SNT2744-2010鸭病毒性肠炎检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!"##"!$%$鸭病毒性肠炎检疫技术规范$%&'&()*(+,'-)-.-/0-'1%.23*'%4+()+'*)*4!$%$5%%5$%发布!$%%5$&5$%实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２７４４—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（２００９版）中２．３．７章关于鸭病毒性肠炎的有关内容而制定：———修改采用了ＯＩＥ发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中病毒

2、分离鉴定、ＰＣＲ方法、微量血清中和试验的技术要求；———增加了ＯＩＥ发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中没有提及的荧光ＰＣＲ检测方法、直接荧光抗体试验、间接酶联免疫吸附试验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准的起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孟日增、石建平、王建华、肖成蕊、王伟利、王振国、刘晶。Ⅰ犛犖／犜２７４４—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售鸭病毒性肠炎检疫技术规范１范围本标准规定了鸭病毒性肠炎的病毒分离与鉴定、ＰＣＲ方法、荧光定量ＰＣＲ方法、免疫荧光试验、微量中和试验、ＥＬＩＳＡ等操作规

3、程及技术要求。本标准适用于鸭、鹅等水禽及天鹅（雁形目）鸭病毒性肠炎的诊断与检疫。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３概述鸭病毒性肠炎（ｄｕｃｋｖｉｒｕｓｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）又称鸭瘟（ｄｕｃｋｐｌａｇｕｅ），该病是由疱疹病毒科鸭瘟病毒引起的一种急性（有时呈慢性）鸭、鹅和天鹅（雁形目）接触性传染病，其特征为体温升高，两腿麻痹，下痢，流泪和部分病鸭头颈肿大。食道粘膜有小出血点，并有灰黄色假膜覆盖或溃疡，泄殖腔粘

4、膜充血出血水肿和假膜覆盖。肝有不规则大小不等的出血点和坏死灶。本病传播迅速，发病率和病死率都很高，严重地威胁养鸭业的发展。鸭病毒性肠炎的诊断方法包括临床综合诊断、病原学诊断、血清学试验和分子生物学检测。４诊断技术４．１临床综合诊断４．１．１临床症状自然感染的潜伏期一般为３ｄ～４ｄ，鸭群突然出现持续性高死亡率，病初体温升高（４３℃以上），呈稽留热。这时病鸭表现精神萎顿，头颈缩起，食欲减少或停食，渴欲增加，羽毛松乱无光泽，两翅下垂，两脚麻痹无力、走动困难，流泪和眼睑水肿是鸭瘟的一个特征性症状。同时病鸭下痢，排出绿色或灰白色稀粪，泄殖腔粘膜充血，出血水肿严重者粘膜外翻。用手翻开肛门时，可见

5、到泄殖腔粘膜有黄绿色的假膜，不易剥离。成年鸭死亡时膘情良好，死亡的鸭阴茎脱垂明显；产蛋鸭群在死亡高峰期产蛋明显下降；２周龄～７周龄商品雏鸭表现脱水、消瘦，喙发蓝，结膜炎、流泪、鼻腔有渗出物和泄殖腔有血染等特点。自然条件下鹅感染鸭瘟，其临床特点与鸭相似。４．１．２病理学检查鸭瘟眼观变化见败血症的病变，体表皮肤有许多散在出血斑，眼睑常粘连分泌干酪样物覆盖。部分头颈肿胀的病例，皮下组织有黄色胶样浸润。食道粘膜有纵行排列的灰黄色假膜覆盖或小出血斑点，假膜易剥离，剥离后食道粘膜留有溃疡斑痕，这种病变具有特征性。肠粘膜充血出血，以十二指肠和直肠１犛犖／犜２７４４—２０１０版权所有·禁止翻制、电子

6、发售最为严重。泄殖腔粘膜表面覆盖有一层灰褐色或绿色的坏死结痂，不易剥离，粘膜上有出血点和水肿。产蛋母鸭的卵巢滤泡增大，有出血点和出血斑，有时卵泡破裂，引起腹膜炎。雏鸭感染鸭瘟病毒时，法氏囊呈深红色，表面有针尖状的坏死灶，囊腔充满白色的凝固性渗出物，这些病变具有诊断意义。组织学变化，以血管壁损伤为主，小静脉和微血管明显受损，管壁内皮破裂。具有特征性组织学变化，见坏死的肝细胞发生明显肿胀和脂肪变性，肝索结构破坏，中央静脉红细胞崩解，血管周围有凝固性坏死。肝细胞见有核内包涵体。脾窦充满红细胞，血管周围有凝固性坏死。食道和泄殖腔粘膜上皮细胞坏死脱落，粘膜下层疏松，水肿，有淋巴样细胞浸润。胃肠

7、粘膜上皮见有核内包涵体。结合临床症状与病理学检查，可对本病作出初步诊断。４．２病毒分离与鉴定４．２．１材料和试剂４．２．１．１器材细胞培养瓶（或培养板）、吸管、移液器、二氧化碳培养箱、冷冻高速离心机、研磨器、倒置显微镜、Ｇ６玻璃滤器、孔径０．２２微孔滤膜。μｍ４．２．１．２水符合ＧＢ／Ｔ６６８２中一级水要求。４．２．１．３试剂胰酶消化液、细胞生长液、细胞维持液、双抗液分别见附录Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３、Ａ．４。４．２．１．４实验动物１日龄易感雏鸭、１０日龄～