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1、植物寄生线虫标本制作方法简介中国寄生虫学与寄生虫病杂志2006年12月第24卷增刊ChinJParasitolParasitDisDec.2006,Vo1.24,Suppl?S65'文章编号:1000—7423(2006)一Suppl一0065—04植物寄生线虫标本制作方法简介段玉玺.陈立杰【实验技术】【提要】本文介绍植物寄生线虫的标本制作方法.重点介绍临时玻片标本和永久玻片标本的制作,简要介绍植物寄生线虫的染色方法.这些方法对植物寄生线虫的分类鉴定和侵染特性研究具有重要意义.【关键词】植物;寄生线虫;标本制作方法中图分类号:$432.4
2、文献标识码:AProcessingMethodsofPlantNematodeSlidesDUANYu—xi.CHENLi—jie(PlantNematologyLaboratory,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,China)【Abstract】Theprocessingmethodsofplantnematodeslideswereintroducedinthispaper,includingtemporarymounts,permanentmountsandthestain
3、methodfornematode.Eachmethodwasdescribedstepbystepindetail.Thesemethodswereessentialtothestudyonclassification,identificationandcharacteristicsoftheplantnematode.【Keywords】Plant;Nematodes;SlideprocessingSupportedbytheNaturalResourcePlatformProjectfromMinistryofScienceandT
4、echnology(No.2005DKA21104)植物寄生线虫标本制作方法因工作性质,研究目的和要求的不同而不同.在调查虫口密度及观察一般形态结构时.常采用临时制片法制作标本.需要进一步观察或进行分类鉴定.则需要经过脱水制成永久玻片标本并长期保存.石蜡切片常用来观察线虫在植物体内的寄生和危害情况,以及植物组织发生的病理改变等…1.1临时玻片标本的制片方法临时玻片标本的制作方法简单快速.不需要特殊的仪器设备及药剂.有利于快速鉴定线虫的种类在制作临时玻片标本时.目前常用的浮载剂是水,3%甲醛或其他合适的固定剂如三乙醇胺.甲醛固定液(TAF)
5、,甲醛.冰醋酸固定液(FA),甲醛.冰醋酸.乙醇固定液(FAA)等均可.所用支撑物是5mm长的细玻璃纤维.最理想的支撑物直径应与所观察的线虫直径相近,以防止盖玻片压扁虫体.常用封片剂有亚麻子油.火棉胶等封片剂(Glyceel.英国商品名),指甲油,中性树胶,阿拉伯树胶或快干搪瓷等.也有用石蜡凡士林混合剂.该封片剂最早由Don.caster使用,配方为8份石蜡与3份凡士林.65℃下充分混匀后即可使用.石蜡凡士林混合剂具有固化速基金项目:科技部自然资源平台项目(No.2005DKA21104)作者单位:沈阳农业大学植物保护学院植物线虫学研究室
6、.沈阳llOl6l度快的优点.从带光源的双目体视显微镜下挑取线虫需要用挑针.挑针通常有毛针.可用竹签,细的尼龙丝等制成.也有现成的金属针[.竹签针的制作方法:截一段长15am,宽2～3am的竹片,一端用刀削成细的尖头.然后把这尖头在体视显微镜低倍镜下用刀细心削尖.直至末端尖头仅有几根纤维毛针的制作方法:织毛衣的竹针一端.在解剖镜下小心再削尖,削细.取眉毛一根.竹针尖端沾少许Zut(亚麻子油.火棉胶等封片剂.美国商品名)封固剂,将眉毛根部粘在竹针上.眉毛的末端部露出.干燥后即成1.1已经杀死与固定的线虫临时玻片标本的制作A.用吸管汲取一滴浮
7、载剂滴于洁净载玻片标本中央.液滴要小,使加盖玻片后浮载剂恰好铺满盖玻片所占的空间.而不溢出太多:B.将固定好的线虫移人浅培养皿中.而后移至体视显微镜下,用挑针将数条线虫(一般为5～l0条)逐条挑至载玻片中央的浮载剂中:C.将载玻片置于体视显微镜下观察.用挑针小心排匀沉于浮载剂底部的线虫:D.选取与线虫虫体直径相似的3根3～5mm左右的支撑物.均匀置于浮载剂边缘;E.细心将烤热的盖玻片盖于浮载剂上.应避免产生气泡:.$66.中国寄生虫学与寄生虫病杂志2006年12月第24卷增刊ChinJParasitolParasitDisDec.2006
8、,Vol-24,SupplF.在体视显微镜下用裁成小条的滤纸吸去多余的浮载剂.操作时应小心,避免线虫的移动;G.用封片剂封片.待封片剂干后,贴上标签,即可用于形态观察.1.2活线虫临时玻片标本
