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1、广西地区甘蔗黄叶病病毒分子鉴定安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2011,39【17):10156,10163责任编辑张杨林责任校对况玲玲广西地区甘蔗黄叶病病毒分子鉴定颜梅新,黄伟华,黄诚华(广西甘蔗研究所,广西甘蔗遗传改良重点实验室,广西南宁530007)摘要[目的]为广西甘蔗黄叶综合征(YLS)的分子检测和抗病育种提供参考.[方法]采集显症甘蔗叶样本,通过提取总RNA,利用引物P1/P2对样本逊行反转录RCR(RT.PCR)扩增,对广西地区甘蔗黄叶病的病原体进行分子鉴定.[结果]经引物P1/P2扩增出630bD的目的片段.氨基酸和核苷酸序列分析
2、结果表明,该片段是甘蔗黄叶病毒(SCYLV)外壳蛋白基因的一部分,与其他国家SCYLV分离物同源性达95%一99%.[结论]广西甘蔗黄叶病病原确是SCYLV,该病毒可能是近年从区外或境外传入的.关键词甘蔗;黄叶病;甘蔗黄叶病毒;分子鉴定中图分类号S132文献标识码A文章编号0517—6611(2011)17—10156—01MolecularIdentificationofSugarcaneYellowLeafVirusinGuangxiYANMei-xinetal(GuangxiSugarcaneResearchInstitute,GuangxiKeyLaboratory
3、ofSugarcaneGeneticImprovementNanning,Guangxi53o007)Abstract【Objective]rnlereferenceforthemoleculardetectionofsugarcaneyellowleaf(YSL)andthedisease—resistingbreedingofsugar—caneinGuangxiwasprovidedthroughtheresearch.[Method]TotalRNA,extractedfromthesamplewiththediseasesymptom,wasamplifiedwi
4、thspecificprimersP1/P2forRT—PCR.{ResuhlAdistinctfragmentofabout630bpwasamplified.TheanalysisofthenucleotidesequenceoftheRT—PCRproductwasfounditwastheparttheSCYLV.whichwas95%一99%identicaltosequenceoftheSCYLVisolatedfromothercountries.[Conclusion]ThevirusinfectingthesugarcaneinGuangxiwasiden
5、tifiedassugarcaneyellowleafvirus(SCYLV).KeywordsSugarcane:Yellowleafdisease:Sugarcaneyellowlearvirus;Moleeularidentification甘蔗黄叶综合征(YLS)是由甘蔗黄叶病毒(SCYLV)引起的一种新的全球性流行病害.该病于1989年在美国夏威夷首先被发现,当时不知道其病原,根据其黄叶症状称为甘蔗黄叶综合征.1990年以来,该病在世界多个甘蔗种植区发生,引起严重的产量损失.甘蔗黄叶病病毒仅分布于寄主韧皮部伴胞中,可由甘蔗蚜虫(Melanaphissacchari
6、),玉米叶蚜(Rhopalosiphummaidis)和水稻根际蚜虫(R.rufiabdomina一)传播,也可由感病的种茎传播..病毒粒体由蛋白质外壳及其包裹着的1条单链,正义的RNA(ssRNA)构成,该病毒在2000年发布的国际病毒分类委员会(ICTV)第7次报告上被命名为甘蔗黄叶病毒,属于黄症病毒科新成员.白发现SCYLV以来,几乎世界所有甘蔗产区都报道有该病毒发生或传人;近年来我国福建,广东,云南等省区亦有该病报道..笔者应用反转录PCR(RT—PCR)技术对广西地区甘蔗黄叶病的病原体进行鉴定,以期为广西甘蔗YLS的分子检测和抗病育种提供参考.1材料与方法1.1材
7、料2010年l0月从广西甘蔗研究所试验田采集典型YLS病症的叶片和无病症健康组培苗的叶片.采用天根生化科技(北京)有限公司的RNApreppure植物总RNA提取试剂盒抽提叶组织总RNA.1.2方法1.2.1RT.PCR扩增.RT.PCR扩增引物P1:5一aatcagtgca—cacatcegag一3;P2:5'-ggagcgtcgcctacctatt一3.RT—PCR用购自宝(大连)生物工程有限公司的PrimeScriptOneStepRT—PCRKitVer.2试剂盒进行,反应体系参照试剂盒说明,反应程序为:4
