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1、HPLC法测定血浆中奥美拉唑及其人体药动学探究【摘要】目的建立测定人血浆中奥美拉唑的HPLC-UV法,测定健康志愿者口服奥美拉唑肠溶胶囊20mg后的药代动力学参数,并评价其与参比制剂的生物等效性。方法以乙醚提取血浆样品中的奥美拉唑,进行HPLC分析,20名健康志愿者交叉口服奥美拉唑肠溶胶囊试验和参比制剂20mg,用HPLC法测定血药浓度,计算主要药代动力学参数及相对生物利用度,以判断其生物等效性。结果在3.924～1962ng/ml范围内奥美拉唑与内标的峰面积比值与浓度呈良好的线性关系,以AUC0-12计算的供试制剂相对生物利用度为(99.4±13.8)%,受试奥美
2、拉唑肠溶胶囊的相对生物利用度(99.4±13.8)%。结论本文所建立的HPLC分析方法灵敏、准确、简便,临床实验的药动学统计数据表明两种奥美拉唑胶囊生物等效。【关键词】奥美拉唑;药代动力学;高效液相色谱法本实验通过测定血浆中奥美拉唑的浓度观察中国健康志愿者口服浙江双伟制药有限公司仿制的奥美拉唑肠溶胶囊(受试制剂)后的血药浓度经时过程,估算其相应的药代动力学参数,并以阿斯利康制药有限公司生产的奥美拉唑肠溶胶囊(洛赛克)为参比制剂,估算受试制剂的相对生物利用度,为临床用药提供参考。91实验材料1.1仪器Agilent1100液相色谱仪,含:双高压泵,自动进样器(带温控系
3、统),柱温箱,紫外检测器。色谱工作站:AgilentChemstation(A.10.02)。TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂);旋涡振荡混和器(上海医科大学仪器厂)。1.2药品和试剂奥美拉唑对照品由浙江省药品检定所标化,含量99.7%;尼美舒利对照品由浙江双伟制药有限公司提供,含量99.6%。奥美拉唑肠溶胶囊(浙江双伟制药有限公司,批号040320,20mg/粒,受试制剂)。奥美拉唑肠溶胶囊(洛塞克)(阿斯利康制药有限公司,批号0411005,20mg/粒,参比制剂)。甲醇(色谱纯,德国Merck公司);乙酸铵、冰乙酸、三乙胺为分析纯;水为去离子纯净水
4、。2实验方法2.1色谱条件色谱柱:LichrospherODS(25cm×4.6mm,淮阴汉邦科技有限公司);流动相:水(1%的冰醋酸+1%三乙胺)-甲醇(37�∶�63,V/V),流速:1.0ml/min,柱温:30℃,进样器控制温度:5℃,检测波长:302nm;进样量:10l。2.2血浆样品的处理于10ml离心管中精密加入内标溶液(10.52μg/ml尼美舒利甲醇溶液)50μl,以氮气流吹干,精密加入血浆样品1ml,旋涡3秒混匀,加入69ml乙醚,涡旋4min,于4000r/min离心10min,吸取有机相转移至另一10ml玻璃离心管中,于室温中氮气流吹干,加入
5、流动相100μl溶解残渣,于16000r/min离心2min,吸取上清液转移至自动进样器样品管中,进行HPLC分析。2.3数据分析将所得血药浓度-时间数据经自然对数转换后,用最小二乘法对尾段相回归计算消除速率常数k,C�max�及T�max�均为实测值;消除半衰期(t�1/2�)、曲线下面积(AUC)分别按下列各式估算:t�1/2�=0.693/k,AUC�0-96�=∑Ci+C�i-1�)•(ti-t｝)/2,AUC�0-∞�=AUC�0-96�+C�96�/k,其中C96为最后取样点浓度,k为末端消除速率常数。所得参数(T�max�、C�max�、A
6、UC�0-12�、AUC�0-∞�)用交叉试验设计的方差分析,其中C�max�、AUC�0-12�、AUC�0-∞�经自然对数转换后先进行方差分析,然后进行双单侧t检验(显著性水平α=0.05)。3实验结果3.1色谱行为及方法的专属性在本实验所采用的HPLC-UV条件下,奥美拉唑出峰时间在6.6min左右,内标出峰时间在9.5min左右。奥美拉唑和内标峰形良好,无杂峰干扰测定。本方法具有较高的特异性,能准确测定血浆中的奥美拉唑的浓度。93.2血浆中奥美拉唑标准曲线制备及灵敏度取10ml玻璃离心管数支,分别精密加入不同量的奥美拉唑标准液,加入空白血浆1ml,涡旋混匀,
7、配成含奥美拉唑分别为3.924、9.810、29.43、98.10、196.2、490.5、981.0、1962ng/ml的标准血浆,按“2.2”项下操作,计算奥美拉唑峰面积As和内标峰面积Ai的比值f(f=As/Ai),以f值对血药浓度(C)作权重回归计算,得回归方程。不同5d,每天做一条标准曲线,以f值的平均值对血药浓度(C)作回归计算,得回归方程:f=0.0021756×C+0.0002889(权重系数w=1/C,r=0.9998),按上述条件测得奥美拉唑在血浆中的最低定量限为3.924ng/ml(S/N≈10)。3.3回收率试验(绝对回收率)取10ml玻
