资源描述：
《reach法规 第四卷译稿-15》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、B.12.诱变(性)－体外哺乳动物红血球测定1.方法这一个方法是经济合作暨发展组织TG474的哺乳动物红血球微核测定复制(1997).1.1.引言活的哺乳动物体内的微核测定用来发现对测定成分感应的的染色体有核红细胞的有丝分裂的物种如骨髓所抽取样品的红血球和/或外围设备动物的血球通常是啮齿动物老鼠。微核测定的目的要识别造成细胞生成的损害的物质是哪一部分造成的。微核的形成包含滞后的染色体碎片或整个的染色体。当骨髓有核红细胞进入一个多色的红血内发展的时候,主要部份被挤出;任何的微核已经被形成可能留在后面以别的方式收集细胞质微核在这
2、些细胞中被促进因为它们缺乏一个主要的核心。微核的频率增加的动物多色的红血球感应染色体的损害。老鼠的骨髓自多色的红血球以后通常被用于这一个测定。不成熟的微核的测量(多色的)周边的血红血球相等地是可接受的在任何的物种方面在无能要除去微核红血球的脾脏已经被示范,或已经显示一个合适的急性因素结构的或数字的染色体变异。微核可能被许多的标准区别。包括着丝点或微核中的着丝点DNA的出现确认或缺少。微核的频率不成熟的(多色的)红血球是那主要的端点。外围设备的成熟(正常染色质的)红血球的数字也包含在成熟的红血球的一个给定的数字之中的微核的血可
3、能被用如测定的端点，当动物不断地被对待达4个星期之久的时候或更多。活体体内微核测定的这一个哺乳动物尤其是与估定有关导致有机体突变的物质它允许考虑活体新陈代谢的因素，药物动力学的危险和DNA-修理处理虽然这些可能在物种之中改变遗传基因的端点。在活体测定中进一步的调查是也有用的。在体外系统中一导致有机体突变的物质被发现。如果有证据测定物质,或一个没有活性的新陈代谢产物,将不达到目标,使用这一个测定是不合适的。一般引言在部份B。1.2.定义着丝点(Kinetochore):是染色体上的一个区域，是细胞分裂时纺锤体连接的地方，从而允
4、许姊妹染色单体有序的运动到子细胞中。一个染色体的区域(s)由于纤维是在细胞区分期间联合,允许染色体的有秩序的运动到那细胞的杆。微核:小的核,分开和附加的到细胞的主要核,在有丝分裂末期有染色单体或整个染色体形成染色体碎片或全部的有丝分裂(减数分裂)的末期时候的染色体。正常染色质的红血球:成熟的红血球缺乏醋栗核蛋白质核糖体并且能够通过核糖体染色和未成熟的正常的红细胞区分开来。而且可能是不成熟的,多色的红血球对醋栗核蛋白质是选择的。多色的红血球多染性红细胞:不成熟的红血球红细胞,是红细胞形成中的一种状态，发展的一个中间的阶段,仍然
5、含有核糖体包含醋栗核蛋白质因此可能可以和成熟的红细胞区分开来被区别从成熟的,正常染色质藉着对醋栗核蛋白质是选择的污染红血球。1.3.测定方法的原则原理动物藉着一条合适的路径接受测定物质。如果骨髓被用,那动物在治疗测试合适的时侯被宰杀,吸取骨髓吸取,和制造而且沾染准备制备和染色（1）(2)(3)(4)(5)(6)。(7)当peripheralblood外围设备血被用的时候,血在治疗测试开始后合适的时侯被收集并且准备被做而且标记(4)(8)(9).(10)因为和周边的血用withperipheralblood研究,尽可能在最后一
6、次接触药品和细胞收集中间尽可能短的时间内收集血液一点的时间应该逝去在最后接触和细胞收获之间。分析配制品验证微核的存在准备出现分析微核。1.4.测定方法的描述1.4.1.准备1.4.1.1.动物物种的选择如果使用骨髓被用，推荐使用老鼠小鼠或大鼠被的推荐,虽然任何的适当哺乳动物物种可能被用。当血被用作外围设备体外进行血液测试时，推荐使用小鼠,老鼠被推荐。然而,任何的合适的哺乳动物的物种可能被用。但是一个物种作为提供一脾脏不除去微核红血球或一个已经显示合适的急性物种发现引起染色体在结构的或数目上发生字的染色体变异。实验室普遍通常使
7、用的过年轻的健康动物的实验室应该可以被使用。在研究中,各性别动物的重量变化应该是最小的并且不超过_20%。1.4.1.2.居住和饲养情况常用条件参考总引言B一般的情况要分开,B引言指的是的应用的尽管目标时,湿度气应该是50-60%。1.4.1.3.动物的准备健康的年轻成年的动物任意随机地被指定为对照组和治疗团体测试组。实验那些动物进行了个体的确认独特地被识别。动物对适应实验室的新环境至少为五天。应该采取特殊的方法笼应该被安排特殊的方法以致于使关进笼内动物可能产生的影响尽可能的作用被减少。1.4.1.4.剂量试剂的准备固体测定
8、物质应该在合适的溶剂或介质中被溶解或稀释,如果合适的,在选配动物之前。液体测定物质需被直接配制或在稀释之后配。测定物质需及时准备，除非数据的稳定性可以显示储存的可行性。1.4.2.测定情况测试条件1.4.2.1.溶剂/介质溶剂/介质在剂量水平下不应该产生毒性作用,而且不应该是和测定物质起化
