动物性食品中2-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法

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1、DB  北京市食品安全地方标准DB11/XXXXX—XXXX     食品安全地方标准动物性食品中a2-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法     （征求意见稿）     XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施北京市卫生和计划生育委员会   发布DB11/XXXXX—XXXX前  言本标准为首次发布。主要起草单位：北京市疾病预防控制中心。主要起草人：范赛、赵榕、吴国华、张楠、刘平、刘伟、李丽萍、柳静、赵海燕、赵旭东、陈忠辉等。1DB11/XXXXX—XXXX食品安全地方标准动物性食品

2、中a2-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了6种a2-受体激动剂的液相色谱串联质谱的检测方法。本标准适用于猪牛羊肉制品中6种a2-受体激动剂的测定。2原理动物性食品样品经酶解提取后，经MCX柱净化，浓缩复溶后经液相色谱/串联质谱仪测定，结合内标法峰面积定量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH，色谱纯）。3.1.2乙酸（CH3COOH，色谱纯）。3.1.3氨水（NH3·H2O，优级纯，浓度25

3、％～28％）。3.1.4甲酸甲酸(HCOOH，色谱纯，99%)。3.1.5乙酸钠（NaAc·4H2O，色谱纯）。3.1.6盐酸（HCl，分析纯）。3.1.7β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶（β-Glucuronidase/Arylsulfatase，100000unit/mL）。3.1.8混合型阳离子交换固相萃取小柱(500mg,6mL,WatersCo.)（或其他公司等效柱）。3.2试剂配制3.2.10.1％甲酸水溶液：量取1mL甲酸，用纯水定容至1000mL。3.2.23%甲醇氨溶液：量取3mL

4、氨水，用甲醇定容至100mL。3.2.3乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH5.2）：称取43.0gNaAC·4H2O，加入25mL乙酸，用水溶解并定容到1000mL，用乙酸调节pH到5.2。3.2.41%盐酸甲醇：量取盐酸1mL,用甲醇定容至100mL。3.3标准品3.3.1a2-受体激动剂标准标准品：可乐定（Clonidine）、赛庚啶（Cyproheptadine）、溴莫尼定（Brimonidine）、替扎尼定（Tizanidine）、胍法辛（Guanfacine）、胍那苄（Guanabcnz）。以上

5、各标准品的纯度均大于90.0%，购自sigma公司。3.3.2a2-受体激动剂内标1DB11/XXXXX—XXXX同位素内标标准：D4-可乐定（D4-Clonidine）、D4-溴莫尼定（D4-Brimonidine）、D4-替扎尼定（D4-Tizanidine）、C13-N15-胍法辛（C13-N15-Guanfacine）。以上标准品均购自TRC公司3.4标准溶液配制3.4.1标准储备溶液：精确称取3.3的标准品各0.0100g，分别用甲醇溶解并定容至10mL，浓度为1000mg/L，-18℃

6、冰箱中保存，有效期24个月。对于同位素标准品，直接用1mL甲醇溶解，制成10mg/L的标准溶液，有效期24个月。3.4.2中间标准工作液：根据需要，用甲醇将标准储备溶液（3.4.1）配制为适当浓度的标中间准工作液。标准工作液应使用前配制。1仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪。4.2色谱柱：DIKMALeapsilC18色谱柱（2.7µm，2.1*100mm）。4.3电子天平：感量0.001g。4.4组织匀浆机。4.5漩涡混合器。4.6冷冻离心机（最大转速高于10000r/min）。4.7酸度

7、计（0.01）。4.8氮吹仪。4.9固相萃取装置。4.10超声清洗仪。2分析步骤5.1试样制备5.1.1样品制备制样操作过程中必须防止样品污染或残留物发生变化。动物肌肉、肝脏、肾脏从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，剔除筋膜，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18°C以下冷冻存放。5.1.2样品提取及酸解精确称取匀浆的动物肌肉（肝脏或肾脏）样品约5.0g，加入浓度为100mg/L的氘代同位素标准溶液20μL，加入醋酸－醋酸钠缓冲溶液（pH=5.2）5mL，加入

8、5μL的β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混均，37℃水解过夜，冷却至室温；加入1%盐酸甲醇20mL，涡旋混均后超声提取30min，以12000转4℃离心10min。沉淀加入2mL纯水，8mL1%盐酸甲醇，涡旋混均，重复提取一次。合并提取液，以12000转0℃离心10min。取上清液，待进行混合型阳离子交换柱的净化处理。5.1.3净化WatersOasisMCX柱依次用6mL甲醇、6mL水活化后，将提取液上MCX柱，弃去流出液，依次用3mL纯水、3mL1%盐酸甲醇淋洗，抽真空使柱