司)．健康雄性BALB/c小鼠，体质量24~28g；健康雄性SD大鼠，体质量180~200g，均由第四军医大学实验动物中心提供．1.2方法1.2.1RN

4、A提取和鉴定取正常SD大鼠的小肠，剪碎并称质量后用盐酸胍苯酚氯仿抽提,提取的RNA用消毒的1mL/LDEPC水溶解，用紫外法进行纯度和浓度测定，按下列公式计算样品浓度：样品浓度(g/L)＝40×A260nm×稀释倍数/1000.1.2.2动物和照射选用健康雄性BALB/c小鼠144只，实验前1g/kg体质量）腹腔注射麻醉后固定于带孔的双层有机玻璃照射盒内(侧卧位)，放置在与照射源同高的照射台上，使照射源至动物中心的距离为1m．用60Coγ线进行腹部一次照射，剂量率为249.12cGy/min，剂量为1150cGy，照射总时间的一半后将动物进行翻身照射，以保证照射剂量的均匀.1.2.3

5、小肠RNA的注入小鼠接受腹部照射后1~3h内固定于手术板上，腹正中切口暴露小肠，在距Treitz韧带远端3~4cm处长约4cm的空肠腔内注入含有小肠RNA的生理盐水注入液0.4mL（含小肠RNA40μg），使肠腔中度扩张约10s后，用丝线穿过肠系膜打结作为注入处的标记，并缝合腹壁，称为小肠RNA组；照射对照组小鼠只在肠腔内注入0.4mL无菌生理盐水．1.2.4血浆内毒素测定采集腹主动脉血约0.5mL，3000r/min离心15min，取血浆，-20℃低温保存．采用偶氮基质显色法(测定血浆内毒素含量按试剂盒说明书)．制定标准曲线，即将已知内毒素工作品稀释至1000，600，300，10

6、0，60，30，15EU/L(EU为内毒素活性单位)，使用紫外分光光度计测定各浓度点的A545nm值，订出标准曲线．将-20℃保存的血浆标本置恒温融化后，70℃加热10min，取上清，加反应试剂后测定其吸光度，从标准曲线中求出相应的内毒素含量．1.2.5肠系膜淋巴结细菌定量培养按文献［4］的方法，无菌采集肠系膜淋巴结(mesentericlymphnode)，电子天平称质量后按1∶100（kg/L）的比例加入无菌生理盐水，匀浆后取0.1mL组织匀浆接种至厌氧血琼脂培养板，用L型玻棒涂抹均匀后，置于厌氧培养箱37℃培养24~48h,计数细菌落数．组织细菌菌量(cfu/g)=菌落数×10

7、00．如超过100个/ｇ,即为阳性［5］．1.2.6标本制备和肠腺存活率测定麻醉后解剖小鼠，在距Treitz韧带远端3~4cm处，取约2cm长的空肠段，制备测定肠腺存活率标本．肠腺存活率的测定：取长约2cm长空肠段，卡诺氏液固定，孚尔根染色；在低倍镜下分别计数单位面积肠片上的肠腺数和绒毛数，按下列公式计算肠腺存活率．肠腺存活率(%)＝照射肠片上的肠腺绒毛比/正常肠片上的肠腺绒毛比×100%．正常肠片的肠腺存活率为100％．统计学处理：所有数据均采用SPSS