阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响.doc

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1、阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响作者：石明隽罗化肖瑛郭兵张国忠【摘要】目的：探讨阿魏酸钠（SF）对高糖诱导下原代肾小球系膜细胞（GMC）增殖的作用及其机制。方法：原代培养肾小球系膜细胞，分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24h、48h收集细胞。用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；免疫细胞化学检测p53和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的表达。结果：48h内，高糖促进GMC增殖并上调p38MAPK蛋白的表达，抑制p53的表达，SF能明显对抗高糖的这种作用，其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强。结论：SF可能是通过抑

2、制p38MAPK通路，促进p53的合成，从而抑制高糖诱导的GMC增殖。【关键词】糖尿病肾病；蛋白质p53；蛋白激酶类；肾小球系膜细胞；阿魏酸钠；p38丝裂原活化蛋白激酶［Abstract］Objective:Toinvestigatedtheeffectsandmechanismofsodiumferulate(SF)ontheproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucose.Methods:Theprimaryglomerularmesangialcellsweredividedintonormalgloucosegroup,

3、mannitolgroup,highgloucosegroupandhighgloucosegroupplusdifferentconcentrationofSFgroups.Cellswerecollectedat24hand48hofcultivation.CellproliferationwasmeasuredbyMTTassay.Expressionofp53andp38MAPKproteinswasdetectedwithimmunocytochemistrymethod.Results:Highglucosesignificantlypromotedmesangia

4、lcellproliferation,up-regulatedp38MAPKproteinexpression,anddown-regulatedp53expressionwithin48h.TheseeffectswereinhibitedbySFinaconcentration-dependentmanner.Conclusion:SFcaninhibitproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucosepossiblythroughsuppressingthepathwayofp38MAPKandincreasingthel

5、evelsofp53.［Keywords］diabeticnephropathies;proteinp53;proteinkinases;glomerularmesangialcells;sodiumferulate;p38mitogenactivatedproteinkinase糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）的发病机制较复杂，至今尚未完全明了，但长期的高血糖是引起DN的始动因素和中心环节［1］。肾小球系膜细胞（glomerularmesangialcells，GMC）为肾小球固有细胞，有实验证实高糖可刺激其活化，进而产生收缩、增生，合成并分泌多种炎

6、症介质和基质成分，促进肾小球硬化［2，3］。阿魏酸钠(sodium5ferulate,SF)是我国自行研制开发的新的非肽类内皮素拮抗剂，临床上可用于治疗慢性肾小球肾炎、肾病综合征和DN等疾病。2006年9月~2007年4月用原代培养GMC，观察SF对高糖环境中GMC增殖的作用及对p53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogenactivatedproteinkinase,p38MAPK)表达的影响，探讨SF对高糖诱导下GMC增殖的可能作用，为进一步阐明SF改善DN的作用机理，提供新的实验依据。1材料和方法1.1材料1.1.1主要试剂SF（吉林西点药业科技发展股份有限公司）

7、；甘露醇（石家庄四药有限公司）；MEM培养基（美国Gibco公司）；L-谷氨酰胺、4-甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶（美国Sigma公司）；胎牛血清(FCS，hyclone）；p53抗体、p38MAPK抗体、SABC试剂盒（武汉博士德生物有限公司）。1.1.2主要仪器设备CO2孵箱（美国REVCO公司；倒置显微镜(IX70)；酶标仪(美国BIO-RAD公司)；CM-2000B型生物医学图像分析系统(北京航空航天大学)。1.2方法1.2.1大鼠原代肾小球系膜细胞培养雄