《微生物的实验室培养》教案

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1、专题2Z>

2、

3、£:生物的实验室培养一、培养基的种类、营养和配制方法1.培养基按照可分为液体培养基和固体培养棊。在液体培养基屮加入凝固剂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成的。2.各种培养基一般都含有水、_源、_源和无机盐叫种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的（培养霉菌时需要将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至_或_性）、氧气的要求（根据微生物的需求提供有氧或无氧环境）、_物质（如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加等）。3.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）方法步骤

4、：、称呈、溶化、、。（2）倒平板操作的步骤：①将火过菌的培养皿放在的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，将迅速通过火焰。③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10〜20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。④等待平板，大约需5〜lOmin。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。【拓展】1、生物的营养碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如、NaHCCh等无机碳源；_、蛋白质、脂肪等有机碳源。异养微生物只能利

5、用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH、、N0NH、蛋白质、氨基酸等。只有才能利用N2。2、几种微生物的营养能量來源微生物类型碳源氮源能源大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物有机物硝化细菌肌肌根瘤菌糖类等有机物有机物固氮蓝藻n2有机物3.培养基的种类分类方式名称用途按性质分固体培养基分离、记数、鉴定液体培养基生产按营养成分分天然培养基（成分不明）生产金盛培养基（成分明确）分类、鉴定按用途分选择培养基分离菌种鉴别培养基（如含伊红和美蓝试剂的培

6、养基可用来鉴别大肠杆菌，菌落呈深紫色，带有金属光泽）鉴别不同种类微生物4.确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温1〜2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。二、无菌技术1.获得纯净培养物的关键是防止外來的入侵，要注意以T几个方面:①对实验操作的、操作者的和进行和。①将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行。①为避免周围环境中微生物的污染，应在酒精灯附近进行。②实验操作时应避免处理的材料用具与的物品相接触。1.消毒与灭菌的区别消毒指使用较为的或方

7、法仅杀死物体表而或A部一部分对人体_的微生物(不包括和)。消毒方法常用消毒法，还有化学药剂(如洒精、氯气、、等)消毒、消毒。火菌则是指使用_灭菌、灭菌、.的理化因素杀死物体内外.灭菌。.的微生物，包括_【拓展】1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还能有效避免操作者自身被微生物感染。培养细幽用的培养基与培养皿、玻棒、试管、烧瓶和吸管需要灭菌：实验操作者的双手需要消毒。2.倒平板无菌揀作的注意事项(1)瓶口通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(2)平板冷凝后，ITT1

8、盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表而的湿度也比较将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用这个平板培养微生物。(4)操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养勉：在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者、(5)在灼烧接种环之后

9、，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太髙，杀死菌种。(6)涂布平板的所有操作都应在酒精灯火焰附近进行。平板划线与系列稀释的无菌操作要求：操作的各个细节保证“无＞”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。三、纯化大肠杆菌以及菌种的保藏1.纯化大肠杆菌(1)微生物接种的方法最常用的是法和法。(2)平板划线法是通过在琼脂固体培养基表而的操作。(3)稀释涂布平板法是将进行一系列的稀释，然后将不同稀释度的飽液分别涂布到培养基的表面，进行培养。分为和

10、两步。(4)川平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物成单个，从而能在培养基形成单个的c(5)平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上，直到接种环。②在火焰旁接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞。③将通过火焰。④将的接种环仲入菌液中蘸取一环菌液。⑤将通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条，盖上皿盖。注意不要划破。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意将最