硼替佐米抑制核因子

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1、硼替佐米抑制核因子：周伟民，金培英，平金良，钱福初，张国雷　【摘要】目的?：探讨硼替佐米对核因子-κB(NF-κB)活化的干预作用及对人LOVO细胞增殖的影响。方法：体外培养人LOVO结肠癌细胞并给予不同浓度的硼替佐米，以TT法和AnnexinV-FITC/PI双色标记法分别检测细胞增殖和细胞凋亡的变化。结果：硼替佐米作用LOVO细胞后，胞浆IκBα和NF-κB的水平逐渐上升，而胞核NF-κB的水平明显降低(P?<0.01)，并呈一定的浓度依赖性，高浓度时作用最明显(P?<0.01)

2、;硼替佐米能明显抑制LOVO细胞的增殖，并呈一定的剂量和时间依赖性。随着硼替佐米浓度的上升，细胞凋亡率明显增加(P?<0.01)。结论：硼替佐米通过抑制IκBα的降解能有效地干预NF-κB活化，抑制LOVO细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。【关键词】硼替佐米;结肠肿瘤;核因子-κB;LOVO;凋亡　Abstract:?Objective:ToinvestigatetheinfluencesofLOVOcellsoftheinterventionofnuclearfactor-κB(NF-κB)

3、activationbybortezomibontheproliferation.Methods:LOVOcellsib.TheexpressionsofIκBαandNF-κBelinkedimmunosorbentassay，respectively.Thechangesofcellgroib-treatedcells，theexpressionsofIκBαandNF-κBincytopalsmanner(P?<0.01)，osteffectiveattheconcentration

4、of80nmol/L(P?<0.01).BortezomibsignificantlyinhibitedtheproliferationofLOVOcellinadose-?andtime-dependentmanner.ThepercentageofapoptoticcellsinbortezomibgroupibcaneffectivelyinterveneNF-κBactivationinLOVOcellsbysuppressingthedegradationofIκBα，inhib

5、ittheproliferationofLOVOcellsandinducecellapoptosis.　　Keyib;coloncarcinoma;nuclearfactor-κB;LOVO;apoptosis　　核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)是具有多向性调节作用的转录因子，参与细胞增殖与凋亡的调节，并且能直接影响细胞周期或DNA复制，从而参与体内多种生理和病理的过程。激活的NF-κB在炎症相关性结肠癌的发生发展中呈高表达，在慢性肠道炎症和癌变之间起桥梁作用[1]

6、。硼替佐米(万柯，PS-341)是一种蛋白酶体抑制剂，主要用于治疗多发性骨髓瘤，其中的机制之一在于它能明显抑制NF-κB信号通路的活化[2]。因此本研究以不同浓度的硼替佐米作用LOVO结肠癌细胞株，探讨硼替佐米对NF-κB活化的干预作用及对LOVO细胞增殖的影响。　　1??材料和方法　　1.1??实验对象与主要试剂??人LOVO结肠癌细胞株，由南京凯基生物科技发展有限公司提供。硼替佐米(Millennium，美国)购自西安杨森制药公司;DMEM及胎牛血清(GibcoBRL，美国)购于Hyclon

7、e公司;MTT、Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒、细胞核蛋白与浆蛋白抽提试剂盒及BCA蛋白浓度测定试剂盒均购自碧云天生物技术研究所;人NF-κBELISA试剂盒(Cusabio，美国)购自武汉华美生物技术有限公司。兔抗人NF-κB(P65)一抗、兔抗人IκBα一抗、鼠抗人β-action一抗、HRP-羊抗兔二抗、HRP-羊抗鼠二抗、PVDF膜及SDS-PAGE凝胶配制试剂盒均购自碧云天生物技术研究所。　　1.2??实验方法　　1.2.1??细胞培养及分组：LOVO细胞常规复苏后，以完全

8、培养液(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM培养液，简称完培)在37℃、5%二氧化碳及100%湿度的条件下培养。适时传代，取对数生长期细胞进行实验。将细胞分为实验组和对照组，每组设三个复孔。以完培溶解硼替佐米，稀释成10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L、80nmol/L和160nmol/L五个浓度梯度。　　1.2.2??MTT法：以每孔104个细胞接种96孔培养板。常规培养24h后弃去培养液，加入含有硼替佐米的完培100μL。在此后的24h、4