酵母成分中蛋白质含量的测定

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1、河南化工·58·HENANCHEMICALINDUSTRY2011年6月第28卷第6期(下)酵母成分中蛋白质含量的测定窦明，李博(鹤壁职业技术学院，河南鹤壁458030)【摘要】对酵母抽提物中蛋白质的快速、简易测定方法的进行了研究。经实验分析，双缩脲法测定蛋白质最小检测含量至1．5g／L，平行相对偏差较小，此法操作简便，适合实验室快速测定。【关键词】酵母；抽提物；蛋白质；测定【中图分类号】0657．32【文献标识码】B【文章编号】1003—3467(2011)12—0058—02酵母抽提物主要成分为蛋白质、海藻糖、多种氨2结果与讨论基酸等，其成分复杂，根据蛋白质的性质和成分，测定

2、蛋白质含量的方法有两种j：一种是利用蛋白质2．1标准曲线绘制的共性，即含氮量、肽键和折射率测定蛋白质含量；取6支试管分别加入0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0另一种是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸碱性基mL标准牛白蛋白溶液，加蒸馏水至1mL，加入4mL团和芳香基团测定其含量。由于酵母抽提物中除蛋双缩脲试剂摇匀，在波长550nm处测定光密度。以白氮外，还有氨基酸等含氮物质，故凯氏定氮法L2J蛋白质含量为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲不适于作为本实验蛋白质含量的测定方法，需对蛋线。其结果如表1、图1。白质的快速、简易测定方法进行研究。表1蛋白含量和光密度关系标准溶液体积／m

3、L00．20．40．60．81．01材料和方法蛋白含量／g·L～01．83．65．47．29．01．1试剂和设备0D0．08O．10O．210．31O．41O．50酵母抽提物，湖北安琪酵母公司；牛白蛋白(BSA)、硫酸铜、酒石酸钾钠(AR)，中国医药上海化学试剂公司；微型高速离心机，南京实验仪器厂；721分光光度计，上海第三分析器厂。毽鲢1．2实验方法瑚试剂配制：准确称取标准牛白蛋白1．00g(蛋白质含量90％)加蒸馏水至100mL，配制成10L的标准牛白蛋白溶液。双缩脲试剂L3J：0．75g五水硫酸铜和3g酒石蛋rI质’量／g’IJ_1酸钾钠溶于250mL蒸馏水中，加人40％氢

4、氧化钠图l蛋白光密度标准曲线溶液37．5mL，摇匀定容至500mL。该标准曲线线性较好，可作为酵母抽提物中蛋测定：取酵母抽提物溶液0．5mL，加蒸馏水至1白质含量测定的标准曲线。mL，再加4mL双缩脲试剂，摇匀静置。20min，在2．2酵母抽提物蛋白质含量测定550nm波长下测定光密度L4J，从标准曲线上查得蛋称酵母9．154g，加蒸馏水定容至100mL，取三白质含量。支试管，分别取该溶液各0．5mL，加蒸馏水至1mL，收稿日期：201l—O6一l9作者简介：窦明(1974一)，男，讲师，从事化学研究工作，E—mail：yanghongxia5886063@163．tom。河南化

5、工2011年6月第28卷第6期(下)HENANCHEMICALINDUY·59·再加4mL双缩脲试剂，摇匀，静置20min后，在测定结果相对偏差小于3％，说明测定方法准确，相550nm波长下测定光密度，从标准曲线上查得蛋白对误差较小；蛋白质含量小于1．5g／L，相对偏差较质含量，结果如表2所示。大，准确度相对较差。在整个测定范围内，对测得的表2样品中蛋白质含量测定结果蛋白质含量和酵母抽提物浓度进行线性拟合得直线如图2。●∞＼结果可知，蛋白质含量为9．06g／L，相对偏差小d菩打于2％，准确度较高，换算到酵母抽提物蛋白质含量壤二为9．90％。日2．3酵母浓度对蛋白质含量测定的影响称

6、酵母9．241g，加蒸馏水摇匀定容至100mL，取配制的溶液分别稀释1～5倍，各取0．5mL，加蒸馏水至1mL，再加双缩脲试剂4mL，摇匀静置20图2蛋白质含量和酵母抽提物浓度关系曲线min后在550nm处测定光密度，求其平均含量和相由图可知，蛋白质含量和酵母抽提物近似线性对偏差，结果如表3所示。关系，故可用双缩脲法对不同酵母抽提物溶液中蛋表3酵母抽提物浓度与蛋白质含量白质含量进行测定。3小结凯氏定氮法是经典测定总氮的方法，准确、精密度高，但程序繁琐，费时长，有非蛋白氮干扰时测定偏差大；双缩脲法测定蛋白质最小检测含量至1．5g／L，平行相对偏差较小，此法操作简便，适合实验室快速测

7、定。参考文献：[1]马增春，高月，吕俊萍，等．双向凝胶电泳中三种蛋白质检测方法的比较[J]．中国生物化学与分子生物学报，2004，(4)：129—134．[2]王宗乾，程龙，邱小永，等．凯氏定氮法测定牛奶纤维蛋白质含量[J]．印染，2008，(12)：35—37．[3]郭颖娜，孙卫．蛋白质含量测定方法的比较[J]．河北化工，2o08，(4)：40—41．[4]沈萍萍，王朝辉，齐雨藻，等．光密度法测定微藻生物量[J]．暨南大学学报(自然科学与医学版)，2001，由实验结果可知，蛋白