实验四麦芽糖化力的测定

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1、实验四麦芽糖化力的测定一、实验目的1、掌握麦芽糖化力的定义；2、掌握碘量法测定还原糖的原理和方法。二、实验原理麦芽浸出液中存在多种酶，其中能够水解淀粉质多糖的糖苷键形成低聚糖和单糖等产物的一类酶统称为淀粉酶（α-淀粉酶，β-淀粉酶）。糖化力是指所有淀粉酶水解淀粉成为单糖或双糖的能力。淀粉酶水解淀粉生成含有自由醛基的单糖或双糖，醛糖在碱性碘液中定量氧化为相应的羧酸。剩余的碘，酸化后以淀粉作指示剂，用标准的Na2S2O3溶液滴定。主要反应如下：1、淀粉在麦芽浸出液中的淀粉酶的作用下，水解成含有醛基的单糖或双糖；(C6H10O5)n+nH2O淀粉酶nC6H12O62、醛糖在碱性碘液中定量氧化为相应的

2、羧酸；I2+2NaOHNaIO+NaI+H2OCH2OH(CHOH)4CHO+NaIOCH2OH(CHOH)4COOH+NaI3、过量未作用的NaIO在碱性条件下发生歧化反应；3NaIONaIO3+2NaI4、加入酸，使NaIO3和NaI在酸性条件下发生氧化还原反应，析出过量的碘；NaIO3+5NaI+3H2SO43I2+3Na2SO4+3H2O5、析出的碘以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液滴定。2Na2S2O3+I2Na2S4O6+2NaI三、实验材料与试剂1、样品可溶性淀粉；麦芽粉2、器材电子天平（0.1mg）；电热恒温水浴锅；容量瓶；酸碱滴定装置。3、试剂乙酸钠；冰乙酸；硫代硫酸钠

3、；碳酸钠；重铬酸钾；碘化钾；可溶性淀粉；碘液；氢氧化钠；硫酸。2%可溶性淀粉溶液：称取预先在100-105℃干燥的可溶性淀粉10.000g，加入少量水调成糊状，在不断搅拌下注入300mL沸水中，将残余淀粉糊用少量蒸馏水洗入沸水中，继续煮沸至透明，迅速冷却到20℃，在20℃用水定容至500mL。乙酸-乙酸钠缓冲液：量取30mL冰乙酸，加水稀释并定容至1000mL，另称取34g乙酸钠，加水溶解并定容至500mL，将两溶液混匀备用。1mol/LNaOH标准溶液：称取40gNaOH，用水溶解并定容至1000mL。0.1mol/L碘溶液：称取36gKI溶于50mL水中，在不断搅拌下加入13gI2，完全溶

4、解后定容至1000mL，贮于棕色瓶中，密闭，避光保存。0.5mol/LH2SO4溶液：量取2.8mL浓H2SO4，缓慢倒入适量水中，定容至100mL。2mol/LHCl溶液：量取17mL浓HCl，倒入适量水中，定容至100mL。0.5%淀粉指示剂：称取0.5g可溶性淀粉，用少量水调匀，注入80mL沸水中，继续煮沸至透明，冷却后定容至100mL（临用前现配）。0.1mol/LNa2S2O3标准溶液的配制：称取25gNa2S2O3·5H2O和0.1gNaCO3，溶于刚煮沸冷却后的蒸馏水中，并定容至1000mL，贮于棕色瓶中，在暗处放置3-5天后标定。四、实验步骤1、Na2S2O3溶液的标定称取于1

5、30℃干燥2h的K2Cr2O7两份，每份0.15g，分别置于2个碘量瓶中，用25mL水溶解，加KI2g，2mol/LHCl溶液5mL，摇匀，于暗处反应10min，加水150mL，立即用待标定的Na2S2O3溶液滴定至浅黄色，加入3mL0.5%淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色时（蓝色消失）为终点。Na2S2O3标准溶液的计算：c(Na2S2O3)=6m/MV×1000式中：c(Na2S2O3)----标定后Na2S2O3溶液的浓度，mol/L；m----K2Cr2O7质量，g；V----滴定消耗的Na2S2O3溶液的体积，mL；M----K2Cr2O7摩尔质量，g/mol。2、麦芽浸出

6、液的制备称取粉碎麦芽粉20g，置于已知质量的糖化杯（或烧杯）中，加入约20℃蒸馏水480mL；将烧杯置于40℃水浴锅中，搅拌，水浴1h，浸出淀粉酶。取出烧杯，冷却至20℃，加20℃蒸馏水使其净重为520g，摇匀，用滤纸过滤，滤液供分析用。3、糖化取4个200mL的容量瓶，编号，其中1、2号作样品测定用，3、4号作空白测定用，每瓶加入2%可溶性淀粉溶液100mL。向1、2号瓶中加入乙酸-乙酸钠缓冲液10mL，摇匀，在20℃水浴中保温20min后，加入5mL麦芽浸出液，摇匀，在20℃水浴中保温糖化30min，保温时间从加入麦芽浸出液算起。糖化结束，立即加入4mL1mol/LNaOH溶液，以终止酶的

7、活动，摇匀，用水定容至200mL。向3、4号瓶中，加入0.65mL1mol/LNaOH溶液，摇匀，再各加5mL麦芽浸出液，摇匀，用水定容至200mL。4、酶活力的测定从以上4个容量瓶中分别吸取反应液50mL，分别加入4个250mL的碘量瓶中，再分别加入25mL0.1mol/L碘液和3mL1mol/LNaOH溶液，摇匀，盖塞，在暗处放置15min，以氧化还原性的糖。反应结束后向各瓶中分别加入4.5m