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《2-干扰素β融合基因的原核及真核表达质粒的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、2-干扰素β融合基因的原核及真核表达质粒的构建中华消化杂志2006年6月第26卷第6期ChinJDig,June,2006,Vo1.26,0-6癌胚抗原启动子调控的白细胞介素一2/干扰素I3融合基因的原核及真核表达质粒的构建王艳李岩崔刚封清川李,J,东李丰LIHong-jie【摘要】目的根据细胞因子问协同作用特点,构建人白细胞介素一2(IL-2)与干扰素(IFN)口的融合基因,并用癌胚抗原(CEA)基因启动子调控其在结肠癌细胞株中的靶向表达.方法分别用原核及真核表达载体,检测融合蛋白的表达情况.PCR,RT-PCR法扩增得到CEA启动子,IL-2cDNA,IFN/]c
2、DNA,应用原核表达质粒pGEX-5X-1,真核表达质粒pcDNA3.1/HisA,绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1,构建出原核表达质粒和真核表达质粒;SDS—PAGE电泳检测原核表达;用脂质体法将真核表达质粒转入结直肠癌细胞株Lovo(CEA高表达),HT-29(CEA低表达)和对照Hela细胞(CEA阴性),转染后分别以流式细胞仪,荧光显微镜,Western印迹等方法检测肿瘤细胞凋亡情况及蛋白表达情况.结果融合基因可在大肠杆菌及肿瘤细胞内表达融合蛋白;对肿瘤细胞有明显的杀伤作用;由cEA启动子调控的融合基因在Lovo细胞的表达高于HT-29细胞,在CEA阴性的He
3、la细胞中几乎不表达.结论CEA启动子可靶向性调控融合基因在肿瘤细胞的表达,具有协同作用的细胞因子融合蛋白可能有更强的抗肿瘤作用.【关键词】癌胚抗原;启动子;细胞因子;基因治疗;融合基因Constructionofeukaryotieandprokaryoticexpressionvectorsofinterlukin-2/interferonpfusiongeneregula—tedbycareinoembryonicantigenpromotorWANGYan,LjYan,CUIGang,eta1.DepartmentoJ'Gastroenterology,2nd
4、HospitalofChineseMedicalUniversity,Shenyang110004,ChinaC0rr5户0dgauthor:LJYah,Email:yanli0227@163.coin[Abstract]0bjectiveToobservetheexpressionofinterlukin-2(II.-2)andinterferon~(IFN/])incolorectaltumorcelllines,theprokaryoticandeukaryoticII;2/IFN/]fusiongenevectors,whichwasup-regulatedb
5、ycarcinoembryonicantigen(CEA)promoter,wereconstructed.MethodscDNAandIFN/]cDNAwereamplifiedbyRT—PCR,andthenfusedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX一5X一1oreukaryoticexpressionvectorpcDNA3.1/HisAorgreenfluorescentproteinexpressionvectorpEGFP—C1.Thefusionproteinexpressionoftheprokaryoticpla
6、smidwasidentifiedbySDS—PAGE.LOVO(highexpressCEA).HT29(1ow-expressCEA)andHelacells(none-expressCEA)weretransfectedbyfusion—gene-containingliposome.Theapoptosisofthesecellswasdetectedbyflowcytometryandflurescencemicroscopy,andtheexpressionoftheintracellularfusionproteinbyWestern-blotting.
7、ResultsE.coliexpressingvectorandtumorcelllinesbothcouldexpressII一2/IFN/]fusiongene.Thefusionproteinexer—tedsignificantkillingeffectoncolorectaltumorcells.ThefusiongeneexpressionwashigherinLovothaninHT一29.andwasalmostundetectableinnon—CEAexpressingHelacells,implyingCEApromotermi
