rp-hplc法测定栀子中西红花苷-1及西红花总苷含量

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1、RP-HPLC法测定栀子中西红花苷-1及西红花总苷含量摘要目的：同时测定27批栀子药材中栀子苷和西红花苷－1的含量。方法采用RP－HPLC法，ShimpackVP－ODS柱，水－甲醇梯度洗脱，检测波长440nm。结果和结论该方法简便、准确、重复性好，可同时测定栀子中西红花苷－1和西红花总苷含量。�关键词RP－HPLC栀子西红花苷－1西红花总苷��中国药典2005版规定栀子入药主要是茜草科植物栀子（GardeniajasmjnoidesEllis.）的果实，除此之外，各地均以栀子的变种小果栀子（G.jasmino

2、idesEills.var.radicansMakino.）大花栀子(G．jasminoidesEllis.Var.grandiflora6Nakai.)的果实入药。栀子主要有效成分为多种环烯醚萜苷类化合物和西红花苷类化合物，西红花苷类化合物，即西红花酸与不同糖基结合的一系列酯苷，西红花苷－1是主要成分。西红花苷类化合物是公认的对心血管系统有明显作用的化合物，然而，目前的栀子药材和栀子制剂对西红花苷类成分未进行控制［1］。由于药材栀子来源于多种植物，其品种不同，质量优劣差异很大，各种文献对其各个变种品质评价不一

3、致，笔者选择了二十七批栀子，用反相高效液相色谱法（PR－HPLC），以西红花苷－1对照品为标准对样品中西红花苷－1、西红花总苷含量进行测定，为栀子的优选提供科学依据。�1仪器与试剂�1．1仪器与试剂�ShimadzuLC－10ATvp高效液相色谱仪(LC－10ATvp泵、SPD－lOAvp紫外检测器、CTO－10Asvp柱温箱、SCL－10Avp系统控制器、Class－vp色谱工作站)，ShimpackVP－ODS柱(150mm×4．6mm,5μm，日本岛津)；BIY21lD电子天平(Sartorius，十万分

4、之一)；KQ32OO超声波清洗器(昆山超声仪器厂)；TU－1810型紫外分光光度计(普析通用)。西红花苷－l对照品(自制)，经过UV、IR、．1HNMR、13CN．MR、MS鉴定，HPLC测得含量为97％；西红花苷类化合物A、B、C、D自制，TLC为一个斑点。甲醇为HPLC级（浙江黄岩三力化工厂）；其余试剂为分析纯；水为双重蒸馏水(自制)。栀子药材来源见表l，经张浩教授鉴定。�1．2溶液的制备�栀子药材5O℃减压干燥24h，粉碎，过2O目筛，精密称取0．1g，置具塞锥形瓶中，精密加入水：甲醇(48：52)30m

5、l，密塞。超声处理20min，放冷，滤过，精密量取续滤液5ml，置l0ml量瓶中，加水：甲醇(48：52)定容，摇匀，即得供试品溶液。离心，冰箱冷藏备用。�6精密称取西红花苷－1对照品3．9mg，加流动相（水：甲醇＝48：52）溶解定容至10ml，摇匀，配成390μg/ml标准品储备液。取2．5ml加流动相（水：甲醇＝48：52）稀释至98μg/ml,作为西红花苷－1对照品溶液。所有对照品溶液冰箱中冷藏。�1．3色谱条件�本实验对流动相的组成、流动相的酸度、柱温、检测波长等进行了考察。确定色谱条件如下：色谱柱：

6、ShimpackVP－ODS柱(150mm×4．[KG-20x]6mm,5μm，日本岛津)；流动相：水―甲醇梯度洗脱(48：52至20：80)；洗脱时间50min；检测波长为440nm［2］；流速为1ml/min；柱温为35℃；进样量10μl。以西红花苷－1为对照品，采用外标法峰面积定量。在此条件下，样品中的被测组分与其他峰均能达到基线分离，西红花苷－1的保留时间为8min左右，化合物A、B、C、D（西红花苷类）的保留时间分别为15min、28min、33min、38min左右（图1）。�1．4方法学考察�1．

7、4．1标准曲线的制备6取西红花苷－1对照品溶液，按上述色谱条件，分别进样1、2、4、8、12、16μl，测定西红花苷－1峰面积，记录峰面积，测定三次，取平均值，结果以进样量(μl)为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：y=636692．88x-35921．094，R．2=0．99998，结果表明：西红花苷－1的进样量在范围0．098－0．1568μg时与峰面积呈良好线性关系，可用外标法峰面积定量计算含量。�1．4．2精密度试验精密吸取同西红花苷－1对照品溶液，连续测定6次，每次进样10μl，测得西红花苷

8、－1峰面积的RSD=1．005%，结果表明仪器精密度良好。�1．4．3稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，连续三天进样，每天进样两针，按上述色谱条件测得西红花苷－1峰面积的RSD=1．4238%；结果表明溶液稳定性良好。�1．4．4重复性试验平行制备5份同批供试品溶液，按上述色谱条件测得西红花苷－1峰面积的RSD=0．4636%。�1．4．5加样回收试验精密称取已知含量的供试品定量，西红