维生素a对视黄素x受体β基因的诱导表达研究

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1、黑龙江农业科学2009(3)：1～2维生素A对视黄素X受体l3基因的诱导表达研究张冬杰(黑龙江省农业科学院畜牧研究所，黑龙江哈尔滨150086)摘要：采用RTuPcR技术检测分析了不同浓度的维生素A在猪的成纤维细胞内分别作用12、2,l和,18h后·视黄素X受体B基因(RXR~)的表达变化情况。结果表明：不同浓度的维生素A对RXR[~基因的作用效果不同，12h时，30．0。fI组可显著诱导RX基因的表达，24h时．10．0fg·td组可显著诱导RXRI3基因的表达，48h时，各组与对照组之间不存在差异。关键词：猪；视黄酸受体8基因；成纤维细胞；RT-Pt7R中

2、图分类号：$858文献标识码：A文章编号：1002—2767(2009)03—000102StudyofVitaminAontheExpressionofRetinoidXReceptorDGeneZHANGDong-jie(AnimalHusbandryResearchInstituteofHeilongjiangAcademyofAgriculturalSciences，Harbin，Heilongiiang150086)Abstract：Inthepresentstudy．RXRI3expressionlevelwasdetectedbyRT-P('Ri

3、nfibroblastcellsculturedindifferentcon—centratkmvitaminAmediaandcultured12．24，48h．respectively．TheresultsshowedthatdifferentconcentrationofvitaminAhaddifferentinducedeffect．30．0ug·IgroupcouldsignificantlyinduceRx邸expressionon12h，but10．0g。t,I-groupwason2,1h．everygrouphadnodifferencec

4、omparedwiththecontrolgroupon48h．Keywords：pig；RXR~；fibroblastcells；RTPCR维甲酸已被证明在脊椎动物的发育和调节体平衡基因为目的基因，研究了该基因在终浓度为0．5、5．0、方面有着重要作用。它的效应是通过专门的核受体蛋10．0、30．0g·L维生素A的作用下的表达变化白介导的，这些受体属于维甲酸／甲状腺激素受体超家情况。族。除了已被命名的RARa，8，7外，Mangelsdorf等1材料与方法又发现了另外一种核受体称为RXR(retinoidXrecep—1．1成纤维细胞体外培养tor)，这个受

5、体在配体结合区不同于其他3种RARs。在超净台上，用PBS液将所取的耳组织块漂洗3目前关于RARs的研究报道较多，但是关于RXRs的～5次，剪成1iTIITI3左右的小块，加入微量的含2O胎研究较少，主要是因为它自身不具备与维甲酸的高亲牛血清的DMEM／F-12(Gibco)培养液，于39℃饱和湿和力。用一个维甲酸反应元件和RAR对表达库进行度培养箱中培养5h左右，补加培养液，之后隔天顺序筛检，发现了一个与编码RXRa共同调节器非常换液1次。待细胞基本汇合后，吸去培养液，PBS清相似的cDNA，这个蛋白被称为RXRt?，它可以与RAR洗，加2mI消化液消化2～

6、3min，终止消化后，1000r形成异二聚体，启动子区包含维甲酸结合位点，可以优·min离心5min，制成细胞悬液，接种于直径60rnIn的先增加与它的DNA结合和转录活性。比较人和鼠的培养皿中培养，每2d更换1次培养液。待细胞传至第RX郫基因，发现在氨基酸水平上有97．6的一致性，3代后，加入维生素A(Sigma)，使其终浓度分别依次为在核酸水平上有91．6的一致性]。Fitzgibbon等0．5、5．0、l0．0、30．0ptg·“I，待生长到12、24和48h的将RXRG基因定位在6p21．3-p21．1上。时候，分浓度收获细胞，同时设1个阴性对照。本研

7、究以猪的成纤维细胞为实验材料，以RXR8l_2RT-PCR检测RXR81．2．1总RNA抽提使用TRIzol试剂盒(Invitro—收稿日期：20081226gen)提取制备总RNA，一8O℃保存。作者简介：张冬杰(1980一)，女．黑龙江省佳术斯市人．博士。助理研究1．2．2引物设计根据GenBank上已提交的RX员，主要从事猪的分子遗传育种研究。Tel：13845091493；E-mail：~zhang8109@163．conl。(AF053922)和~3-actin基因(内标基因)(UO7786)的序列l掌辩0幕黑龙江农业科学3期单管中进行。每样品2次重

8、复，同时用ddH2()分别。~的浓度分