复发性外阴阴道假丝酵母菌病分离株基因型与耐药性的研究

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1、复发性外阴阴道假丝酵母菌病分离株基因型与耐药性的研究　　摘要：目的探讨复发性外阴阴道假丝酵母菌病分离株基因型与耐药性。方法选择本院妇科的门诊及住院RVVC患者，收集时间为2013年11月～2014年10月共计100例，平均年龄（52.2±27.9）岁，对RVVC患者致病念珠菌进行白色念珠菌基因型分析，比较了不同白色念珠菌基因型对6种常规抗真菌药的MIC值及耐药性。结果80株为单一条带，大小为450dp，与A型标准菌株ATCC96113电泳条带相同，为A型；12株为840dp，为B型克柔假丝酵母菌ATCC6258；8株为450bp和840bp，为C型近平滑假丝酵母菌ATCC22019。不

2、含内含子组（B型与C型）白假丝酵母菌对5-氟尿嘧啶、咪康唑、克霉素、氟康唑、伊曲康唑的MIC值与含内含子组（A型）比较差异有统计学意义（P<0.05），两组白假丝酵母菌对咪康唑及5-氟尿嘧啶的耐药率差异有统计学意义，不含内含子组（B型与C型）更低（P<0.05）。结论不同白假丝酵母菌基因型别在体外试验中对不同药物的最低抑菌浓度和敏感率存在差异。因此，临床医生需重视临床真菌的检测，合理应用抗真菌药物，控制外阴阴道假丝酵母菌的重复感染。　　关键词：复发性外阴阴道假丝酵母菌病；耐药性　　复发性外阴阴道假丝酵母菌病（recurrentvulvovaginalcandidiasis，RVVC）是

3、由假丝酵母菌病感染引起的外阴阴道炎症，引起阴道瘙痒奇痒和外阴灼痛，是最常见的妇女外阴阴道炎症之一[1]。RVVC中的致病菌中白念假丝酵母菌约占85～95%，光滑假丝酵母菌占5～10%，热带假丝酵母菌占5%[2]。随着抗生素和抗真菌药物的广泛应用，阴道假丝酵母菌对抗菌药的敏感性逐渐降低，我们本次研究目的为调查复发性外阴阴道假丝酵母菌病分离株基因型与耐药性，现报道如下。　　1资料与方法　　1.1一般资料选择本院妇科的门诊及住院RVVC患者，复发性VVC诊断符合乐杰主编《妇产科学》第七版诊断标准[3]：1年中发作VVC≥4次，就诊阴道分泌物悬滴法镜检阳性。收集时间为2013年11月～2014

4、年10月共计100例，平均年龄（52.2±27.9）岁，对其行阴道分泌物的培养，分离念珠菌。　　1.2菌株鉴定及药敏试验采用美国临床实验室标准化委员会推荐的M27-A微量法测定白假丝酵母菌对6种抗真菌药物的敏感性。ATCC标准株：白假丝酵母菌ATCC96113、克柔假丝酵母菌ATCC6258及近平滑假丝酵母菌ATCC22019。　　1.3排除标准①孕妇、糖尿病、有长期服用免疫抑制药、抗生素及糖皮质激素的人群；②有各种急性、慢性感染，严重肝、肾功能不全，恶性肿瘤，自身免疫性疾病者。　　1.4DNA提取方法将标本送至华星医学检验中心。白假丝酵母菌分离株单菌落转种至堡葡萄糖培养基。37℃培养

5、36h，取标本放入离心管，加入蒸馏水洗涤，离心沉淀，加入80μLDNS溶液（0.25%mol/LEDTA，15mmolTris-Hcl，pH9.6）及去离子水，再离心取上清液，加入3mmol/L醋酸钠和异丙醇，离心后去上清液，加入75%的乙醇250μL，经琼脂糖凝胶电泳检测DNA含量和浓度。保存于-15℃备用。　　1.5PCR的扩增针对白假丝酵母菌25SrDNA编码区可转座I型内含子设计的特异性引物进行PCR扩增[4]。特异性引物由上海生工生物技术有限公司合成。将所有PCR产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳。　　1.7抗真菌药配置及MIC终点判定咪康唑、克霉素的浓度为32～0.03μL/ml

6、；氟康唑、制霉菌素的浓度为16～0.125μL/ml；伊曲康唑的浓度为32～0.03μL/ml；5-氟尿嘧啶的浓度为256～0.03μL/ml。敏感：5-氟尿嘧啶MIC≤0.5μg/ml，咪康唑MIC≤2μg/ml，伊曲康唑MIC≤0.25μg/ml，克霉素MIC≤1μg/ml，氟康唑MIC≤4μL/ml，制霉菌素MIC≤4μg/ml。耐药：5-氟尿嘧啶MIC≥32μg/ml，咪康唑MIC≥8μg/ml，伊曲康唑MIC≥2μg/ml，克霉素MIC≥8μg/ml，氟康唑MIC≥32μL/ml，制霉菌素MIC≥16μg/ml。　　1.6统计分析方法将资料录入SPSS13.0软件。计量资料采

7、用x±s描述，符合正态分布的采用t检验，非正态分布的数据采用非参数检验；对计数资采用频数描述，用χ2检验法。以P<0.05为差异有统计学意义。多因素分析：将单因素分析中P<0.05的变量纳入Logistic回归分析，计算优势比及95%可信区间。　　2结果　　2.1RVVC患者阴道白假丝酵母菌基因型分布对RVVC患者阴道内的白假丝酵母菌所提取的DNA作为模板，进行PCR扩增，将100株白假丝酵母菌分为3中基因型：80株为单一条带，大小为450dp