游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)

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时间:2018-07-29

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1、八.饮料中游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合饮料中游离色氨酸的测定本方法检测限:饮料中游离色氨酸为30μg/100ml。(一)方法提要试样的游离色氨酸经处理后,在高效反相色谱C18柱上分离,紫外检测器或二极管阵列检测器检测,外标法定量游离色氨酸的含量。(二)仪器1.高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。2.超声清洗仪(溶剂脱气用)。3.天平(精确到0.0001g)。4.微孔滤膜(HF0.45μm)。(三)试剂1.1.0mol/L氢氧化钠溶液:称取4.0g氢氧化钠(分析纯),加适量去离子水并稀释到

2、100ml。2.甲醇(色谱纯)。3.0.1%(m/V)磷酸溶液:1.0g磷酸(分析纯)加水至1000mL,溶解混匀,过微孔滤膜0.45μm,待用。4.色氨酸对照品,Fluka公司(纯度≥99.5%)。5.色氨酸标准溶液:精密称取色氨酸对照品约0.0300g,移入100ml容量瓶中,加入少许水,再加入50μL1.0mol/L氢氧化钠溶液,超声溶解并用水定容到100mL,成浓度为300μg/mL的标准储备液。取标准储备液5.0mL用去离子水定容到50mL,成为浓度为30μg/mL的标准溶液。(四)测定步骤1.样品处理:①汽

3、水、可乐型饮料:取均匀试样置于小烧杯中,微温除去二氧化碳(或超声脱气10min),经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。②果汁类:取均匀试样置于离心管中,5000rpm/min离心20min,上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。2.标准工作曲线制作。精密吸取色氨酸标准溶液1.0,5.0,10.0ml,分别置于100mL容量瓶中,用水定容到100mL,摇匀。分别取10μL标准工作3系列溶液进样分析,以测得的色氨酸的峰面积,分别对色氨酸的浓度绘制标准曲线。3.色谱条件①色谱柱:UltimateC18液相色谱柱4.6

4、mmi.d.×150mm,5µm。②流动相:甲醇+0.1%磷酸溶液=18+82(V+V)。③流速:1mL/min。④柱温:35℃。⑤紫外检测波长:280nm。4.样品测定:取样品滤液10μL进液相色谱分离测定,根据色谱峰保留时间定性,外标峰面积法进行定量。标准色谱图(五)结果计算根据待测样品色谱峰面积,由标准回归方程式中得样液中游离色氨酸含量,计算出样品中的含量。试样中游离色氨酸含量按下式进行计算。X=式中:X——试样中游离色氨酸含量,单位为毫克每一百克(mg/100g);c——样液的浓度,单位为微克每毫升(µg/mL

5、);计算结果保留三位有效数字。(六)注释1.色氨酸的化学名称为L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸,分子式为C11H12N2O2。它为白色或微黄色结晶或结晶性粉末;无臭,味微苦。3在水中微溶,在乙醇中极微溶解,在氯仿中不溶,在甲酸中易溶,在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。色氨酸是一种必需氨基酸,它的作用主要有两个,即防止烟酸缺乏症和增加血清素水平。在所有氨基酸中,色氨酸被认为是特定食品中含量最少的。虽然稀少,色氨酸是非常必要的,因为它会由肝脏转换成维生素B3(烟酸和烟酰胺),这有助于防止烟酸缺乏症。色氨酸的作用还包括负责神经传

6、递素的生产。色氨酸作为一种血清素的初期形式,这种神经传递素负责控制睡眠模式,食欲和情绪。2.文中试剂如未注明规格,均指分析纯;所有实验用水,如未注明其他要求,均指三级水。参考文献[1]邓自西.高效液相色谱-二极管阵列检测法测定酵母浸膏中水解和游离色氨酸的含量[J].浙江农业学报,2003,15(05):310-313.3

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