Notch信号通路在TGF-β1诱导的胃癌细胞EMT中的作用

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1、学校代码１０４５９学号或申请号２０１５１２４６４０５５＃密级开＾ｆｋ硕士学位论文Ｎｏｔｃｈ信号通路在ＴＧＦ－β１诱导的（胃癌细胞ＥＭＴ中的作用作者姓名：张巍然导师姓名：何燕霞副教授学科门类：医学专业名称：临床检验诊断学培养院系：第三临床学院完成时间：２０１８年５月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheroleofNotchsignalingpathwayinEMTinduc

2、edbyTGF-β1ingastriccancercellsByWeiranZhangSupervisor:AssociateProf.YanxiaHeClinicalLaboratoryDiagnosticsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2018Notch信号通路在TGF-β1诱导的胃癌细胞EMT中的作用硕士研究生：张巍然导师：何燕霞副教授专业：临床检验诊断学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要胃癌是最常见的恶性肿瘤，尽管它在全球范围内的发病率呈下降趋

3、势，但其死亡率仍高居不下。临床运用了大量常规与靶向治疗，但多数胃癌病人被确诊时已出现肿瘤转移。因此，探究与肿瘤侵袭转移相关的重要信号通路及传导机制，将有利于胃癌的早期诊断及靶向治疗。Notch信号通路在遗传进化上十分保守，在细胞分化增殖、凋亡和干细胞的自我更新等方面发挥了重要作用。研究显示，它与肿瘤的侵袭、转移、复发、低生存率及不良预后等密切相关。近年来，大量研究证实它在上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）过程中也发挥了重要作用。Notch信号通路在相邻细胞间发挥作用，不需要第二信

4、使的参与。当Notch受体与邻近细胞膜上配体Jagged1结合而被激活后，释放Notch受体的胞内区域(Notchintracellulardomain,NICD)，后者继而转位于细胞核中，与转录复合体相互作用，激活Notch通路的下游靶基因。EMT是上皮来源的恶性肿瘤表达恶性行为的重要方式，在肿瘤侵袭转移方面发挥重要作用。其特征为：上皮细胞间连接被破坏，失去细胞极性，上皮细胞表型转化为间质细胞表型。除此之外，EMT过程最重要的改变是，它使肿瘤细胞获得更强的运动能力。上皮性标志基因E-cadherin的缺失是EMT事件的标志性变化，

5、间质性标志基因有Vimentin、N-cadherin等，可通过检测这些标记基因的表达水平来验证EMT的发生。研究表明，在肿瘤微环境中转化生长因子β1I（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）可以刺激血管生成、促进细胞外基质沉积并增加蛋白水解酶的合成。TGF-β1在细胞分化、增殖、凋亡及运动能力等方面发挥重要作用。它在各种病理条件下大量表达，如慢性炎症和肿瘤。多方研究证实，肿瘤微环境的改变如缺氧或TGF-β1增高，可以诱发多种类型的上皮细胞发生EMT。目前，Notch信号在胃癌上皮间质中的作用尚未阐明

6、，探讨其中的作用机制，或将有益于胃癌的诊疗。目的采用荧光定量PCR实验（Realtime-PCR）、免疫印迹实验（WesternBlot）和Transwell侵袭实验检测在空白对照组、诱导组、阴性转染组及转染组中Jagged1、N1ICD、E-cadherin和Vimentin等基因的表达量，以及处理前后细胞侵袭性的变化，初步探讨Notch信号通路在TGF-β1诱导的胃癌EMT中的作用及其对细胞侵袭性的影响。材料和方法1研究对象选择胃癌细胞株SGC7901，使用RPMI1640和FBS按9:1配置的完全培养基，将细胞置于37℃、5%

7、CO2的恒温培养箱进行培养。2方法待细胞生长至覆盖培养瓶底约80%时，将其随机分为四组，即空白对照组、诱导组、阴性对照组、转染组。其中，空白对照组不做任何处理，诱导组采用浓度为10ng/ml的TGF-β1诱导胃癌细胞24h，转染组瞬时转染Jagged1的siRNA，阴性对照组转染无义siRNA序列，转染组和阴性对照组转染48h后再用10ng/ml的TGF-β1诱导细胞24h。采用RealtimePCR实验检测各组中E-cadherin、IIVimentin及Jagged1mRNA的表达水平，用WesternBlot实验检测各组中E-

8、cadherin、Vimentin、Jagged1及N1ICD蛋白的表达水平。Transwell侵袭实验用于检测各组中细胞侵袭能力的变化。3统计学分析应用SPSS21.0软件进行数据处理及分析，用⎯x±s表述定量资料数据，两组间比较采