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1、紫杉醇改变FADD在食管鳞癌中表达【摘要】目的研究紫杉醇对人食管鳞癌细胞株Eca�109中Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociateddeathdomainprotein,FADD)表达的影响,探讨紫杉醇在食管鳞癌治疗中的作用机制。方法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇处理下，人食管癌细胞株Eca�109细胞凋亡率，同时采用Westernblotting分析细胞中FADD的表达变化。结果紫杉醇诱导人食管癌细胞株Eca�109细胞凋亡呈剂量依赖性;随着紫杉醇剂量的增加，实验组Eca�109细胞中FADD表达呈
2、显著增高。结论一定剂量的紫杉醇可以提高FADD在食管癌细胞中的表达、促进食管癌细胞的凋亡，这可能是紫杉醇治疗食管癌的分子机制之一。�【关键词】紫杉醇;食管癌;凋亡;FADD��ExpressionOfFADDinducedbyPaclitaxelInEsophagealSquamousCellCarcinomaWANGHong�mei，YANGYu�bai.TheCangxiPepole’sHospital,SichuanGuangyuan628400,China�【Abstract】ObjectiveToo
3、bservethechangesofFADDexpressioninesophagealcarcinomacell8109(Eca109)inducebyPaclitaxel.MethodsWithdifferentconcentrationofpaclitaxel,theapoptosisratesofEca109cellsandproteinexpressionlevelsofFADDinEca109cellsweredetected.ResultsTheapoptosisratesofEca109cel
4、lswereincreasedwithconcentrationofpaclitaxelrising,andproteinexpressionlevelsofFADDinEca109cellswereincreasesimultaneously.ConclusionPaclitaxelinducedEca109cellapoptosisviachangingproteinexpressionlevelsofFADD.�【Keywords】Paclitaxel;Esophagealcarcinoma;Apopt
5、osis;FADD�食管癌是常见消化道恶性肿瘤之一，其发病隐匿,确诊时大多已属于中晚期，使很多患者在手术前后需要接受化学治疗,以确保手术效果，同时化疗也为很多失去手术机会的患者提供了治疗的机会。紫杉醇品名为Taxol，最早是Wall和Wani于1963年从太平洋红豆杉的皮中提取得到［1］，经过临床试验后近年来已经广泛应用于临床包括食管癌在内的多种肿瘤的化疗中。紫杉醇可作用于细胞凋亡受体途径的Fas/FasL8通路或激活凋亡启动途径的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶系统(caspases),诱导细胞凋亡［2,3］，而F
6、ADD是Fas/FasL凋亡系统中的必需分子，不仅参与细胞凋亡过程的发生，还与细胞周期的调节有关。研究［4］证实从食管正常黏膜到不典型增生的组织中，FADD蛋白及mRNA表达呈现显著下降趋势。已有临床研究［5,6］表明紫杉醇联合顺铂、奈达铂、氟尿嘧啶等药物治疗食管癌,可以提高其总有效率,且毒副作用无明显增加，患者耐受性较好，表明紫杉醇在食管癌治疗中具有很高的临床应用价值。同时紫杉醇对人食管癌细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2-M期,并诱导肿瘤细胞凋亡［7］。但现有研究并没有对这一过程中食管癌细胞
7、中FADD的表达变化情况作进一步研究。�作者通过检测不同浓度紫杉醇诱导人食管鳞癌细胞株Ec-109细胞凋亡,并检测细胞表达FADD蛋白的变化情况，探讨紫杉醇抑制人食管癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制,为临床应用提供实验依据。�1材料和方法�1．1试剂与药物泰素(紫杉醇的商品名,由百时美施贵宝公司惠供,6g/L,分子质量853�9u)，RPMI1640培养液、0�05%的胰蛋白酶及小牛血清为Hyclone产品,AnnexinV（FITC）/PI凋亡检测试剂盒购于杭州隆基生物工程研究所,蛋白提取液购于Pierc
8、e公司，兔抗人FADD单克隆抗体及鼠抗人β-actin单克隆抗体购于Santa8Cruz公司，考马斯亮蓝试剂盒购于南京建成生物科技有限公司。�1．2细胞与细胞培养人食管癌细胞株Eca-109（ATCC）由上海麦莎生物科技有限公司代购。细胞接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液培养,生长于37℃含5%的CO�2孵箱中,待细胞生长至对数生长期开始实验。胰蛋白酶消化细胞后培养基重悬，调整细胞数为5
