仙鱼汤对lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响

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1、仙鱼汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响作者：胡艳，曹洋，易华，谭开基，陈锐深【摘要】【目的】观察仙鱼汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响。【方法】选用C57BL/6J小鼠50只，腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞株复制肺癌模型，接种24h后随机分为5组：模型组，环磷酰胺（CTX）组（剂量为20mg·kg-1·d-1），仙鱼汤高、中、低剂量组（剂量分别为1.65、0.85、0.44g·kg-1·d-1）；14d后检测各组小鼠瘤体质量、抑瘤率、脾脏与胸腺指数、血清肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL6

2、）水平。【结果】仙鱼汤中、高剂量组可减轻瘤体质量，升高脾脏与胸腺指数，降低血清TNFα、IL6含量，与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）；仙鱼汤低剂量组可降低血清IL6含量（P＜0.05）；抑瘤率随着剂量的增加而逐渐增高。【结论】仙鱼汤的抗肿瘤作用可能与其能提高自身免疫功能从而抑制肿瘤生长有关。【关键词】仙鱼汤/药理学；肺肿瘤/中药疗法；肺肿瘤/免疫学；疾病模型，动物；小鼠9仙鱼汤是广州中医药大学第一附属医院肿瘤科陈锐深教授多年治疗肺癌的临床经验总结，临床观察发现具有提高患者的生存质量、稳定瘤

3、体的作用［1］。本研究观察了仙鱼汤对荷瘤小鼠免疫系统的影响，以进一步探讨仙鱼汤治疗肺癌的作用机理及途径，现报道如下。1材料与方法1.1动物C57BL/6J小鼠，雌雄各半，体质量18～22g，SPF级，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号：0020535）。1.2瘤株小鼠Lewis肺癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供，广州中医药大学第一附属医院中医肿瘤研究所长期移植传代。1.3药物及制备中药仙鱼汤方组成：仙鹤草15g，鱼腥草30g,猫爪草30g,山海螺30g，党参15g,三七片10g，山慈菇10g，浙贝母15g，

4、守宫5g，天冬15g，黄芪30g，炙甘草5g。由广州中医药大学第一附属医院加工，实验时用蒸馏水配制成所需浓度，制备后于4℃冰箱中贮存备用；环磷酰胺（CTX）注射用粉针剂为山西普德药业有限公司产品，批号：20060206，临用前用生理盐水溶解稀释浓度为2mg/mL。1.4试剂与仪器肿瘤坏死因子α（TNFα）、白细胞介素6（IL6）检测试剂盒采用晶美公司提供的美国进口试剂盒；NK3型自动分析酶标仪购自热电（上海）仪器有限公司。91.5Lewis肺癌荷瘤小鼠模型建立于液氮罐中取出Lewis肺癌细胞株1支，置于37℃电

5、热恒温水浴箱内，轻轻摇动令其尽快融化。取出冻存管，用酒精消毒后开启，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加体积分数10%小牛血清RPMI1640培养基，常规离心，制成瘤细胞混悬液，台盼蓝计数约1×107个/mL。消毒小鼠右前腋，取0.2mL（约1×106～2×106瘤细胞）接种于皮下。传代3次，在无菌条件下剥离Lewis肺癌小鼠皮下瘤块，选取生长良好的瘤组织，剪碎、称质量，用细胞匀浆，按体积比1∶3加生理盐水制成细胞混悬液，接种于C57BL/6J小鼠右前肢腋窝皮下，每只0.2mL。1.6分组及给药接种24h后随机分为5

6、组：仙鱼汤高、中、低剂量组，CTX组，模型组。仙鱼汤高、中、低剂量组分别予以0.4mL中药灌胃（剂量分别为1.65、0.85、0.44g·kg-1·d-1），CTX组予以0.2mL（剂量为20mg·kg-1·d-1）腹腔注射，模型组予以0.4mL生理盐水灌胃，均每天1次，给药14d。1.7肿瘤抑瘤率及脾脏、胸腺指数测定末次给药24h后，处死小鼠，分离剥取肿瘤，电子天平称质量，记录结果，计算各组小鼠平均瘤体质量及肿瘤生长抑制率：p抑瘤=（mmodel-mtreatment）/mmodel×100%。取脾及胸腺组织，电子天

7、平称质量并计算脾脏指数：w脾=m脾（mg）/mbody(g)×100%;w胸腺=m胸腺（mg）/mbody(g)×100%。91.8血清TNFα、IL6水平检测给药后第15天，小鼠眼球后静脉取血，离心，取血清。酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中TNFα、IL6的含量。严格按照试剂盒操作说明进行操作。1.9统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行数据处理。2结果2.1仙鱼汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用表1结果表明，仙鱼汤中、高剂量组及CTX组均可减轻瘤体质量，与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.

8、05或P＜0.01）。仙鱼汤组随着药物剂量的增加，瘤体质量逐渐减轻，抑瘤率随着剂量的增加而逐渐增高。表1各组对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑制作用统计方法：方差分析；①Ｐ＜０.０５，②Ｐ＜０.０1,与模型组比较2.2仙鱼汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫器官的影响仙鱼汤高、中剂量组的脾脏指数、胸腺指数与CTX组和模型组比较均显著性升高（P