槲皮素对溶菌酶淀粉样纤维化的抑制作用

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1、槲皮素对溶菌酶淀粉样纤维化的抑制作用DOI:10.15873/j.cnki.jxit.2013.02.012第２８卷第２期Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．２徐州工程学院学报（自然科学版））ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ　ｇｙ（２０１３年６月Ｊｕｎ．２０１３严向阳，邢艳菲，李文涓，曾成鸣（）陕西师范大学化学化工学院，西安　７１００６２通过研究槲皮素抑制溶菌酶淀粉样纤维化及纤维的细胞毒性发现，槲皮素能够抑制溶菌　　摘要：溶解成熟的溶菌酶纤维，将淀粉样纤维转化成为无定形沉积，抑

2、制溶菌酶纤维酶的淀粉样纤维化，导致的溶血作用．槲皮素的这种作用与槲皮素－蛋白间的疏水相互作用相关，而与槲皮素的抗氧化作用无关．关键词：槲皮素；溶菌酶；淀粉样纤维化；细胞毒性；疏水作用）中图分类号：Ｒ２８４　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７４３５８Ｘ（２０１３０２００７９０６－－－蛋白质或者多肽在某些条件下可产生淀粉样变性形成纤维，沉积于细胞膜，可造成细胞损害，并最终导—————————————————————————————————————————————————————］１２－致细胞凋亡［目前已知有２如Ａ疯牛病、帕金森．０多种人类疾病与

3、蛋白淀粉样沉积有关，ｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ疾病、虽然与这些疾病相关的蛋白或者多肽序列上没有同源性，高级结构各不相同，但是它氏病及ＩＩ型糖尿病等．都富含β能特异地们经聚集形成的淀粉样纤维在显微结构上十分相似，－折叠结构和具有较强的表面疏水性，并改变这些化合物的光谱特性．蛋白质淀粉样纤维的这些性质与其细胞毒性密切相与一些化合物结合，］３４－关［蛋白淀粉样沉积是否是疾病的诱因，目前尚无定论，但已有的研究显示，抑制蛋白质淀粉样纤维化，溶．解或者破坏淀粉样纤维结构可能是治疗相关疾病的有效途径．天然多酚化合物是中草药中普遍存在的一类活性成分，具有多方面

4、的药效作用．我们最近的实验发现，［［５］６］）两种典型的多酚化合物Ｅ和槲皮素（可将蛋白质淀粉样纤维ＧＣＧ（ＥｉａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎａｌｌａｔｅＱｕｅｒｃｅｔｉｎ）　ｐｇｇ转变为无定形聚集体．其他的报道已经证实，一些多酚类物质可以抑制蛋白质的纤维化，并能够破坏成熟的７］纤维结构［这些作用可能与其多酚结构有关，也可能与其抗氧化作用或促氧化作用有关．．溶菌酶是一种具有抗菌作用的小分子蛋白，其突变体可引起家族性淀粉样变性疾病，是最具有淀粉—————————————————————————————————————————————————————

5、８］样纤维化倾向的蛋白质之一［溶菌酶蛋白家族具有高度的序列和结构保守性，作为该超家族的成员，鸡．９］卵清溶菌酶蛋白同样具有淀粉样纤维化倾向［本研究采用鸡卵清溶菌酶淀粉样纤维为体外实验模型，．探讨槲皮素对蛋白淀粉样纤维化以及对淀粉样纤维细胞毒性的抑制作用，以评估天然多酚化合物在这方面的潜在药效作用．１　材料与方法１．１　实验材料）和Ｔ，鸡卵清溶菌酶蛋白、槲皮素、购自８ａｎｉｌｉｎｏｎａｈｔｈａｌｅｎｅ１ｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ（ＡＮＳｈｉｏｆｌａｖｉｎＴ（ＴｈＴ）－－－　　ｐ，；其他化合物均为国产分析纯试剂；新鲜全血取自健康志愿者，枸橼酸Ｓ

6、ｉｍａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．ＬｏｕｉｓＭＯ，ＵＳＡ）－Ａｇ抗凝．１．２　实验仪器，，ＳｈｉｍａｄｚｕＵＶ２４５０分光光度计（ＫｏｔｏＪａａｎ）ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬＳ５５型荧光分光光度计（Ｗａｌｔｈａｍ，　－－　－ｙｐ，，，，ＭＡ，ＵＳＡ）ＳｈｉｍａｄｚｕＳＰＭ－９５００Ｊ３原子力显微镜（ＫｏｔｏＪａａｎ）ＨｉｔａｃｈｉＨ－６００透射电镜（ＴｏｋｏＪａ　－　－ｙｐｙ—————————————————————————————————————————————————————），，）ＳｈｉｍａｄｚｕＬＣ２０Ａ高效液相色谱仪（ＫｏｔｏＪａａｎ．ａ

7、ｎ　　ｙｐｐ收稿日期：２０１３０１２８－－，作者简介：严向阳（男，陕西商洛人，硕士，主要从事化学生物学研究．１９７８－）·７９·徐州工程学院学报（自然科学版）０１３年第２期　　２１．３　实验方法１．３．１　溶菌酶淀粉样纤维的制备［０］／（溶液，纤维的生长由鸡卵清溶菌酶２０ｍ０ｍＬ０．０１ｍｏＬＬ　ＨＣｌＨ２．０）６５℃水浴孵育１．　　ｇ溶于１ｐ不同孵育时间的溶菌酶聚集体和成熟纤维保存在４℃备用．ＴｈＴ和ＡＮＳ荧光检测．１．３．２　ＴｈＴ荧光检测／加至１中，再加入３取１０μＬ孵育的溶菌酶样品，０ｍｍｏｌＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ溶液（Ｈ８．０）０μ

8、ＬＴｈＴ溶液（１ｐ／），／使Ｔ振荡混匀后进行荧光分析，激发波长为４ＬｈＴ的终浓度为１０μｍｏｌＬ．４０ｎｍ，发射波长为４８４ｎｍ．ｍｍｏｌ１．３．３　ＡＮＳ荧光检测——————————————