去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定

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1、去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定作者：杨婷婷赵春城沈笑平谈伯昌邹盘坤王怀明刘凌云　韦超魏万里何金海吴杰张东升赵晓联【摘要】在低温条件下，去甲氯胺酮与琥珀醛酸反应，合成了半抗原羧基-去甲氯胺酮，电喷雾质谱鉴定结果表明，目标半抗原合成成功；通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原，红外光谱法鉴定结果表明，人工抗原合成成功，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定表明去甲氯胺酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联比为11∶1。经动物免疫，获得高效价特异性多克隆抗体，抗血清效价可达5.12×104。【关键词】去甲氯胺酮

2、；半抗原；人工抗原；合成；鉴定SynthesisandIdentificationofHaptenand　CompleteAntigenofNorketamineYＡＮＧTing-Ｔing，ZＨＡＯChun-Ｃheng，SＨＥＮＸiao-Ｐing，TＡＮＢo-Ｃhang，ZＯＵＰan-Ｋun，WＡＮＧＨuai-Ｍing,LＩＵＬing-Ｙun，WＥＩＣhao，ＷＥＩＷan-Li，HEJin-Hai，WUJie，ZHANGDong-Sheng，ZＨＡＯＸiao-Ｌian（JiangsuSUWEIMicrobiol

3、ogyResearchCo.，LTD.，Wuxi214063)(WuxiMunicipalPublicSecurityBureau，Wuxi9214002)(ZhenjiangMunicipalpublicSecurityBureau，Zhenjiang212001)(JiangyinMunicipalpublicSecurityBureau，Jiangyin214405)YanchengMunicipalpublicSecurityBureau，Yancheng224001)　AbstractUnderlow

4、temperatureconditions，thehaptencarboxyl-norketaminewassynthesizedbyreactingnorketamineandsuccinaldehydeacid.Identificationresultusingelectrosprayionizationmassshowedthehaptenwassuccessfullysynthesized.Theartificialantigenconfirmedbyinfraredspectroscopywasdev

5、elopedbyconjugatinghaptentocarrierproteinswithcarbodiimide(EDC)method.Matrix-assistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry(MALDI-TOF-MS)showedthattheratioofhaptentoBSAwas11∶1.Theantibodywithhightiter(5.12×104)wasproducedafterimmuningtorabbits

6、.　　KeywordsNorketamine；Hapten；Artificialantigen；Identification　　1引言9　　氯胺酮（Ketamine，KET）是一种通过静脉给药的短效麻醉剂，其进入血循环后大部分进入脑组织，然后再分布于全身组织中，肝、肺和脂肪内的药物浓度也较高。由于KET是毒品“K粉”的主要成分，近年来，其非法滥用现象严重。由于KET代谢的半衰期较短，摄入体内后，代谢生成去甲基氯胺酮(Norketamine，NKET)、去氢去甲基氯胺酮(Dehydronorketamine，DH

7、NK)，因此在生物检材（如血液、尿液、毛发等）中代谢物的含量比较高[1,2]，作为检测指标，KET代谢物(主要是NKET)的检测比KET的检测更加重要，而且对嫌疑人是否吸食KET的确认更加有效。目前，检测KET及其代谢物的分析方法主要有：气相色谱法（GC）、气-质联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）、液-质联用法（LC-MS）、高效毛细管电泳法（HPCE）酶联免疫吸附法（ELISA）等[3~11]。由于常规仪器分析不适于批量样品的筛选检测，关于NKET的免疫分析技术国内迄今尚未见相关报道。本文设计合

8、成了NKET的半抗原，并与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联得到人工抗原，经免疫新西兰大白兔后，获得高效价的特异性多克隆抗体，为建立NKET的免疫学检测方法提供了强有力的技术支持。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂　　Spectronic1.70紫外可见光分光光度计（意大利GBC公司）；Nexus670型傅立叶变换红外光谱仪（Nicolet公司）；VoyagerDESTR基